影响鸡新城疫HI抗体检测的因素分析

张永康 （宁夏职业技术学院生命科学技术系 宁夏 银川 750021）

影响鸡新城疫HI抗体检测的因素分析

张永康 （宁夏职业技术学院生命科学技术系 宁夏 银川 750021）

新城疫也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，是由病毒引起的鸡和火鸡急性高度接触性传染病，常呈败血症经过。主要特征是呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血，是严重危害养鸡业的重要疾病之一[1]。红细胞血凝抑制试验( HI)是监测ND 免疫状态的一种简便、快速的血清学方法, 但影响因素较多。为提高新城疫HI抗体测定的准确性，现就鸡新城疫抗体监测中几个应注意的问题提出来和大家一起探讨。

1 温度的影响

监测时如若室温高时，HA、HI试验反应速度加快，同时红细胞的解凝时间也变短；当室温低时可出现相反的结果。当室温过高时配制的各种试剂应及时放置于4℃冰箱中保存，使用时再取出来。另外由于反应的速度加快，因此判定的时间也要相应的提前。不可在接近解凝时才判定，否则测出的HI 抗体水平会升高。当冬季温度低时可延长HA 和HI 的反应时间，或者把反应板置37℃培养箱中，可解决温度过低造成的影响。

2 抗原的影响

当抗原比较陈旧时，抗原对红细胞的凝集能力下降，凝集后解凝时间也变短，因此一般要用新的抗原。

3 鸡红细胞的浓度的影响

有的使用1%的红细胞悬液，有的使用0.5%的红细胞悬液。不管是1%或0.5%的红细胞悬液，都要配置准确。相对红血球浓度大时，测出的HI值相对较小，而红血球浓度稀时，则测出的HI值相对较大一些。在新城疫HI监测中，红细胞的浓度要求为1%或0.5%。离心时要控制在一定的时间和一定的离心速度，这样配出的红细胞悬液才能准确。另外，在使用前必须把红细胞混匀，并不时的摇动。

4 血清的影响

被检血清如有陈旧、溶血、变质现象，就会影响实验结果，使结果出现偏差。被检血清要求足量、新鲜、色清、无杂质、无溶血现象。置清洁无菌的血容器, 操作时每批样品用生理盐水和标准阳性血清作阳性和阴性对照, 防止判定偏差。目的是为了读取HI 抗体滴度时, 时间上有一个较正确的判定依据。即对照孔的红细胞达到完全凝集时，进行判读。

5 反应板清洁程度的影响

反应板用的时间长了，洗刷不及时或洗刷不彻底，有时使反应前后跳孔，无法判定结果，因此洗刷反应板时一定要细心。使用前要检查一下反应板是否清洁。保持反应板清洁的方法是：在试验做完后，要及时用水进行冲洗和甩干，反复两次甩干后，V型孔的孔底无任何沉积物，方可干燥后使用，干燥时最好翻转反应板以保持V型孔底无沉积物。使用数次的反应板应用蒸馏水浸泡过夜。对脏的反应板应先用1%盐酸处理，再用1%火碱处理，最后用自来水漂洗，用蒸馏水浸泡过夜后烘干备用。

6 移液器的影响

在使用过程中，移液器常引起移液量的不准确，有时吸取的量不够，有时排液量不充分，都影响监测的结果。移液器在使用时要注意量的准确，移液器嘴要紧，使用前在液体中反复吸排，吸排量相等，吸嘴内无液体滞留者为好用的，若吸头内有液体滞留，则移液器不准。移液器用完后一定要回到松弛状态，即拧到最大刻度。移液器不准时，可以维修，修不好就淘汰。

7 操作方法的影响

在操作过冲中常常因为人为因素造成结果不准确的现象，所以在操作中要尽量避免人为因素的影响。在稀释血清时，要把移液器内的液体排空后，再吸出 25μl，排至下一孔去稀释，依此类推。若吸嘴没排空就稀释下去，这样可能使所测 HI抗体变高； 在移去液体时，移液器尽量呈垂直状态；在倍比稀释时，尽量使每孔稀释的次数一致，并且每次稀释次数至少 3次以上。HI值读取在规定作用时间后进行， 红细胞对照孔内红细胞应完全沉淀， 抗原对照孔红细胞应完全凝集，阳性血清对照孔红细胞应完全沉淀( 即完全抑制凝集)，样品检测以完全凝集抑制为判定界限，作为判定标准。

总之，随着养鸡业的发展，鸡病会越来越复杂，但鸡新城疫在未来一段时间内仍是危害养鸡业发展的重要疫病，因些准确地进行鸡新城疫HI抗体的监测显得非常重要，也会越来越普及，因此对影响鸡新城疫HI抗体监测的因素应给予足够的重视，以确保监测准确，有力地指导生产，减少鸡新城疫对养鸡业的损失。

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1007-1733(2014)06-0063-01

2014–03–31）