水貂绿脓杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染的诊治

王秋菊 戴秀美 王清明 常维山*

（①山东菁华农牧-诸城市皮毛动物研究所 山东 诸城 262200②山东农业大学动物科技学院 山东 泰安)

2013年7月30日，山东诸城市某水貂养殖场发生采食量下降，呼吸困难，口鼻流血，死前尖叫为特征的水貂急性传染病。该场共饲养水貂1500只，6d死亡100多只，送诸城市皮毛动物研究所诊断，通过临床症状、病理剖检及实验室检验，确诊为绿脓杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染。

1 临床特征

病貂表现为突然发病，倒地死亡，食欲不振，精神沉郁，体温升高，鼻镜干燥，呼吸困难，呈腹式呼吸，口鼻流血，死前尖叫，散发，病程短，1～2d死亡。用头孢氨苄和恩诺沙星治疗未见明显效果。

2 剖检变化

颈部皮下肿大有脓泡，剖开后流出粘稠的灰白色的脓汁，局部肌肉呈暗红色;气管环轻微出血，气管内有大量的泡沫状含有浓汁的液体；胸腔积液；胸腺有点状出血；整个肺脏大面积淤血、出血，切面流出泡沫状血液，肺门淋巴结肿大出血；肝脏稍发黄，轻度肿大；脾脏肿胀，整个呈暗红色，质地变硬具有弹性；肾脏被膜易剥落，皮质髓质均呈暗红色，稍肿；肠系膜淋巴结肿胀，出血，有脓性渗出。

3 实验室诊断

3.1 犬瘟热病毒(CDV)检测 从心脏、肺脏、肝脏、膀胱、直肠、取样加入稀释液中，混匀后滴入犬瘟热检测卡，数分钟后观察结果为阴性，排除是犬瘟热感染。

3.2 病料涂片镜检 无菌取新鲜病死貂肺脏、肝脏、脾脏、心血、淋巴结等分别进行直接涂片，革兰氏染色镜检，发现有一种数量不等的单个、成双或呈短链状排列的中等大小革兰氏阴性杆菌；另有一种细菌呈革兰阴性的球杆菌，菌体较大有荚膜，成双或短链状或单个排列。

3.3 细菌分离培养 在病料涂片镜检的同时，无菌取上述病料接种普通琼脂、麦康凯琼脂以及鲜血琼脂培养基，放入37℃恒温箱中进行有氧和烛缸法厌氧培养24h，观察培养特性。肺脏、肝脏、脾脏、淋巴结以及心血在普通琼脂培养基，均形成圆形、隆起、湿润、边缘整齐、带有明显蓝绿色和灰白色的菌落。在鲜血琼脂培养基上，出现2种菌落，一种菌落较大，呈灰褐色，周围有溶血环；另一种呈灰白色，不溶血。在麦康凯培养基上，长出圆形、隆起、易融合的黏液样的粉红色和灰绿色的2种菌落，粉红色菌落用接种环挑取呈丝状粘连，镜检为卵圆形且有透明荚膜的短杆菌；灰绿色菌落与普通琼脂上蓝绿色菌落和鲜血琼脂上溶血的菌落的细菌相一致。将观察到的2种细菌进行纯培养，革兰氏染色、镜检，均为单个、成双或呈短链状排列的中等大小的革兰氏阴性杆菌，初步判定为绿脓杆菌和肺炎克雷伯菌。

3.4 生化鉴定 将分离纯化的两种菌进行分别接种生化反应管进行生化鉴定，溶血的蓝绿色菌落结果为：分解葡萄糖、伯胶糖、单奶糖、甘露糖产酸不产气；不分解麦芽糖、菊糖、棉籽糖、甘露醇、乳糖及蔗糖，能液化明胶；分解尿素，不形成吲哚，氧化酶试验阳性，可利用枸橼酸盐；不产生H2S，MR试验和VP试验均为阴性。在麦康凯上生长成粉色的不溶血的菌落结果为：能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、鼠李糖、甘露醇、木糖、棉籽糖、阿拉伯糖和水杨苷产酸产气；不水解肌醇和山梨醇，不液化明胶；不产生H2S和靛基质，MR试验阳性，VP试验阴性。以上生化反应记过符合绿脓杆菌和克雷伯菌的特性，根据以上实验确定为绿脓杆菌和肺炎克雷伯菌。

3.5 动物试验 选用8只健康小白鼠做动物试验，分为4组每组3只。1组和2组分别用绿脓杆菌和肺炎克雷伯氏菌24h肉汤培养物腹腔注射，0.1ml/只，3组腹腔注射绿脓杆菌和克雷伯菌的混液0.1ml/只，4组注射灭菌生理盐水作为对照组。结果显示，4组对照组全部正常，无一发病；1、2、3组小白鼠很快出现精神沉郁、体温升高症状，24h内全部死亡，解剖后用肝脏、心血等涂片、镜检，结果检出大量与接种细菌形态相同的病菌。通过以上综合诊断，确诊为绿脓杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染。

4 药敏试验

采用常规纸片法选用16种常用抗菌药物对分离的绿脓杆菌和肺炎克雷伯菌进行药物敏感试验，分别选择阿米卡星、恩诺沙星、复方新诺明、强力霉素、四环素、环丙沙星、新霉素、多粘菌素B、庆大霉素、左氧氟沙星、磺胺二甲氧嘧啶、头孢噻肟、替米考星、痢菌净、大观霉素、安普霉素等16种药物进行药敏实验，结果表明2种菌对环丙沙星、新霉素、多粘菌素B、庆大霉素高敏，强力霉素、头孢噻肟、恩诺沙星中敏，克雷伯菌对大观霉素、安普霉素、复方新诺明中敏，绿脓杆菌表现低敏，其他药物均无明显抑菌环。

5 治疗

（1）立即对病貂和有症状的貂进行隔离；对笼舍、地面、粪便及时进行消毒，饲槽和饮水槽用菁华安宁彻底清洗消毒，1次/d；对病死貂进行深埋活焚烧；使用新鲜饲料，加强饲养管理，提高貂群的抗病力。（2）根据药敏试验结果，大群投喂肺炎速治和清瘟止痢疾散，清热解毒，抗菌消炎，1次/d，连用5d，同时配合用黄芪多糖、电解多维、维生素C、维生素B进行辅助治疗，用药1d后死亡减少，3d后死亡停止，5d后全群恢复正常。

6 讨论与小结

近年来随着毛皮动物养殖的发展，疾病发展也越来越严重，出现多种疾病混合感染或者继发感染的现象。绿脓杆菌又称铜绿假单胞菌主要引起水貂的貂出血性肺炎，临床症状主要急性死亡，死前呼吸困难以及口，鼻流泡沫状血液，肺脏大面积出血淤血以及脑膜炎为特征机型败血症疾病。本病发病急，病程短，死亡率高。肺炎克雷伯菌主要寄生在水貂的呼吸道和肠道，是条件致病菌，主要引起以脓肿蜂窝织炎，麻痹以及脓毒败血症。本病常爆发流行，死亡率较高。通过临床症状，解剖症状，病原的形态学观察、分离培养、生化试验和动物致病试验，证实该起水貂发病是由绿脓杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染所致。对这2种病发生和防治分析主要有以下几个方面：（1）7～9月份正处于炎热的夏季，也是绿脓杆菌和肺炎克雷伯菌发病的高峰期，激素貂开始换毛，生长迅速，抵抗力降低，致使体内存在的条件病原菌大量繁殖，最终引起感染和死亡。夏季天气炎热，貂舍通风散热差，高温高湿，水貂散热功能较差，尤其是黑貂发病明显高于白貂，公貂发病高于母貂，打激素的水貂发病高于留种未打激素的水貂，因此夏季对水貂应加强管理，做好通风、降温、防暑的工作。（2）绿脓杆菌在自然界广泛存在，当绿脓杆菌污染环境、饲料、被毛，在外界环境因素作用下，通过口腔、鼻腔侵入体内引起发病，因此要严格监测饲料卫生和水源卫生，防止病从口入。注意环境的消毒，加强饲养管理，可以有效预防该病发生。另外这两种菌容易产生耐药性，要选择几种消毒剂交叉使用。对于有发生水貂出血性肺炎的养殖场，可以定期接种绿脓杆菌疫苗，对预防绿脓杆菌病有一定效果，对2种菌也可以提前用药物预防。（3）发病后畜主擅自使用多种药物治疗，使细菌对多种药物已产生耐药性，增加了治疗的难度。为了减少经济损失和不必要的浪费，发病后应立即到相关部门进行诊断，通过药敏试验确定敏感药物进行治疗，才能收到显著的防治效果。这两种菌对抗生素极易产生耐药，采用抗菌素治疗时应首选高敏药物，合理用药(选择敏感度高但是损伤小的药物，庆大霉素虽然敏感但是肾毒性较强，不建议选用)，配合中药标本兼治，有利于貂群早日恢复健康。