HPLC测定香砂枳术丸中白术内酯Ⅰ和Ⅲ的含量

何培根　李志浩　刘菁

[摘 要] 目的：建立同时测定香砂枳术丸中白术内酯Ⅰ和Ⅲ含量方法。方法：采用DIONEX C18色谱柱（250mm×4.6mm，5?m），流动相：乙腈：甲醇：0.1%磷酸溶液（11：46：43），检测波长为222nm，柱温：35℃，流速为1.0mL·min-1。结果：白术内酯Ⅰ和Ⅲ分别在0.1～2.0?g·mL-1（γ=0.9997）和0.2～4.0?g·mL-1（γ=0.9998）浓度范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为98.7%，98.0% ；RSD 分别为0.68%、1.15%。结论：本方法简便，准确，重复性好，可用于该制剂的质量控制。

[关键词] 香砂枳术丸；白术内酯Ⅰ；白术内酯Ⅲ；HPLC

中图分类号：O657 文献标识码：B 文章编号：2055-5200（2014）02-064-03

香砂枳术丸为卫生部颁药品标准收载之品种 [1]。由白术（Rhizoma Atractylodis Macrocephalae）、木香（Radix Aucklandiae）、枳实（Fructus Aurantii Immaturus）、砂仁（Fructus Amomi）等四味中药所组成的复方中成药制剂。出自《景岳全书》，具有健脾开胃，行气消痞之功效。用于脾虚气滞，脘腹痞闷，食欲不振，大便溏软等症。有实验表明本制剂对不同 的胃肠机能状态呈不同的作用，对胃肠运动具有调节作用：既能抑制新斯的明引起的胃肠运动亢进，又能改善阿托品所致的胃肠抑制。能显著增加胆汁、胰液分泌，但对胃液分泌有显著抑制作用，与甲氰咪呱有协同作用。能显著增加胰脂肪酶活性，显著抑制胃蛋白酶活性[2]。白术在本方中用量较大，具有健脾益气、燥湿利水之功效，主要用于脾虚食少、痰饮等症。其所含的内酯类化合物具有调节胃肠运动、提高免疫力和促进营养物质吸收的功能[3-4]。笔者参考有关文献，采用高效液相色谱法测定白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的含量，可提高本制剂的质量标准，确保临床疗效。

1 仪器与试药

DIONEX液相色谱仪（Chemeleon色谱工作站，UV检测器），岛津AEU-210型电子天平（d=0.1mg，日本岛津）；KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器厂）；白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ对照品（西安交通大学药物分析工程中心提供，纯度99.6%），甲醇，乙腈（色谱纯，Fish公司），水为去离子水，其他试剂均为分析纯。香砂枳术丸（北京同仁堂股份有限公司，规格：10.0g/袋）。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

分别取经减压干燥器干燥至恒重的白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.002mg白术内酯Ⅰ和每1mL含0.004mg白术内酯Ⅲ的溶液，分别吸取上述两种对照品溶液各5mL至10mL量瓶中，摇匀，即得混合对照品溶液。

2.2 供试品溶液及阴性对照溶液的制备

取本品5袋，除去包衣，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，浸渍1h，超声处理（功率300W，频率50kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过（0.45?m微孔滤膜），作为供试品溶液。按上述方法制得不含白术的阴性对照溶液。

2.3 色谱条件

采用DIONEX C18（250mm×4.6mm ，5?m）色谱柱；流动相：乙腈：甲醇：0.2%磷酸溶液（46：11：43）[5-10]；检测波长222nm，流速：1.0mL·min-1；柱温：35℃；进样量：10?L；在此色谱条件下，两峰理论塔板数不小于3000。色谱图见图1。

2.4 标准曲线与线性范围

分别精密吸取混合对照品储备溶液0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0mL置10mL量瓶中，甲醇稀释定容至刻度，摇匀，分别取10?L注入液相色谱仪，测定，以浓度对峰面积积分值进行线性回归，线性方程分别为：白术内酯Ⅰ：Y=62.473X+0.1467，r=0.9997；白术内酯Ⅲ：Y=59.46X-0.2213，r=0.9998，结果表明白术内酯Ⅰ在0.1～2.0?g·mL-1；白术内酯Ⅲ在0.2～4.0?g·mL-1浓度范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

取混合对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，测得峰面积的RSD为1.31%、1.47%。

2.6 稳定性试验

吸取“2.2”项下的供试品溶液，室温下分别在0，2，4， 8，12h测定峰面积积分值，结果RSD分别为1.62%、1.83%，处理后的样品溶液在12h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批样品（批号20111206）5份，按“2.2”项下的方法制成供试品溶液，分别进样测定，计算其平均含量分别为0.024、0.047mg/g，RSD为1.87%和1.18%。结果见表1。

2.8 加样回收率试验

取6份已知含量（批号20111206，白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ分别为0.024、0.047mg/g）的香砂枳术丸约0.5g，精密加入混合对照品溶液12mL，依法制备供试品溶液，在选定的色谱条件下进样并计算回收率，结果见表2。

2.9 样品测定

将制备好的样品在高效液相色谱仪上测定含量，结果见表3。

表3 样品测定结果（n=3）

批号 白术内酯Ⅰ（mg/g） 白术内酯Ⅲ（mg/g）

20111206 0.047 0.024

20111218 0.045 0.023

20120104 0.046 0.023

20120115 0.052 0.028

20120124 0.046 0.024

3 讨论

3.1 流动相的选择

曾采用不同流动相系统，但该两种白术活性成分均有较宽色谱峰形，塔板数也很低，拖尾明显，定量分析误差较大。为了能准确分析测定，对不同流动相比例和溶液pH值进行调整，流动相用甲醇-乙腈混合作为有机相，两者的色谱得到明显改善，再用0.1%磷酸改变流动相pH值范围，调整比例为乙腈：甲醇：0.2%磷酸溶液（11：46：43）两者色谱峰与杂质峰能较好分开。而当流动相中不添加磷酸溶液时白术内酯I色谱峰为一平头峰，且峰宽超过2min。因此确定本系统作为流动相系统。

3.2 提取方法的选择

分别考察了乙醇、甲醇、乙酸乙酯等提取溶剂，提取方式考察了超声、回流等，提取时间分别考察了20min、30 min、1 h，提取次数分别为1次、2次，均进行单因素实验。结果，甲醇超声30 min 1次即可提取完全（说明：在“2.2 供试品溶液及阴性对照溶液的制备”中提到供试品溶液的制备方法为“超声处理（功率300W，频率50kHz）30min”，即规定了超声处理的时间和次数），与回流提取相比结果相差很小，为节约提取时间，提高实验效率，确定用甲醇超声提取作为提取方法。

参 考 文 献

[1] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂：第一册[S].WS3-B-0114-89，1998：116.

[2] 谭毓治，胡因铭，赵诗云，等.香砂枳术丸对消化系统的药理作用[J].中药药理与临床，1992，8（3）：9-11.

[3] 李伟， 文红梅， 崔小兵， 等. 白术的化学成分研究 [J]. 中草药， 2007， 38（10）： 1460-1462.

[4] 宿廷敏，王敏娟，阮时宝.白术的化学成分及药理作用研究概述[J].贵阳医学院学报（自然科学版）：2008，3（2）：32-35.

[5] 李伟，文红梅，张爱华，等.白术质量标准研究I—HPLC法测定2种白术内酯的含量[J]. 药物分析杂志，2001，21（3）：170-172.

[6] 李志浩，瞿京红，刘菁，等.高效液相色谱法测定固本咳喘片中白术内酯I和白术内酯Ⅲ 的含量[J].湖北中医药大学学报，2011，13（4）：33-35.

[7] 李志浩，李鹏，朱雪松，等.反相高效液相色谱法测定白术茯苓颗粒中白术内酯I与白术内酯Ⅲ含量[J].医药导报，2010，29（5）：662-663.

[8] 李鹏，陈琴华，李志浩，等.超声法提取白术中白术内酯Ⅰ和Ⅲ的正交实验研究[J].中药材，2009，32（10）：1615-1618.

[9] 傅春升， 杨培民. 麸炒白术的质量研究[J]. 中成药，2007，29（1）：92-95.

[10] 陈琴华，李鹏，何婧，等. 白术饮片HPLC指纹图谱研究[J]. 中药材，2009，32（1）：35-38.

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3 讨论

3.1 流动相的选择

曾采用不同流动相系统，但该两种白术活性成分均有较宽色谱峰形，塔板数也很低，拖尾明显，定量分析误差较大。为了能准确分析测定，对不同流动相比例和溶液pH值进行调整，流动相用甲醇-乙腈混合作为有机相，两者的色谱得到明显改善，再用0.1%磷酸改变流动相pH值范围，调整比例为乙腈：甲醇：0.2%磷酸溶液（11：46：43）两者色谱峰与杂质峰能较好分开。而当流动相中不添加磷酸溶液时白术内酯I色谱峰为一平头峰，且峰宽超过2min。因此确定本系统作为流动相系统。

3.2 提取方法的选择

分别考察了乙醇、甲醇、乙酸乙酯等提取溶剂，提取方式考察了超声、回流等，提取时间分别考察了20min、30 min、1 h，提取次数分别为1次、2次，均进行单因素实验。结果，甲醇超声30 min 1次即可提取完全（说明：在“2.2 供试品溶液及阴性对照溶液的制备”中提到供试品溶液的制备方法为“超声处理（功率300W，频率50kHz）30min”，即规定了超声处理的时间和次数），与回流提取相比结果相差很小，为节约提取时间，提高实验效率，确定用甲醇超声提取作为提取方法。

参 考 文 献

[1] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂：第一册[S].WS3-B-0114-89，1998：116.

[2] 谭毓治，胡因铭，赵诗云，等.香砂枳术丸对消化系统的药理作用[J].中药药理与临床，1992，8（3）：9-11.

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[6] 李志浩，瞿京红，刘菁，等.高效液相色谱法测定固本咳喘片中白术内酯I和白术内酯Ⅲ 的含量[J].湖北中医药大学学报，2011，13（4）：33-35.

[7] 李志浩，李鹏，朱雪松，等.反相高效液相色谱法测定白术茯苓颗粒中白术内酯I与白术内酯Ⅲ含量[J].医药导报，2010，29（5）：662-663.

[8] 李鹏，陈琴华，李志浩，等.超声法提取白术中白术内酯Ⅰ和Ⅲ的正交实验研究[J].中药材，2009，32（10）：1615-1618.

[9] 傅春升， 杨培民. 麸炒白术的质量研究[J]. 中成药，2007，29（1）：92-95.

[10] 陈琴华，李鹏，何婧，等. 白术饮片HPLC指纹图谱研究[J]. 中药材，2009，32（1）：35-38.

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3 讨论

3.1 流动相的选择

曾采用不同流动相系统，但该两种白术活性成分均有较宽色谱峰形，塔板数也很低，拖尾明显，定量分析误差较大。为了能准确分析测定，对不同流动相比例和溶液pH值进行调整，流动相用甲醇-乙腈混合作为有机相，两者的色谱得到明显改善，再用0.1%磷酸改变流动相pH值范围，调整比例为乙腈：甲醇：0.2%磷酸溶液（11：46：43）两者色谱峰与杂质峰能较好分开。而当流动相中不添加磷酸溶液时白术内酯I色谱峰为一平头峰，且峰宽超过2min。因此确定本系统作为流动相系统。

3.2 提取方法的选择

分别考察了乙醇、甲醇、乙酸乙酯等提取溶剂，提取方式考察了超声、回流等，提取时间分别考察了20min、30 min、1 h，提取次数分别为1次、2次，均进行单因素实验。结果，甲醇超声30 min 1次即可提取完全（说明：在“2.2 供试品溶液及阴性对照溶液的制备”中提到供试品溶液的制备方法为“超声处理（功率300W，频率50kHz）30min”，即规定了超声处理的时间和次数），与回流提取相比结果相差很小，为节约提取时间，提高实验效率，确定用甲醇超声提取作为提取方法。

参 考 文 献

[1] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂：第一册[S].WS3-B-0114-89，1998：116.

[2] 谭毓治，胡因铭，赵诗云，等.香砂枳术丸对消化系统的药理作用[J].中药药理与临床，1992，8（3）：9-11.

[3] 李伟， 文红梅， 崔小兵， 等. 白术的化学成分研究 [J]. 中草药， 2007， 38（10）： 1460-1462.

[4] 宿廷敏，王敏娟，阮时宝.白术的化学成分及药理作用研究概述[J].贵阳医学院学报（自然科学版）：2008，3（2）：32-35.

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[6] 李志浩，瞿京红，刘菁，等.高效液相色谱法测定固本咳喘片中白术内酯I和白术内酯Ⅲ 的含量[J].湖北中医药大学学报，2011，13（4）：33-35.

[7] 李志浩，李鹏，朱雪松，等.反相高效液相色谱法测定白术茯苓颗粒中白术内酯I与白术内酯Ⅲ含量[J].医药导报，2010，29（5）：662-663.

[8] 李鹏，陈琴华，李志浩，等.超声法提取白术中白术内酯Ⅰ和Ⅲ的正交实验研究[J].中药材，2009，32（10）：1615-1618.

[9] 傅春升， 杨培民. 麸炒白术的质量研究[J]. 中成药，2007，29（1）：92-95.

[10] 陈琴华，李鹏，何婧，等. 白术饮片HPLC指纹图谱研究[J]. 中药材，2009，32（1）：35-38.