分光光度法测定西瓜霜喷剂中的硼砂

2014-04-02王伯涛

中成药 2014年4期

汤征，赵翠，王伯涛

(南京工业大学药学院，江苏南京 211816)

西瓜霜喷剂是由西瓜霜、硼砂(煅)、黄柏、黄连、山豆根、射干、浙贝母、青黛、冰片、无患子果(炭)、大黄、黄芩、甘草、薄荷脑14味中药研制而成的复方制剂，具有清热解毒，消肿止痛的功效。临床用于治疗风热上攻、肺胃热盛所致的乳蛾、喉痹、口糜，证见咽喉肿痛、喉核肿大、口舌生疮、牙龈肿痛或出血；急慢性咽喉炎，扁桃体炎，口腔炎、口腔溃疡等疾病。目前，已有报道采用分光光度法、高效液相色谱、毛细管电泳及高效液相色谱/质谱等方法测定该制剂中苦参碱、盐酸小檗碱、黄芩苷的量[1-7]。硼砂作为该制剂中一味重要的中药成分具有清凉解毒、消积块、除痰热、消炎敛疮[8]的作用，但人体若过多摄入硼会引起多脏器的蓄积性中毒，轻者会食欲减退、消化不良，严重者会出现呕吐、腹泻、红斑、循环系统障碍、休克、昏迷等症状。硼砂的成人中毒剂量为1～3 g。成人致死剂量为15～20 g，婴儿致死量为2～5 g[9]。所以需要建立西瓜霜喷剂中硼砂的定量测定方法，一方面控制药品的质量，另一方面保障安全用药。

在酸性条件下，硼砂转化为硼酸，硼酸与姜黄素可形成红色络合物，该络合物在一定波长处有最大吸收，且吸光度与含有量成正比[10-16]，本实验根据这一原理，以姜黄素-草酸-盐酸乙醇溶液为显色液，利用分光光度法对西瓜霜喷剂中的硼砂进行测定，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 TU-1901紫外可见分光光度计(苏州市莱顿科学仪器有限公司)；DF 110型电子分析天平(中国轻工业机械总公司)；HH-S恒温水浴锅(江苏金坛正基仪器有限公司)；KQ-400DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；瓷蒸发皿。

1.2 试药西瓜霜喷剂为市购样品，桂林三金药业股份有限公司生产，批号分别为：090729、090822、091031、091102、091289；姜黄素、硼砂(国药化学试剂，分析纯)；盐酸(上海中试化工，分析纯)，乙醇(无锡亚盛，分析纯)，草酸(上海凌峰，分析纯)；所用水为蒸馏水。

1.3 精制硼砂制备取硼砂80 g，加水500 mL，电炉加热，搅拌使完全溶解。室温放置使其冷却并结晶，待结晶充分，弃去上清液，取出烧杯底部结晶，于室温下晾至半干，置于饱和蔗糖-盐水溶液的干燥器中进行结晶水平衡，得到符合分子式的10H2O硼砂(Na2B4O7·10H2O)，储于玻璃容器中，密封。

1.4 实验溶液制备

1.4.1 显色液分别称取0.05 g姜黄素及4.0 g草酸于100 mL量瓶中，用乙醇80 mL溶解后，加入盐酸4.0 mL，再用乙醇稀释至刻度，置于聚乙烯瓶中且冰箱贮存(若试剂混浊，过滤后贮存)。

1.4.2 硼砂贮备溶液(100 mg/L) 称取0.10 g精制硼砂于100 mL量瓶中，加水适量使溶解后，定容，摇匀；精密移取10 mL于另一100 mL量瓶中，加水定容摇匀，储存于聚乙烯瓶中。

1.4.3 硼砂标准系列溶液临用新制。精密移取10 mL硼砂贮备液于100 mL量瓶中，加水定容摇匀，得硼砂溶液。再分别精密移取0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0、1.5 mL于相同的瓷蒸发皿中，各加水补足至约1.5 mL。

1.4.4 10 mol/L盐酸取盐酸900 mL，加水适量使成1 000 mL，摇匀即得。

1.4.5 5 mol/L盐酸取盐酸450 mL，加水适量使成1 000 mL，摇匀即得。

2 实验与结果

2.1 供试品溶液配制称取0.50 g西瓜霜喷剂样品于100 mL量瓶中，加水适量溶解后，加10 mol/L盐酸5 mL，摇匀，加水定容，摇匀；过滤，取续滤液保存于聚乙烯瓶中。精密移取1 mL续滤液于另一100 mL量瓶中，加水定容，摇匀，即得供试品溶液，储存于聚乙烯瓶中。

2.2 测定方法精密移取1.0 mL供试品溶液于瓷蒸发皿中，向盛有供试品溶液和标准溶液的蒸发皿中各加入显色液4 mL及5 mol/L盐酸1 mL，轻轻旋转蒸发皿使之混合均匀。再将蒸发皿置55 ℃恒温水浴箱上蒸发，蒸干后继续保留15 min，取出放冷。用乙醇溶解蒸发皿内残渣，并完全移入25 mL量瓶中，用乙醇定容，摇匀；以空白为参比，于550 nm波长处测定供试品溶液和标准系列溶液的吸光度。

2.3 方法学验证

2.3.1 线性范围按“2.2”项下测定方法测定“1.3.4”项下各标准溶液的吸光度；以标准溶液中硼砂质量浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，标准溶液在质量浓度0.00～0.60 μg/mL范围内与吸光度有良好的线性关系，其线性回归方程为y=0.037x+0.063，r=0.997 5。

2.3.2 精密度试验取硼砂标准溶液按“2.2”项下方法显色，连续测定吸收度6次，计算相对标准偏差RSD为0.44%(n=6)。

2.3.3 重复性试验取3批样品，每批样品各6份，按“2.1”项所述方法将该样品制备成供试品溶液，再按“2.2”项下测定方法平行测定各溶液吸光度，并计算，硼砂的相对标准偏差RSD在3.01%～4.12%之间，表明方法重复性良好。

2.3.4 加标回收率试验精密称取同一批号已知含有量样品6份(质量分数为0.122%)，并向其中分别添加精制硼砂50 mg，按“2.1”项下方法制成供试品溶液后，按“2.2”项下测定方法进行加标试验，平均回收率为106.27%。见表1。

表1 硼砂的加样回收率

2.4 样品中硼砂测定将不同批号的样品按“2.1”项方法分别制备成供试品溶液，按“2.2”项测定方法测定，将测得的吸光度代入线性回归方程计算样品中硼砂含量，结果见表2。

表2 硼砂的测定

3 讨论

3.1 测定波长的选择将样品制备成供试品溶液后按“2.2”项下测定方法操作至“用95%乙醇溶液定容至25 mL”，再以空白为参比，在200～800 nm波长范围内进行扫描，该溶液在432 nm及550 nm处有吸收，见图1中1；以空白为参比，将一定质量浓度显色液在相同波长范围内扫描，其在432 nm处有吸收，见图1中2；将样品制备成供试品溶液后，除不加显色液外其余均按“2.3”项下测定方法操作至“用95%乙醇溶液定容至25 mL”，再以空白为参比，在同样波长范围内扫描，该溶液在该波长范围内没有吸收，见图1中3。说明只有反应络合物在550 nm处有吸收，故本实验采用550 nm作为测定波长。

图1 各溶液在不同波长下的光吸收情况

3.2 供试品溶液制备方法的选择据文献报道，测定食品、中成药中硼砂时，样品均需经过灰化处理，因为样品中的有机物可能对测定结果有干扰，灰化处理可以去除样品中的有机物。本实验比较了灰化前后溶液的吸光度，确定硼砂定量测定时是否需要灰化处理。

未灰化供试品溶液的制备参考“2.1”项下方法制备。

灰化溶液的制备称取0.500 g西瓜霜喷剂粉末于瓷坩埚中，将瓷坩埚置于电炉上炭化至无烟，再置于600 ℃马弗炉中灰化3～4 h，取出，冷却至室温；用10%盐酸5 mL溶解瓷坩埚内容物后并完全转移至100 mL量瓶中，加水定容，摇匀。再精密移取1 mL上述溶液于另一100 mL量瓶中，加水定容，摇匀，即得。将此溶液储存于聚乙烯瓶中。

分别精密移取灰化与未灰化供试品溶液各3份，按“2.2”项下测定方法进行操作，测定不同供试品溶液的吸光度。见表3。