荧光PCR技术与直接涂片法对淋球菌检测的临床应用分析

李新善，胡燕玲，罗明

(1、江西省临床检验中心，江西 南昌 330006；2、南昌市男科医院，江西 南昌 330008)

性传播疾病是当今社会上广泛流行的传染病，其中以淋病居多，其病原菌为淋病奈瑟菌(简称淋球菌)，也是我国最常见的性传播疾病之一。淋病的诊断主要是病史、临床症状及实验室检查，在此环节中，实验室检测对疾病的诊断、治疗和有效控制等具有十分重要的作用。目前，实验室检查主要有直接涂片革兰染色、聚合酶链反应(PCR)、分离培养和细菌学鉴定等。上述几种方法各有优缺点，本资料采用直接涂片革兰染色、荧光PCR二种方法，对2012年临床疑似淋病的116例患者进行比较分析，重点对不同临床症状及男、女标本分别采用直接涂片染色和荧光PCR法做检测对比，现将结果总结如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 68例男性和48例女性病人均来自南昌市男科医院的门诊和住院病例，男性年龄19~70岁，平均年龄39.5岁，女性年龄18~45岁，平均年龄26.8岁。所有病例基本具有以下特征：(1)婚外性交史或其配偶有婚外性交史；(2)不同程度的生殖道症状；(3)符合上述二点，有尿道口红肿、明显分泌物增多、脓性白带的判为重症，仅有尿频尿急、尿道灼热刺痛、红肿程度小、分泌物少的判为轻度。绝大多数病例近期内未使用任何抗生素。

1.2 标本采集 取材由临床医生按常规方法操作[1]，男性取尿道分泌物、前列腺液，女性取阴道分泌物、宫颈粘液。立即装入无菌试管送实验室，分别进行直接涂片和PCR检测。

1.3 直接涂片法 将标本拭子在消毒好的玻片上轻轻滚动，待干燥固定后行革兰染色、镜检。以镜检中性粒细胞内有革兰阴性双球菌为阳性。

1.4 荧光PCR法 试剂盒由上海科华生物技术有限公司提供。扩增仪为上海宏石SLAN全自动扩增仪。PCR检测方法严格按试剂盒操作说明书和实验室SOP要求进行。淋球菌标准株来源于江西省疾病控制中心，为荧光PCR阳性对照用。

1.5 统计学处理 应用SPSS13.0软件，数据分析采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

用二种不同方法对116例临床疑似病例进行检测，按不同症状和男、女分组作对比分析，结果见表1和表2。

表1 不同症状二种检测方法的结果

表2 不同性别二种检测方法的结果

3 讨论

本资料表1和表2结果显示，荧光PCR法对症状轻微患者、女性标本的检出率高于直接法(P＜0.01)。对于症状较重患者、男性标本，二种方法则差异无统计学意义(P＞0.05)。直接涂片法对于症状较重患者、男性标本具有较高的阳性检出率，明显高于女性标本(P＜0.01)。

从方法学角度，淋病的实验室诊断由于实验方法的选择不同，造成了实验结果的灵敏度，准确度有所不同[2]。直接涂片法：能快速检出结果，结果直观可靠，可使患者节省费用、缩短候诊时间、尽早得到治疗，但是其阳性检出率较低，尤其是轻微的女性病例标本受多种主观和客观因素的影响，结果判读非常困难，常会出现假性结果，对检测者的技术和经验要求很高[3]。荧光PCR法：具有灵敏度高、特异性强、准确和快速[4]的特点，但是此方法容易出现假阳性结果，对实验室环境要求高，操作过程中一定要特别仔细认真，严格按照PCR标准操作程序操作，应建立有效的防污措施，杜绝残留污染和样品间扩增序列交叉污染，实验全过程必须设立阴阳性对照，严防假阳性、假阴性。细菌培养法：淋球菌分离培养和药敏鉴定是WHO和我国推荐的金标准之一，由于分离培养和细菌学鉴定对标本要求相对高，培养条件苛刻，操做繁琐，报告时间长难以被患者接受等缺点[5]，该方法的临床推广应用受到制约。

综上所述，目前，淋病的实验室检测方法各自有优缺点，单一某种检测方法无法得到满意的结果。从116例临床疑似病例采用直接涂片染色法和荧光PCR[6]法所做的结果表明，同一种方法对不同症状、不同性别的阳性率不同，经比较分析得出直接涂片法具有简便、快捷、直观的优点，但对女性检出率较低。荧光PCR法敏感高、特异特异强，能提高检出率，对女性疑似病例具有较好的补充效果。本文认为，实验室对疑似病例先后采用直接涂片染色法和荧光PCR法检测，基本能满足临床需要。

[1]张学军.皮肤性病学[M].第6版.北京:人民卫生出版社,2005:215.

[2]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版．南京：东南大学出版社,2006:778-780.

[3]叶章顺.性传播疾病的实验室诊断[M].北京：科学出版社，2001：41-44.

[4]熊国亮.临床聚合酶链反应(PCR)测定的质量控制[J].江西医学检验,2002,20(4):241-244.

[5]徐新蓉,马萍,龚国富.不同症状淋球菌感染患者实验室检测方法选择与比较[J].国际检验医学杂志,2012,33(21):2637-2638.

[6]江梅,万腊根,简正伟.检测PML RARα基因的双重荧光定量PCR方法的建立[J].实验与检验医学,2012,30(5):433-436.