小而密低密度脂蛋白与冠心病关系的研究

周丽娟，韩崇旭

(苏北人民医院临床医学检测中心，江苏 扬州225001)

血清低密度脂蛋白 (Low Density Lipoprotein,LDL)颗粒在大小、密度和脂质组成上具有异质性。根据颗粒相对大小，LDL一般分为A、B两型，A型为较大颗粒，是大而轻低密度脂蛋白(large,buoyant LDL,lLDL)，颗粒较小的B型即小而密低密度脂蛋白(small,dense low density lipoprotein,sdLDL)，是动脉粥样硬化发生的强危险因素，与冠心病(coronary heart disease,CHD)的形成密切相关[1-4]。目前，sdLDL作为冠心病危险性指标的研究较少，为了解CHD患者LDL亚组分的分布情况，本文探讨血浆sdLDL水平与CHD及其它危险因素的关系，旨在为CHD的防治提供新依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2011年1月至2011年6月在我院住院CHD患者50例(冠状动脉造影确诊)。对照组：经冠状动脉造影排除冠心病的住院病人30例；选择性别、年龄匹配并排除心脑、肝、肾等疾病的健康人30例。

1.2 方法

1.2 .1密度梯度超速离心法制备LDL亚型 取20份正常人混合血清制备LDL亚型，用作2%~16%非变性梯度凝胶电泳的参照物。超速离心制备sdLDL(d=1.044～1.063)，空腹 12h 采血，以 3000 r/min离心10 min，分离得到血清(超速离心机为美国 Beckman Coulter公司，OptimaTML-90K)。KBr调整血清密度为 d=1.044，50，000 r/min离心 18h。离心后除去上层淡黄色脂蛋白与无色中间层，用KBr调整下层液密度为 d=1.063，50，000 r/min 离心 18 h， 用 pH7.4、0.15mol/L NaCl(含 0.3 mmol/L EDTA-Na2)将上层淡黄色脂蛋白透析后备用。相同的方法制备大而轻的LDL(lLDL,密度为1.020~1.044 kg/L)。透析，浓缩，负染经过多媒体彩色病理图像分析系统作图像分析处理，电子显微镜(日本JEOL 公司，JEM-100S)测定 lLDL、sdLDL 颗粒平均直径分别为26.3 nm和23.9 nm。

1.2 .2 空腹 12h后采血，0.5 mol/L EDTA-Na2抗凝，30分钟内以3000 r/min离心分离血浆。采用2%~16%非变性聚丙烯酰胺梯度胶电泳法[5](电泳仪为美国HOEFER，梯度发生器为 Hoefer SG500)。电泳缓冲液为pH 8.3的Tris-硼酸-EDTA缓冲液，加样缓冲液为0.1%溴酚蓝．蔗糖缓冲液，加样50μl，预电泳施加125V电压15min，电泳施加200V电压16h，400V电压4h，电泳过程在10℃的循环水浴中进行。凝胶用油红O染色24h，dH2O恢复。扫描时以超速离心法得到的sdLDL与lLDL确定两组分在胶上的相应位置，扫描并由波峰面积算出sdLDL占总的LDL的相对百分比含量。总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、用罗氏全自动生化分析仪测定。

1.3 统计学处理 计量资料比较用t检验，率及例数分布用χ2检验，多因素分析用多元逐步回归和偏回归分析，全部检验用SPSS 11.5软件运行，P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 冠脉造影阳性组和对照组血浆sdLDL变化，以sdLDL>50%为异常(表1)：与对照组比较，冠造阳性组sdLDL明显升高(P<0.01)，与冠造阴性组比较：冠造阳性组sd LDL也明显升高(P<0.01)。

表1 各组sdLDL(x±s)异常率比较

2.2 sdLDL与血脂水平的关系 根据2.1的结果将120份检测样本分为两组：sdLDL异常组与正常组。如表2所示，sdLDL异常组比正常组TG、LDLC、apoB水平均显著增高，HDL-C水平显著降低。sdLDL正常组TC水平低于异常组但未达到统计学意义(表 2)。

3 讨论

sdLDL易被氧化，促使泡沫细胞形成，与CHD的发生、发展呈高度相关性[6]，Coresh等[7]认为sdLDL常见于CHD发病前数年，与冠心病有明确的关系。检测sdLDL-C有助于冠状动脉硬化心血管疾病的早期预测与治疗过程中的疗效观察[8-10]。冠造阳性组血清sdLDL明显高于冠造阴性组与对照组，与相关报道一致。

表2 sdLDL异常组与正常组血脂指标(±s)

表2 sdLDL异常组与正常组血脂指标(±s)

注：与正常组比较：**P<0.01，*P<0.05。

指标 异常组(n=56) 正常组(n=54)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)apoB(g/L)4.56±1.05 1.52±0.53**1.27±0.34*2.68±0.47**0.98±0.28**4.48±0.86 0.98±0.35 1.40±0.24 2.36±0.51 0.74±0.21

既往报道，sdLDL 与 TG、HDL-C、apo-B 具有一定的相关性[11]。结果显示，sdLDL异常组TG水平增高，HDL-C水平降低，均与正常组存在显著差异，与 Rizzo等[12]报道高 sdLDL、高 TG、低 HDL-C为“动脉粥样硬化脂蛋白谱”一致。sdLDL致动脉粥样硬化作用较强的机制尚不清楚，可能与以下因素有关：颗粒小易透过动脉壁；颗粒表面极性分子减少，与动脉内膜上蛋白聚糖亲和力强；apoB等结构改变，不易被受体识别，清除缓慢，滞留时间长，进入动脉壁的机会多；颗粒表面保护层单薄，抗氧化成分少，易被氧化修饰等。

本文结果表明，sdLDL相对独立于CHD其他危险因素，其检测作为了解冠心病患者脂蛋白代谢紊乱的新指标，对评价冠心病的危险因素、实现对冠心病的早期检测预防及有效制定冠心病防治策略具有重大意义。

[1]鄢盛恺.临床血脂测定与应用[J].临床荟萃,2006,21(10):685-689.

[2]Austin MA,Hokanson JE,Brunzell JD.Characterization of lowdensity lipoprotein subclasses:methodologic approaches and clinical relevance[J].Curr Opin Lipidol,1994,5(6):395-403.

[3]洪流,林伟华,陈华英,等.纤溶系统标志物的变化在不同临床类型冠心病诊疗中的应用[J].实验与检验医学,2013,31(5):428-430.

[4]鄢圆圆,吕娇凤,黄波.冠心病患者血清Hcy和SOD的检测及临床意义[J].实验与检验医学,2013,31(2):166-167.

[5]Krauss RM,Burke DJ.Identification ofmultiple subclasses of plasma low density lipoproteins in normal humans [J].J Lipid Res,1982,23(1):97-104.

[6]李健斋,董军.冠心病脂蛋白谱研究进展[J].中华医学检验杂志,1997,20(6):327-329.

[7]Coresh J,Kwiterovich PO.Small,dense low-density lipoprotein particles and coronary heart disease risk[J].JAMA,1996,276(11):914-915.

[8]汪骅,韩崇旭,王惠民,等.基于纳米技术的芯片电泳快速检测脂蛋白及其亚型的研究[J].检验医学,2013,28(3)225-228.

[9]汪骅,韩崇旭,王惠民,等.聚二甲基硅氧烷微流控芯片电泳的临床应用研究[J].国际检验医学杂志,2012.33(1):4-6.

[10]Wang H,Han CX,Huimin Wang HM,et al.Simultaneous determination of high-density lipoprotein,very low-density lipoprotein and low-density lipoprotein subclass in human serum by microchip CE[J].Chromatographaia,2011,74(11-12):799-805.

[11]赵凤丽,廖仁昊,王拥军.低密度脂蛋白亚类与血脂的相关性观察[J].临床检验杂志,2005,23(5):363-364.

[12]Rizzo M,Berneis K.Low-density lipoprotein size and cardiovascular risk assessment[J].QJM,2006,99(1):1-14.