梅花鹿发情持续时间观察与二次输精方法研究

2014-03-24韩欢胜赵列平张海燕

特产研究 2014年2期

韩欢胜，赵列平，张海燕

(黑龙江省农垦科学院 a．哈尔滨特产研究所； b．畜牧兽医研究所，哈尔滨 150038)

人工授精技术作为动物遗传改良的重要手段，对发挥动物种质资源优势、加快遗传进展、提高动物生产性能具有重要生产意义。梅花鹿人工驯化时间短、野性强、发情鉴定难，输精最佳时机难于把握，人工输精受胎率较马鹿低，情期受胎率很难突破70%。研究表明，根据牛、羊受精机理，牛、羊在接近排卵时输精为较好时机，可获得高的受胎率[1]。实践中通过试情公鹿持续进行母鹿发情鉴定，在母鹿刚刚开始拒绝公鹿爬跨时输精，可获得较好的受胎率，但试情劳动强度较大。本研究对梅花鹿发情持续时间进行了系统地观测研究，在此基础上对梅花鹿人工输精方法进行了优化，亦即结合发情持续时间进行了2次输精试验，提出了新的输精方法。

1 材料与方法

1.1 供试动物

用于发情持续时间观测试验的成年梅花鹿母鹿31头，由哈尔滨金地鹿业有限公司提供。用于2次输精试验的梅花鹿母鹿21头，由黑龙江省富裕县梅花鹿场提供。全部为经产母鹿，7～9成膘，共计52头。

1.2 试验方法

母鹿发情持续时间采取试情公鹿全程跟踪的方法鉴定，即从进入发情季节开始(9月中、下旬)，用试情公鹿6∶00、11∶00、17∶00 3次试情，揭发出发情母鹿。出现发情的母鹿在10h后每隔2h再进行跟踪试情，直到拒绝爬跨，计算发情持续时间(发情母鹿接受试情公鹿爬跨到拒绝公鹿爬跨的时间)。

1次输精法：试情公鹿跟踪试情一直到发情母鹿拒绝爬跨，随即进行1次冷冻精液输精。

2次输精法：试情公鹿揭发出的母鹿出现发情后12h进行第1次输精，过4.5h～5h后进行第2次输精。

输精方法：采用直肠把握输精法，即将已涂润滑剂的手臂伸进保定好的母鹿直肠内，隔着直肠壁配合输精枪进行，将精液输入子宫体。

输精人员：为经过培训从事多年的鹿人工输精技术人员。

冷冻精液：由黑龙江农垦天山种鹿场提供，99-10号冻精，并经黑龙江省繁殖指导站质检合格，采用37.5℃～40℃水浴解冻，每0.25mL细管冻精解冻后有效精子数1000万以上，活力0.3以上。

受胎率确定方法：受胎率为第1情期受胎率，进入发情季节第1情期输精后，间隔1个情期通过公鹿试情未出现返情的，确定为人工输精受胎。第2情期返情并进行人工输精的鹿不计入本试验统计范围内。

2 结果与分析

2.1 发情持续时间(表1、图1)

表1发情持续时间统计表

Table1estrusdurationstatisticaltable

发情时段(h)timedistributionofestrus14≤a<1616≤a<1818≤a<2020≤a<2222≤a<2424≤a<26数量(头)number(head)982921比例(%)percentage290325816452903645323(X±S)1835±297范围 range14～2553

注：a.发情持续时间。

note:the letter a represents the duration of estrus.

从统计结果看，梅花鹿发情持续时间平均为18.35h±2.97h，范围是14h～25.53h，发情持续时间14h≤a<22h时段占90.32%，22h≤a<26h时段占9.68%，说明发情持续时间主要集中在14h≤a<22h之间。

另外，从图1看出，发情持续时间分布范围大，各时段比例不一变化大，在14h≤a<16h、16h≤a<18h、18h≤a<20h时段发情持续时间比例高，而在其它时段比例低，发情持续时间不一主要与个体、产龄、膘情与气候条件有关[2，3]。

2.2 梅花鹿2次输精(表2)

表2梅花鹿输精方式比较

Table2Comparisionofinseminationwaysinsikadeer

输精方式Inseminationways输精数(头)Inseminationnumber(head)准胎数(头)Conceptionnumber(head)受胎率(%)Conceptionpercentage普通冻精2次输精Thetwoinseminationinnormalfrozensemen3831816普通冻精1次输精Thefirstinseminationinnormalfrozensemen149643

表2结果表明，梅花鹿2次输精受胎率为81.6%，1次输精受胎率为64.3%，2次输精较1次输精受胎率提高17.3%(P<0.01)。说明2次输精可大幅度提高梅花鹿受胎率。

3 讨论

3.1 梅花鹿1次输精受胎率低的原因

梅花鹿公鹿试情1次输精受胎率低，在实际输精过程中情期受胎率很难突破70%[4]。主要原因是梅花鹿驯化程度低，警觉性高，发情末期母鹿发情症状不明显，通过公鹿试情准确地掌握拒爬时间比较难，不易准确掌握最佳输精时间；其次，梅花鹿受外界影响应激反应大，会影响排卵时间；另外，梅花鹿麻醉过程耗时比较长，容易延误输精时间。所以，即使采取公鹿试情全程跟踪的方法也很难确定输精最佳时机，往往不可避免地出现早输精或晚输精的现象，致使受胎率很难提高。生产实践中，采取公鹿试情输精时，大多输精员选择母鹿接受爬跨后16h～18h输精。笔者在2次输精和公鹿试情输精试验中推算，冻精在体内受精能力一般在6h内，卵子从卵巢排出到输卵管壶腹部滞留时间在2h以内，根据图1发情持续时间比例，在发情集中的16h～22h时段输精推算受胎率在61.29%左右。因鹿体发情持续时间差异，1次输精时只能覆盖发情集中期，不能达到100%；而在本研究中1次输精实际受胎率为64.3%，与其推算基本相符；说明梅花鹿公鹿试情输精受胎率受以上分析原因影响，受胎率很难提高，同时也基本证实了梅花鹿发情持续时间分布的规律性。

3.2 梅花鹿二次输精

依据发情持续时间分布规律和冻精(卵子)在体内受精时间，将人工输精覆盖在14h～26h时间段，采取2次输精。第1次在发情后12h开始麻醉输精，以覆盖14h≤a<20h发情的母鹿；在第1次输精后间隔4.5h～5h开始进行第2次麻醉输精，以覆盖20h≤a<26h时段发情的鹿。第1次麻醉输精选择12h，不选择14h，一是为了预留麻醉和输精时间，二是采取早、中、晚试情中间有间隔时间，揭发出的鹿往往不是第1发情时间，可能在试情前已经发情，所以要提前进行。2次输精中间间隔选择4.5h～5h，主要是为了给麻醉和输精预留一定时间，因麻醉和输精一般需要1h左右的时间。2次输精实际应用中，第1次输精时间应灵活进行，对于早上发情的鹿应根据发情表现，可以适当再提前。按理论推算2次输精已覆盖了整个发情时段，受胎率应达到100%，而本研究2次输精实际受胎率81.6%，笔者认为可能主要与冻精解冻后精子(卵子)在体内受精时间、发情母鹿应激反应、妊娠中断与第1次输精时间不易把握等因素有关，有待继续研究。

3.3 梅花鹿发情持续时间分布规律意义与2次输精利弊

梅花鹿发情持续时间规律为人工输精时间合理安排提供了参考依据，可使人工输精做到有的放矢。

2次输精益处：(1)输精覆盖受精时间范围广，较1次输精受胎率大大提高；(2)可减少全程跟踪试情时试情员的劳动强度，揭发出的母鹿不用再每隔2h～3h进行全程跟踪试情了，可在确定发情第1时间后，从12h开始每隔2h～3h后进行试情，减少了试情次数；(3)确定母鹿第1发情时间后，就可人为确定输精时间，可减少试情公鹿体力消耗，以更好地揭发发情母鹿，同时也降低了母鹿群因试情引起的应激反应；(4)第1情期受胎率增加，产仔率高、群体产仔将整体提前，便于集中管理，提高仔鹿成活率，增加养殖效益。

2次输精弊端：增加了母鹿的麻醉次数及其带来的不良反应，冷冻精液耗量增加，但从总体效益分析是利大于弊。

3.4 人工输精建议

发情鉴定可将输精管结扎(或带试情布)的试情公鹿与参配母鹿同圈，每圈15头～20头母鹿，用监控器进行发情观察，采用监控器回放的方式揭发出母鹿第1发情时间，结合发情持续时间分布规律，进行2次麻醉输精(12h，17h)或1次麻醉输精(17.5h)，以减少劳动强度，保证较高的受胎率。吉林双阳赵拥在实践中应用监控回放发情鉴定人工1次输精方法，2个情期受胎率80%左右，证明采用输精管结扎的公鹿试情和应用监控器进行发情鉴定定时输精在实践应用中可行。2次输精时，同时出现多只发情母鹿，在母鹿无布氏杆菌病、子宫炎、阴道炎等产科疾病的情况下，可1支冻精分2头鹿应用，减少精液的耗费量。

2次输精麻醉参考用药剂量，如采用青岛汉河生产的鹿眠宝(鹿醒宁)第1次梅花鹿可用1.2mL麻药，肌肉解药1.2mL；第2次麻醉2mL麻药，肌肉解药2mL，或静脉注射0.5mL解药，再肌肉注射1.5mL解药。如采用其它麻醉药品应按说明进行，并根据鹿体情况掌握用量，要以第1次麻醉后，在进行第2次麻醉时耗时要短、麻醉保定确实、用药适当为原则。