牛尾菜乙醇提取物抗类风湿性关节炎作用研究

陈人萍，张英华，刘卫，王琳

(1．吉林省中医药科学院，长春 130012； 2．长春医学高等专科学校，长春 130031)

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种病因尚未明了的慢性全身性炎症性疾病，以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现，急性活动期常伴有剧烈的晨僵、疼痛、肿胀等。许多细胞因子在RA发病过程中起着重要的作用[1，2]。白细胞介素-1β(IL-1β)在类风湿性关节炎的骨侵蚀和软骨破坏中发挥重要作用；白细胞介素-6(IL-6)在炎症细胞因子和免疫调节网络中具有关键性的作用[3]；肿瘤坏死因子(TNF-α)能刺激滑膜细胞和软骨细胞合成并释放前列腺素E2(PGE2)和胶原酶，引起骨和软骨的吸收破坏[4]。因此，降低血清中此类细胞因子的水平也是治疗类风湿性关节炎的途径之一。

牛尾菜为百合科植物牛尾菜(Smilax.riparia.A.DC.)的根及根茎，异名金刚豆藤、马尾伸根等，在全国分布较广，民间常用于治疗类风湿性关节炎[5]，但鲜见其药理作用的研究报道。为进一步证实牛尾菜抗类风湿性关节炎作用，本试验采用佐剂性关节炎模型[6]研究其乙醇提取物的抗炎作用及其对炎性细胞因子的影响；采用醋酸扭体和福尔马林模型[7]研究其镇痛作用。

1 实验材料

1.1 药品与试剂

牛尾菜乙醇提取物(吉林省中医药科学院植物化学研究所提供)；阿司匹林肠溶片(石家庄康力药业有限公司)；雷公藤多苷片(浙江得恩德制药有限公司)；弗氏完全佐剂(美国sigma公司)；IL-6、IL-1β和TNF-α ELISA试剂盒(上海森雄科技实业有限公司)。

1.2 试验动物

Wistar大鼠(98只，雌、雄各半，体重150g～200g，中国医学科学院试验动物研究所提供)；昆明种小鼠(50只，雌、雄各半，体重20g～24g，吉林大学试验动物中心提供)。

1.3 试验仪器

680型全自动酶标仪(美国BIO-RAD公司)；DH-360型电热恒温培养箱(北京中兴伟业仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 牛尾菜乙醇提取物抗炎作用研究

2.1.1牛尾菜乙醇提取物对佐剂关节炎大鼠足肿胀的影响取大鼠48只，雌、雄各半，随机分为6组，每组8只。第1组为空白对照组，第2组为模型对照组，第3组为阳性对照组(雷公藤多苷组，给药剂量为0.025g/kg)，第4组、第5组、第6组分别为牛尾菜乙醇提取物的高剂量组、中剂量组、低剂量组(给药剂量分别为0.6g/kg、0.3g/kg、0.15g/kg)，空白对照组大鼠右后足跖皮下注射0.1mL液体石蜡，其他组注射弗氏完全佐剂0.1mL致炎。致炎后第10天开始每天灌胃给药1次，对照组给予同体积蒸馏水，共给药12d。预先测量大鼠的正常右后足跖部周径，再分别于致炎后第13天、第17天和第21天测量大鼠右后足跖部周径，并以其与正常值的差作为足跖肿胀度，结果见表1。

表1牛尾菜乙醇提取物对佐剂性关节炎大鼠足肿胀的影响

Table1EffectsofethanolextractfromS.ripariaonadjuvant-inducedpawswellinginrats

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01Note： Compared with the model control group,*P<0.05,**P<0.01

结果表明，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg剂量组、0.3g/kg剂量组能够显著抑制大鼠的佐剂性关节炎继发性炎症。

2.1.2牛尾菜乙醇提取物对佐剂性关节炎大鼠炎性细胞因子的影响致炎后第21天，从大鼠腹腔主动脉采血，3000r/min离心5min，采用ELISA法测定IL-6、IL-1β和TNF-α含量，结果见表2。

表2牛尾菜乙醇提取物对佐剂性关节炎大鼠血清IL-6、IL-1β和TNF-α的影响

Table2EffectsofethanolextractfromS.ripariaonIL-6，IL-1β，andTNF-αintheserumofadjuvant-inducedarthritisrats

组 别Group剂量(g/kg)DoseIL-6IL-1βTNF-α(pg/mL，X±SD)空白对照组Blankcontrol—506±363470±064327±034模型对照组Modelcontrol—664±452#592±445#346±047#阳性对照组Positivecontrol0025520±281∗473±081∗325±049∗∗牛尾菜乙醇提取物EthanolextractfromSmilaxriparia06485±218∗∗470±088∗326±058∗03574±730488±094∗329±063∗015654±344501±092331±054

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与空白对照组比较，#P<0.05

Note:Compared with the model control group,*P<0.05，**P<0.01;compared with the blank group,#P<0.05

结果表明，与空白对照组比较，模型对照组佐剂性关节炎大鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF-α含量显著升高；与模型对照组比较，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg和0.3g/kg剂量组大鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF-α含量显著降低，并且与阳性对照组比较无显著性差异。

2.2 牛尾菜乙醇提取物镇痛作用研究

2.2.1牛尾菜乙醇提取物对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响取小鼠50只，雌、雄各半，随机分为5组，每组10只。第1组为模型对照组，第2组为阳性对照组(阿司匹林组，给药剂量0.1g/kg)，第3组、第4组、第5组分别为牛尾菜乙醇提取物的高剂量组、中剂量组、低剂量组(给药剂量分别为0.8g/kg、0.4g/kg、0.2g/kg)，连续灌胃6d，每天给药1次，对照组给予同体积蒸馏水。于末次给药后1h，腹腔注射0.8%醋酸溶液0.2mL，记录15min内小鼠的扭体次数，结果见表3。

结果表明，牛尾菜乙醇提取物0.8g/kg剂量组和0.4g/kg剂量组能显著抑制醋酸所致小鼠疼痛反应，和阳性对照组比较，无显著性差异，并且0.8g/kg剂量组作用强于0.1g/kg阳性对照组。

2.2.2牛尾菜乙醇提取物对福尔马林所致大鼠疼痛反应的影响取大鼠50只，雌、雄各半，随机分为5组，每组10只。第1组为模型对照组，第2组为阳性对照组(阿司匹林组，给药剂量0.1g/kg)，第3组、第4组、第5组分别为牛尾菜乙醇提取物的高剂量组、中剂量组、低剂量组(给药剂量分别为0.6g/kg、0.3g/kg、0.15g/kg)。连续灌胃6d，每天给药1次，对照组给予同体积蒸馏水。于末次给药后1h，右侧后跖皮下注射2.0%的福尔马林溶液0.1mL，记录注射后0min～5min(第1时相)和15min～30min(第2时相)大鼠舔致炎足(即疼痛反应)的累积时间，结果见表4。

表3牛尾菜乙醇提取物对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响

Table3EffectsofethanolextractfromS.ripariaonaceticacid-inducedwrithingreactioninmice

组 别Group剂量(g/kg)Dose扭体次数Writhingtimes(X±SD)模型对照组Modelcontrol—171±132阳性对照组Positivecontrol01103±139∗∗牛尾菜乙醇提取物EthanolextractfromSmilax．riparia0881±104∗∗04119±184∗02137±161

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。下表同。

Note:Compared with the model control group,*P<0.05，**P<0.01.The same as in the following table.

表4牛尾菜乙醇提取物对福尔马林所致大鼠疼痛反应的影响

Table4EffectsofethanolextractfromS.ripariaonFormalin-inducedpainreactioninrats

组 别Group剂量(g/kg)Dose疼痛反应持续时间 Durationofpainreaction(s，X±SD)第1时相Firstphase(0min～5min)第2时相Secondphase(15min～30min)模型对照组Modelcontrol—626±6412515±1559阳性对照组Positivecontrol01430±481∗1998±1427∗牛尾菜乙醇提取物EthanolextractfromSmilax．riparia06331±389∗∗1633±980∗∗03370±561∗∗1995±1419∗015387±650∗1948±1587∗

结果表明，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg、0.3g/kg和0.15g/kg剂量组均能显著抑制福尔马林所致大鼠疼痛反应，且对疼痛的2个时相均有显著的抑制作用。

3 结论

在牛尾菜乙醇提取物抗炎作用研究试验中，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg剂量组、0.3g/kg剂量组能够显著抑制大鼠的佐剂性关节炎继发性炎症；对炎性细胞因子影响的试验中，与模型对照组比较，牛尾菜乙醇提取物0.6g/kg剂量组和0.3g/kg剂量组对大鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF-α含量有显著的抑制作用，并且与阳性对照组比较无显著性差异。

在牛尾菜乙醇提取物镇痛作用中，牛尾菜乙醇提取物0.8g/kg剂量组和0.4g/kg剂量组对醋酸所致小鼠疼痛反应有显著的抑制作用，且0.8g/kg剂量组作用强于阳性对照组0.1g/kg(P<0.01)；而牛尾菜乙醇提取物各个剂量组均能显著抑制福尔马林所致大鼠疼痛反应的2个时相。

疼痛和炎症是类风湿性关节炎的两大主要症状，试验结果表明，牛尾菜乙醇提取物具有抗类风湿性关节炎作用，可望为治疗类风湿性关节炎提供新的药物。

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