采用新液相色谱仪检定规程检定荧光检测器

何海红　何雅娟

(中国计量科学研究院，北京 100029)

0　引言

液相色谱仪用荧光检测器属于选择性检测器，其灵敏度在液相色谱仪所有常用检测器中是最高的，主要用来测量能够产生荧光的样品，如水中的多环芳烃，也可以用来检测本身不产生荧光但经过衍生化后可产生荧光的物质，如某些酚类或氨基酸类物质。

对于荧光检测器的检定，按JJG 705—2002液相色谱仪检定规程的要求，需采用硫酸奎宁样品。但是，在实际检定中，经常出现高浓度硫酸奎宁样品峰形分叉或变形的情况，使检定过程很困难。鉴于此，在新修订的JJG 705—2014液相色谱仪检定规程(于2014年8月14日实施)中，对荧光检测器的检定，样品改用萘-甲醇溶液，避免了以上的情况发生，使得检定可以顺利进行。

本文以Agilent1100型荧光检测器的检定例，介绍如何按照新检定规程要求，对荧光检测器进行检定，以供广大检定员参考，方便大家的日常检定工作。

1　实验部分

1.1　主要仪器与试剂

配置荧光检测器的Agilent 1100液相色谱系统。

甲醇：色谱纯，merk公司。

萘-甲醇：标物编号GBW(E)130167，1.00×10-4g/mL，U=4％，k=2；标物编号GBW(E)130168，1.00×10-7g/mL，U=4％，k=2。

移液器：Eppendorf，1mL。

容量瓶：10mL，A级别。

1.2　色谱条件

色谱柱：AgilentZORBAX Eclipse XDB C-18(150mm×4.6mm,3.5μm)；流动相：甲醇；流速：1.0mL/min；激发波长Ex=290nm，发射波长Em=330nm。

2　荧光检测器检定

2.1　检定过程

1)打开仪器电源，安装色谱柱与放好流动相，然后，打开检测器氙灯灯与泵进行预热，按照1.2的条件对仪器进行设定，等30min后仪器达到稳定状态；

2)用标物编号GBW(E)130167萘-甲醇溶液稀释10倍，得到1.00×10-5g/mL的萘-甲醇溶液，然后，用此溶液进行定性定量重复性检定，连续进样7次，每次进样10μL，取后面6次作为定性定量重复性数据，记录每个数据中萘-甲醇的保留时间和峰面积，分别计算保留时间和峰面积的相对标准偏差；

3)用标物编号GBW(E)130168，1.00×10-7g/mL萘-甲醇溶液进行最小检测浓度检定，连续进样3次，每次进样20μL，记录每个数据中萘-甲醇的峰高，取3个峰高值的平均值作为最终峰高值。

4)按照1.2色谱条件，不进样，采集30min空白基线，记录色谱图。

2.2　检定数据

1)萘-甲醇溶液在Agilent 1100荧光检测器上的定性定量重复性色谱图见图1，定性定量重复性测定数据见表1。

图1　萘-甲醇溶液定性定量重复性色谱图

表1　萘-甲醇溶液定性定量重复性数据

注：LU是1100荧光检测器纵坐标单位

2)萘-甲醇溶液在Agilent 1100荧光检测器上的最小检测浓度数据色谱图见图2，最小检测浓度峰高数据见表2，最小检测浓度最终结果见表3。计算公式见式(1):

图2　萘-甲醇溶液最小检测浓度色谱图

表2　萘-甲醇溶液最小检测浓度峰高数据

表3　萘-甲醇溶液最小检测浓度数据

(1)

式中，cL为最小检测浓度，g/mL；Nd为基线噪声峰高；c为标准溶液浓度，g/mL；V为进样体积，μL；H为标准物质峰高。

3)Agilent1100荧光检测器上的噪音数据色谱图见图3，漂移数据色谱图见图4，噪音、漂移数据见表4。

图3　1100荧光检测器噪音色谱图

图4　1100荧光检测器漂移色谱图

表4　1100荧光检测器噪音、漂移数据

4)Agilent 1100荧光检测器检定结果汇总见表5。

表5　1100荧光检测器检定结果汇总

3　结语

从以上的数据可以看出，在日常液相色谱仪的检定工作中，按照JJG 705—2014 液相色谱仪检定规程的要求进行设定，可以顺利的进行液相色谱仪用荧光检测器的检定工作。这次规程修订将流动相改成100％甲醇，同时提高了串联检测器的检定效率。规程的完善需要广大检定员共同的努力，在实际工作中会碰到各种问题，希望大家能多交流多讨论，让我们的检定规程更加科学和完善。

[1]JJG 705—2014 液相色谱仪检定规程.北京：中国质检出版社，2014

[2]JJG 705—2002 液相色谱仪检定规程.北京：中国计量出版社，2002

[3]汪正范.色谱定性与定量.北京：化学工业出版社，2000

[4]张庆和.高效液相色谱实用手册.北京：化学工业出版社，2008

[5]于世林.高效液相色谱方法及应用.北京：化学工业出版社，2000