细胞块免疫组化在恶性小细胞肿瘤胸腔转移中的临床病理分析

沈湘萍，陈艳，张小伟

细胞块免疫组化在恶性小细胞肿瘤胸腔转移中的临床病理分析

沈湘萍，陈艳，张小伟

目的探讨胸腔积液细胞块技术结合免疫组化在恶性小细胞肿瘤中的诊断价值。方法应用常规细胞学涂片筛查疑似恶性胸腔积液20例，离心沉渣石蜡包埋切片后，应用免疫组织化学染色明确诊断及组织来源，筛选恶性小细胞肿瘤与间皮病变、淋巴造血系统肿瘤、鳞状细胞癌及肺腺癌鉴别诊断相关的免疫标记组合。结果20份疑似恶性胸腔积液标本中发现恶性小细胞癌肿瘤5例，4例鳞状细胞癌细胞，4例腺癌细胞，1例B细胞性恶性淋巴瘤细胞，1例恶性间皮瘤，余5例除外恶性肿瘤细胞。结论胸腔积液细胞块对诊断恶性胸腔积液具有一定的价值，结合免疫组化选择适当的抗体组合对恶性小细胞肿瘤的鉴别诊断具有重要意义。

细胞块；免疫组化；恶性小细胞肿瘤

浆膜腔积液中恶性小细胞肿瘤的诊断是常规细胞涂片中的一个难点。应用胸腔积液细胞蜡块结合免疫组化方法能补充常规细胞涂片的不足，提高对浆膜腔积液中恶性小细胞肿瘤诊断的阳性率，以免漏诊或误诊。本研究旨在通过改进胸腔积液的诊断方法，探讨恶性小细胞肿瘤和间皮病变、淋巴造血系统肿瘤、鳞状细胞癌及肺腺癌鉴别诊断的有效途径，进一步提高细胞病理在诊断恶性浆膜腔积液中的阳性率，为临床诊断和治疗提供科学依据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2010年5月至2012年12月浙江省东阳市人民医院细胞病理资料，纳入标准：送检标本均为胸腔积液350例，应用常规细胞学涂片筛查选择疑似恶性胸腔积液20例，进行制作细胞块。其中男12例，女8例；年龄45～77岁，中位年龄61岁。

1.2 方法

1.2.1 常规细胞涂片所有标本各取100m l，3000 r/m in，离心10m in，取部分离心沉渣制备HE涂片，由高年资细胞病理医师进行形态学观察，根据细胞形态、核不典型性和黏附性分为良性、疑似恶性。（1）良性：反应性增生间皮细胞(细胞弥散、形态温和及无不典型性)；（2）恶性：转移性小细胞肿瘤和与恶性间皮瘤、淋巴造血系统肿瘤、鳞状细胞癌、肺腺癌(细胞成团、细胞形态及核具重度不典型性)。

1.2.2 细胞块制作选择常规细胞涂片疑似恶性胸腔积液标本20例，将固定后的标本离心(3 000 r/m in)，弃上液，沥干离心管壁上的液体，将组织胶(Histogel)加热融化后，适量滴入含有标本的离心管，摇匀，10℃左右放置20～30min。将凝固后形成锥形的细胞块取出，常规脱水、透明、浸蜡后包埋，切片行HE染色。采用EnVision两步法，所用抗体CK7、CD30、CD68、CD20、CD3、CD15、LCA、P16、P63、CEA、TTF-1、SYN、CGA、CD56、CK5/6、AE1/AE3、Calretinin、WT-1、HBME-1和VIM均为工作液，均购自上海基因科技有限公司，染色过程按说明书进行，用DAB显色。

1.2.3 免疫组化判读每批染色以PBS代替一抗设立空白对照，染色切片中采用已知阳性组织同时染色设立阳性对照。选择支持小细胞肿瘤的免疫组化指标：SYN、CGA、CD56、P16、AE1/AE3；支持间皮细胞的免疫组化指标：CK5/6、calretinin、HBME-1、WT-1和VIM；支持肺腺癌的免疫组化指标：CK7、AE1/ AE3、CD15、CEA、TTF-1；支持淋巴造血系统肿瘤的免疫组化指标：LCA、CD15、 CD 30等；支持鳞状细胞癌的免疫组化系统：CK5/6、P63，CD68阳性为组织细胞。结果判断：TTF1、P63、P16、WT-1呈棕黄色细胞核染色且阳性细胞率≥10%视为阳性；CK7、CEA、CK5/6、AE1/AE3、VIM、Calretinin、HBME-1、SYN、CGA、CD 68呈棕黄色细胞质染色且阳性细胞率≥10%视为阳性；CD15、CD30、LCA、CD 56、CD 20、CD 3呈棕黄色细胞膜染色且阳性细胞率≥10%视为阳性。

2 结果

2.1 常规细胞涂片HE镜下特点胸腔积液小细胞肺癌细胞涂片由小圆、椭圆或梭形细胞组成，其细胞大小约为正常间皮大小，约为成熟淋巴细胞2倍大小，细胞分布疏松、不规则，细胞之间相互挤压、嵌套（封三彩图4～5）。细胞核质比高，胞浆少，细胞核深染，可见核内有分布较为均匀的细小的染色质颗粒，无或仅有小的核仁，可见分裂象及坏死。因其细胞十分脆弱，故在涂片制作过程中易出现细胞被破坏而形成的“拉丝”现象。临床工作中难以跟低分化鳞状细胞癌、腺癌、间皮病变及淋巴造血系统鉴别。

2.2 免疫表型20份疑似恶性胸腔积液标本中5例小细胞肿瘤中对CK、CGA、CD56和SYN均有较高阳性表达率，4例低分化鳞状细胞癌对CK 5/6和P63有较高阳性表达率，4例肺腺癌对CK 7、TTF1、CEA有较高阳性表达率，1

例间皮病变对Calretinin、WT-1、HBME-1和VIM有较高表达率，1例淋巴瘤对LCA等有较高表达率。

3 讨论

虽然恶性小细胞肿瘤有一定的细胞学特点：如癌细胞小，小于2～3个小淋巴细胞，呈卵圆形或梭形，胞质少，几乎为裸核细胞界限不清，核染色质细颗粒状，分布均匀，不形成明显染色质团块，有时表现出经典的“盐椒粉”状特点，癌细胞成堆、成巢分布，互相镶嵌，也可见单个癌细胞呈线性排列，有时形成的“拉丝”现象[1-2]。但临床工作中仍然难以跟低分化鳞状细胞癌、腺癌、恶性淋巴瘤及间皮病变等鉴别，且常规的细胞学涂片法所收集的细胞数量少，常有大量红细胞、炎性渗出物及黏液混杂在一起，造成背景不清晰，同时细胞厚薄不均匀，细胞多层重叠较为严重，有些阳性细胞甚至被干扰物所覆盖，并且结构不清，面积大而敏感度较低，常导致癌细胞的检出出现假阴性。

细胞块制作简单且可避免常规细胞涂片的不足，蜡块又可以像常规活检组织块一样反复间断切片，有利于多种抗体组合运用或对某一特定细胞的比较观察，阳性颗粒为棕黄色或棕褐色，定位准确可靠、背景清晰，提高了阳性率，对恶性小细胞肿瘤胸腔转移的诊断意义重大。

免疫组织化学标记物常包括CGA、SYN、CD56和CK等[3-4]，诊断恶性小细胞肿瘤时一般应具有上述列举的3项标记物中的两项呈阳性结果。另外TTF-1及P63在恶性小细胞肿瘤中也有较高表达。鉴别诊断：（1）低分化鳞状细胞癌CK5/6、P63等组合；（2）恶性淋巴瘤LCA、CD20、CD3等组合[5]；（3）腺癌CEA、CK7、TTF1等组合[6]；（4）间皮病变Calretinin、WT-1、HBME-1和VIM等组合[7-8]。

恶性小细胞肿瘤是肺癌中恶性程度较高的一种，其有恶性程度高、进展迅速、容易发生转移，特别是易转移至胸膜腔至胸膜腔大量积液等预后差的特征。肺小细胞癌临床症状明显，以咳嗽和咳血痰为最常见的表现，因一部分患者以胸腔大量积液为首发症状且小细胞肿瘤患者目前多采用化疗而非手术治疗，故细胞学检测对确诊小细胞肿瘤有重要意义。

总之，本研究结果显示在结合临床的基础上利用细胞块技术HE染色观察恶性小细胞肿瘤细胞形态结合免疫组织化学检查可大大提高检出率，且明确了组织来源，在恶性小细胞肿瘤胸腔转移的诊断中作用显著。在胸腔积液细胞学涂片诊断困难时，利用细胞块结合免疫组化技术作为辅助方法，能有效提高恶性小细胞肿瘤的阳性检出率，减少漏诊及误诊的发生，值得临床推广。

[1]岑玉兰,金克群.30例肺小细胞癌的细胞学诊断及鉴别诊断[J].检验医学与临床,2010,7(15):1612-1613.

[2]李香菊,王萍,张春花,等.液基细胞学与经支气管针吸活检在肺癌诊断中应用[J].临床与实验病理学杂志,2013,29(1):58-62.

[3]虞红珍,吴强,秦蓉,等.联合组织学与细胞学对肺小细胞癌的诊断和鉴别诊断[J].临床与实验病理学杂志,2012,28(1):61-64.

[4]周晓军,黄文斌.免疫组化在小圆细胞未分化恶性肿瘤中的应用[J].临床与实验病理学杂志,2009,25(3):232-235.

[5]周小鸽.淋巴瘤病理诊断中的抗体选择[J].诊断病理学杂志,2010,17(1):4-6.

[6]陈江帆,杜明伟,姜海娇,等.免疫细胞化学方法对胸腔积液中恶性肿瘤细胞的分类与诊断[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2013,22(1):49-53.

[7]Ascoli V, Bosco D, Carnovale Scalzo C.Cy tologic re-evaluation of negative effusions from patients with malignant mesothelioma[J]. Pathologica, 2011, 103(6): 318-324

[8]Hasegawa S, Kondo N, Matsumoto S, et al. Practical approaches to diagnose and treat for T0 malignant pleural mesothelioma: a proposal for diagnostic total parietal pleurectomy[J]. Int J Clin Oncol, 2012, 17(1): 33-39.

10.3969/j.issn.1671-0800.2014.06.023

R446.6

A

1671-0800(2014)06-0686-02

322100 浙江省东阳，东阳市红十字会医院（沈湘萍）；东阳市红十字会医院（陈艳、张小伟）

沈湘萍，Email：zhangxiao 131456@163.com