糖尿病大鼠早期近端肾小管葡萄糖转运蛋白2表达增高

王卫娜，栗 亮，范小琴，高 原*

(1.遵义医学院珠海校区生理学教研室，广东珠海519090;2.南阳医学高等专科学校生理学教研室，河南南阳473000;3.枣庄职业学院医学院基础医学教研室，山东枣庄277800)

糖尿病肾病是1 型和2 型糖尿病的主要慢性并发症之一，糖尿病肾病的发生及发展中氧化应激等多种因素起重要作用。葡萄糖转运蛋白(glucose protein 2，GLUT2)受到人们的重视，也是因为他可能在糖尿病肾病的发生发展中起着重要作用［1］。本实验探讨GLUT2 在实验性糖尿病大鼠早期肾脏中的变化。

1 材料与方法

1.1 实验材料及动物与分组:清洁级雄性SD 大鼠:清洁级，体质量(200 ±15)g，中山大学动物实验中心提供，合格证号SCXK(粤)2007-0011，随机分为对照组和常规复制糖尿病模型。材料:STZ(Sigma 公司)，兔抗大鼠GLUT2 多克隆抗体(ABSUN 公司)，BCA 蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术研究所)，Mouse anti.ACTIN 单克隆抗体(PTGLAB公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 肾小管刷状缘膜(BBMV)的制备:在1、2、4、6 周末处死动物取肾，用4 ℃的0.9%氯化钠注射液冲洗干净，取其皮质，称重后剪碎;按照重量加入稀释液1，倒入手动匀浆器并加入蛋白酶抑制剂后匀浆;加入1 mol/L MgCl2，使其终浓度为10 mmol/L。混匀后0 ℃放置20 min。在4 ℃2 500 ×g离心30 min，取上清液;在4 ℃16 500 ×g 离心60 min保留沉淀，用介质2 充分悬浮后在4 ℃16 500 ×g 离心60 min;保留沉淀，即为肾小管上皮细胞刷状缘膜，冻存于－80 ℃深低温冰箱，用Bradford 法测定蛋白浓度保证上样浓度的一致性。

1.2.2 肾脏GLUT2 表达的检测:分别以免疫组化和Western blot 法检测GLUT2 蛋白，实验过程按说明书操作。

1.3 统计学分析

采用SPSS18.0 软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差(±s)表示，多组间比较采用方差分析，两两组间比较采用LSD-t 检验。相关性行直线相关回归分析。

2 结果

2.1 糖尿病大鼠早期肾脏GLUT2 的免疫组化染色:与对照组相比，模型组肾小管GLUT2 蛋白量明显增高，4 周时增高更显著(P＜0.05)(图1，表1)。

2.2 Western blot 检测GLUT2 蛋白表达:与对照组相比，模型组GLUT2 蛋白含量明显升高(P＜0.05)，4 周组GLUT2 表达量增加更显著(P＜0.05)(图2，表1)。

表1 各组GLUT2 的免疫组化及Western blot平均吸光度Table 1 The absorbance value of Immunohistochemistry and Western blot in brush-border membrane vesicles GLUT2 protein content in each group(±s，A，n=10)

表1 各组GLUT2 的免疫组化及Western blot平均吸光度Table 1 The absorbance value of Immunohistochemistry and Western blot in brush-border membrane vesicles GLUT2 protein content in each group(±s，A，n=10)

*P＜0.05 compared with control;#P＜0.05 compared with 4 weeks group.

groupWestern blotimmunohistochemistry control0.42 ±0.160.21 ±0.10 model1 week0.75 ±0.11* #0.37 ±0.03* #2 weeks0.79 ±0.03* #0.42 ±0.01* #4 weeks1.20 ±0.01*0.63 ±0.04*6 weeks0.81 ±0.12* #0.45 ±0.02*#

2.3 糖尿病大鼠GLUT2 与血胰岛素、血糖相关性分析:糖尿病大鼠4 周时GLUT2 吸光度值与血糖成正相关(P＜0.05)，与胰岛素值成负相关(P＜0.05)。

3 讨论

图1 糖尿病大鼠早期肾脏GLUT2 的免疫组化染色变化Fig 1 Immunohistochemistry stain in control group and diabetic model groups (×200)

图2 Western blot 测定各组GLUT2 蛋白Fig 2 Identification of GLUT2 protein and anti-action by Western blot

糖尿病及其并发症的发病机制至今尚未明确，肾脏高功能是糖尿病肾损害早期肾脏进行性功能代偿的表现。表现GLUT2 蛋白的增高。至于它的这种变化是否与以上的因素存在着因果关系，或者说是由于它们的变化引起的，还有待于进一步的研究。有细胞膜上与物质跨膜转运有关的一些重要的功能蛋白表达增强，活性增加［2-3］，那么在糖尿病背景下，肾小管高功能的代偿过程中GLUT2 表达如何变化。本研究发现GLUT2蛋白的表达增加且具有一定的规律，另外糖尿病大鼠血肌酐、血压、肾比重升高，这些和前人研究共同说明了糖尿病早期的代偿表现。

实验观察到大鼠糖尿病早期肾小管GLUT2 蛋白含量的高表达可能和血糖以及血胰岛素的变化有关。糖尿病大鼠葡萄糖的重吸收增高，而且葡萄糖重吸收增高也伴随着

［1］Király MA，Bates HE，Kaniuk NA.Swim training prevents hyperglycemia in ZDF rats:mechanisms involved in the partial maintenance of beta-cell function［J］.Am J Physiol Endocrinol Metab，2008:271-283.

［2］Hassan Rahmoune，Paul W.Thompson Glucose.Transporters in human renal proximal tubular cells isolated from the urine of patients with non-insulin-dependent diabetes［J］.Diabetes，2005:3427-3434.

［3］Lehnen AM1，Leguisamo NM，Dias LD.Changes in renal glucose transporters in an animal model of metabolic syndrome［J］.Horm Metab Res，2013，45:840-843.