高效液相色谱法测定茶叶中的茶多酚

康明艳，李悦，魏文静，静宝元

（天津渤海职业技术学院，天津300402）

高效液相色谱法测定茶叶中的茶多酚

康明艳，李悦，魏文静，静宝元

（天津渤海职业技术学院，天津300402）

采用高效液相法，应用L-3000高效液相色谱系统建立了茶叶提取物中茶多酚的分析分离方法，取得了理想的分离效果。实验证明该方法前处理简便，分析结果准确度高，精密度好，非常适合用于测定绿茶提取物中的茶多酚。

茶叶；茶多酚；高效液相色谱法

茶多酚是一类存在于茶树中的多羟基酚类化合物的简称，尤以茶叶中含量最高，干茶叶中含茶多酚在30%左右。茶多酚主要包括儿茶素类（黄烷酮类），黄酮，黄酮醇类，花青素类，花白素类和酚酸及缩酚酸类。其中儿茶素类是茶多酚的主体组分，约占茶多酚总量的90%左右[1]。

茶多酚是茶叶中最具生物活性的成分，尤其其中的主要组分儿茶素。研究证实儿茶素具有良好的抗氧化能力，同时具有抗肿瘤，抗诱变，预防龋齿等功效。因此儿茶素日益受到人们重视，成为一类重要的食品添加剂和药物成分[2]。

在茶多酚的色谱分析方法中，反相HPLC法是目前普遍使用，技术最为成熟的方法。本文应用北京普源精仪科技有限责任公司自主研发的RIGOL L-3000高效液相色谱仪建立了绿茶提取物中茶多酚的分离分析方法。实验证明该方法分离效果好，分析准确度高，重现性好。同时，RIGOLL-3000高效液相色谱仪非常适用于绿茶提取物中茶多酚的分离分析工作。

1材料与方法

1.1 仪器及试剂

RIGOL L-3000高效液相色谱系统（配L-3300自动进样器）：北京普源精仪科技有限责任公司；超milli-Q纯水纯化系统：美国Millipore；BT 124S天平：德国塞多利斯；粉碎机：天津泰斯特FW 80；PHSJ-4A酸度计：上海雷磁；10μL～100μL/100μL～1 000μL移液枪：eppendorf；绿茶提取物：某天然产物公司；其余试剂均为市售HPLC级或分析纯。

1.2 色谱条件

色谱柱：Rigol：Compass，C18，5μm，4.6×250 mm id，柱温：35℃；进样量：10μL；流动相：A为乙腈：水：TFA溶液；B为乙腈：水溶液，采用梯度洗脱。

表1 梯度方法参数Table1 Gradient method parameters

1.3 试样准备

1.3.1 样品溶液的制备[3]

精密称取绿茶提取物（从绿茶中经过一系列工业提取纯化制得）约23mg，置于10mL容量瓶中，加80%乙醇溶解，超声提取20min，加80%乙醇定容，以0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为样品供试液备用。

1.4 实验方法

1.4.1 样品测试[4]

在选定的色谱条件下以样品供试液进样，进样量10μL。

2结果及讨论

2.1 样品的分离

图1 绿茶提取物样品的色谱分离图Fig.1 Green tea extract chromatographic separation of sample map

2.2 精密度实验

取茶叶提取物供试溶液连续进样6次，进样量10μL[5]。根据测定结果，计算保留时间及峰面积的RSD（相对标准偏差），得到图2结果。

图2 样品重复性实验谱图Fig.2 Experimental spectra of sample reproducibility

以上实验结果该方法可将绿茶提取物中茶多酚的多种成分分离开，定性定量重复性好。

2.3 流动相的选择实验

流动相的选择实验发现，茶叶成分的分析多采用梯度洗脱，其调节酸碱度的试剂多种多样，可以用醋酸、磷酸、DMF、TFA等，分析时间从十几分钟到1 h不等。本实验先采用磷酸盐做流动相分析，出峰少且峰型不理想，后改用TFA，得到的峰型对称性比较好。

表2 精密度实验结果Tab le2 Precision of experimental results

此外，文献采用的梯度方法是A相在17 min内由100%变化到25%[6]，采用这一方法实际的结果显示，DL-C和EC分离效果不理想，调整了梯度方法后，这一问题得到了解决。

3结论

应用RIGOL L-3000高效液相色谱仪，采用本文的方法进行绿茶提取物中茶多酚活性物质的分离分析实验，结果准确，重现性好。该仪器与方法结合，可充分满足绿茶提取物产品质量控制的实验要求。

[1]王宏展．茶叶食品开拓研究[M]．北京：中国农业出版社,1995：149-158

[2]方元超,赵晋府.茶饮料生产技术[M]．北京：中国轻工业出版社, 2001：23-25,325-326

[3]胡秋辉．茶叶中茶多酚和咖啡因提取技术研究[J]．天然产物研究与开发,1997：63-66

[4]陈鹤立．高效液相色谱法测定茶叶中茶多酚及咖啡碱含量[J]．福建医药,2006：80-81

[5]陈海军．茶多酚的生理保健功能及检测方法探析[J]．广西轻工业,2009：4-6

[6]钱骅,赵伯涛,张卫明.茶多酚提取、分离工艺研究[J]．中成药, 1998：8

Determination of Tea Polyphenols by HPLC

KANGMing-yan，LIYue，WEIWen-jing，JINGBao-yuan
（Tianjin Bohai Vocational and Technical College，Tianjin 300402，China）

In this paper，HPLC，applied L-3000 HPLC system established tea extract polyphenols analysis and separation methods，achieved the desired separation.Experiments show that this method is simple pre-processing，analysis accuracy，Good precision，is very suitable for the determination of polyphenols in green tea extract.

tea；polyphenols；HPLC

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.15.026

2013-11-11

康明艳（1975—），女（汉），讲师，硕士研究生，研究方向：化学工程。