益母草不同提取物调经作用研究

李丹，谢晓芳，彭成，熊亮，赵小梅

·药理毒理·

益母草不同提取物调经作用研究

李丹，谢晓芳，彭成，熊亮，赵小梅

目的：探讨益母草不同提取物对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩功能的影响，寻找调经活性部位。方法：从益母草中提取分离3个不同提取物，分别为益母草水部位（W1）、乙酸乙酯部位（Et）和正丁醇部位（Bu）；采用未孕大鼠离体子宫模型观察3种提取物对子宫收缩的活动力、张力和频率的影响，用BL-420E生物机能系统记录子宫收缩曲线。结果：W1、Bu均使子宫活动力、收缩张力均值和最小值明显增加（P＜0.05或P＜0.01），且呈一定量效关系；3种提取物均可抑制缩宫素对子宫的收缩作用，使子宫活动力、收缩张力的均值和最大值显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。结论：提取物对未孕大鼠正常子宫具有兴奋作用，而对缩宫素所致痉挛子宫具有舒张作用；提示益母草对子宫活动具有双向调节作用，活性物质主要是益母草水部位和正丁醇部位。

益母草；离体子宫；活性部位；双向调节

益母草为唇形科一年生或二年生草本植物益母草（Leonurus japonicus Houtt.）的地上部分，具有活血调经、利水消肿的功效，临床主要用于治疗月经不调、产后腹痛、小便不利、水肿等[1]。目前临床使用的益母草制剂品种较多，大多采用水煎醇提为基础的制备工艺[2]。本实验从益母草药材中提取乙酸乙酯部位（Et）、正丁醇部位（Bu）、水部位（W1），采用离体子宫模型观察3种不同提取物对子宫活动的影响，明确益母草的调经作用及活性物质基础。

1 实验材料

1.1 提取物制备

取益母草药材2 kg，加入10倍量95%乙醇回流提取3次，合并过滤，滤液浓缩得到浸膏500 g，将浸膏用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部位提取物（Et，每g相当于40 g生药），再将萃取后浸膏加入正丁醇萃取得到正丁醇部位提取物（Bu，每g相当于100 g生药），剩余的为水部位提取物（W1，每g相当于25 g生药）。试验前将3种提取物用蒸馏水配成6 g生药/ mL，备用。

1.2 实验动物

SD大鼠，普通级，全雌，体重180～220 g，由成都中医药大学实验动物研究中心提供，质量合格证号：SCXK（川）2008-11，检疫后用。

1.3 主要试剂及仪器

缩宫素注射液（河南辅仁怀庆堂制药有限公司，批号1204021），苯甲酸雌二醇注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批号1005051）；NaCl、KCl、CaCl2、NaHCO3、葡萄糖试剂，均由成都市科龙化工试剂公司生产，采用去离子水配置洛氏液（配置方法：1000 mL含NaCl 9.2 g、KC1 0.42 g、CaCl20.24 g、NaHCO30.15 g、葡萄糖1.0 g)；BL-420E生物机能系统，JH-2型张力换能器，HW-400E型恒温水浴平滑肌槽，均由成都泰盟科技有限公司生产。

2 实验方法

2.1 离体子宫的制备[3]

取健康、成年雌性未孕大鼠，实验前2 d每日肌肉注射苯甲酸雌二醇1 mg﹒kg-1造成动情期。于第3 d颈椎脱臼处死动物，迅速剪开腹腔剖取子宫置于盛有洛氏液的玻璃皿中，轻轻剥离子宫上附有的结缔组织和脂肪组织。取子宫中间段2～3 cm，一端固定于盛有洛氏液20 mL的浴槽，另一端连接张力换能器，浴槽中营养液保持（37±0.5）℃，并通以（95% O2+5% CO2）的混合气体，速度1～2个小气泡/s，前负荷1 g。用BL-420E生物机能系统记录子宫收缩曲线。

2.2 给药方法

待曲线稳定30 min，采用累积加药方式给药，加入提取物W1、Et、Bu药液，采用累加给药方式（剂量均为5、5、10 μL，相当于生药量0.0015、0.003、0.006 g﹒mL-1），每次加药后记录10 min离体子宫收缩活动，三次加完后用洛氏液冲洗3次，再加入等量的洛氏液，待曲线稳定后，用同样的加药方式加入下一组药物；加入1 U﹒mL-1缩宫素160 μL，记录曲线10 min后再加入高剂量的药液记录10 min，观察离体子宫肌收缩活动的变化。

2.3 统计学方法

用SPSS 17.0统计软件进行配对t检验统计分析给药前后的变化，以（）表示，P ＜ 0.05 为显著性差异，P＜0.01为极显著性差异。

3 实验结果

3.1 对正常大鼠离体子宫活动的影响

与给药前相比，W1高剂量使子宫活动力、收缩频率、收缩张力均值和最小值均明显增加（P＜0.05或P＜0.01），中剂量组使子宫收缩张力均值和最小值均明显增大（P＜0.05或P＜0.01）；Et中、高剂量使子宫收缩张力最小值增大（P＜0.05或P＜0.01）；Bu低、中、高剂量均可使子宫活动力、收缩张力平均值和最小值均明显增加（P＜0.01），其中高剂量组收缩张力最大值下降（P＜0.05）。由此可见，在三个提取部位中以W1、Bu具有兴奋正常子宫平滑肌活动的作用，Et作用不显著。结果见表1～表5，图1。

表1 益母草药材不同部位对正常大鼠离体子宫收缩活力的影响（）

表1 益母草药材不同部位对正常大鼠离体子宫收缩活力的影响（）

注：与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 N 给药前 低剂量 中剂量 高剂量空白对照 10 1682.90±358.30 1653.70±271.38 1702.50±284.26 1710.10±233.53 W1 9 1264.33±389.97 1281.78±351.32 1331.11±339.09 1373.44±362.78** Et 8 1697.00±376.97 1696.13±361.25 1717.75±352.87 1744.50±346.35 Bu 10 1604.70±318.69 1794.40±375.73** 1819.60±316.31** 1910.80±359.38**

表2 益母草药材不同部位对正常大鼠离体子宫收缩频率的影响（x ±s）

表3 益母草药材不同部位对正常大鼠离体子宫收缩平均值的影响（）

表3 益母草药材不同部位对正常大鼠离体子宫收缩平均值的影响（）

注：与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 N 给药前 低剂量 中剂量 高剂量空白对照 10 2.80±0.59 2.75±0.45 2.83±0.47 2.85±0.39 W1 9 2.10±0.65 2.13±0.58 2.21±0.57* 2.28±0.60** Et 8 2.92±0.73 2.82±0.61 2.85±0.59 2.78±0.75 Bu 10 2.67±0.53 2.98±0.62** 3.01±0.54** 3.18±0.59**

表5 益母草药材不同部位对正常大鼠离体子宫收缩最小值的影响（）

注：与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 N 给药前 低剂量 中剂量 高剂量空白对照 10 1.66±0.37 1.67±0.34 1.68±0.36 1.69±0.37 W1 9 1.48±0.45 1.54±0.44* 1.62±0.47** 1.69±0.51** Et 8 1.73±0.56 1.78±0.55 1.77±0.56* 1.81±0.58** Bu 10 1.80±0.46 1.89±0.45** 1.98±0.44** 2.14±0.51**

图1 益母草不同提物对大鼠子宫收缩的影响

3.2 对缩宫素致子宫痉挛的影响

与造模前比较，给予缩宫素后大鼠离体子宫平滑肌条强烈收缩，活动力明显增加，收缩张力均值和最小值明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。给予益母草药材不同提取物后，3个提取物均使子宫活动力和收缩张力的均值、最大值降低，表现为抑制缩宫素对子宫的兴奋作用。结果详见表6～表10、图2。

表6 益母草药材不同部位对缩宫素致痉挛正常大鼠离体子宫收缩活力的影响（）

表6 益母草药材不同部位对缩宫素致痉挛正常大鼠离体子宫收缩活力的影响（）

注：与造模前比较， **P＜0.01；与造模后比较，▲▲P＜0.01

剂量组别 N 造模前 造模后 给药后（g﹒mL-1）空白对照 8 — 1668.75±320.07 2714.88±411.84** 2661.38±421.18 W1 8 0.006 1671.25±532.25 2380.25±378.61** 2101.25±452.86▲▲Et 8 0.006 1925.25±247.24 2574.50±346.96** 2279.38±330.48▲▲Bu 8 0.006 1721.75±319.69 2360.25±533.98** 2122.00±418.33▲▲

表7 益母草药材不同部位对缩宫素致痉挛正常大鼠离体子宫收缩频率的影响（）

表7 益母草药材不同部位对缩宫素致痉挛正常大鼠离体子宫收缩频率的影响（）

剂量组别 N 造模前 造模后 给药后（g﹒mL-1）空白对照 8 — 8.00±2.51 8.13±4.09 9.13±3.76 W1 8 0.006 6.38±1.60 5.75±3.06 7.00±3.25 Et 8 0.006 5.88±1.13 4.88±3.87 4.88±3.27 Bu 8 0.006 5.88±1.73 4.63±3.11 4.50±3.46

表8 益母草药材不同部位对缩宫素致痉挛正常大鼠离体子宫收缩张力均值的影响（）

表8 益母草药材不同部位对缩宫素致痉挛正常大鼠离体子宫收缩张力均值的影响（）

注：与造模前比较，**P＜0.01；与造模后比较，▲▲P＜0.01

N 剂量造   （次）（g﹒mL-1）空白对照 8 — 2.78±0.53 4.52±0.69** 4.43±0.70 W1 8 0.006 2.77±0.88 3.96±0.63** 3.50±0.76▲▲Et 8 0.006 3.20±0.42 4.28±0.58** 3.79±0.55▲▲Bu 8 0.006 2.86±0.53 3.93±0.89** 3.53±0.70▲▲组别 模前 造模后 给药后

表9 益母草药材不同部位对缩宫素致痉挛正常大鼠离体子宫收缩张力最大值的影响（）

表9 益母草药材不同部位对缩宫素致痉挛正常大鼠离体子宫收缩张力最大值的影响（）

注：与造模后比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

N 剂量造   （次）（g﹒mL-1）空白对照 8 — 5.66±0.97 5.94±0.52 5.80±0.59 W1 8 0.006 5.52±1.23 5.51±0.99 5.06±1.34▲Et 8 0.006 5.48±0.52 5.54±0.73 4.97±0.67▲▲Bu 8 0.006 5.21±1.15 5.30±1.12 4.76±0.92▲组别 模前 造模后 给药后

表10 益母草药材不同部位对缩宫素致痉挛正常大鼠离体子宫收缩张力最小值的影响（）

表10 益母草药材不同部位对缩宫素致痉挛正常大鼠离体子宫收缩张力最小值的影响（）

注：与造模前比较，*P＜0.05，**P＜0.01

N 剂量造   （次）（g﹒mL-1）空白对照 8 — 1.69±0.33 2.00±0.35* 2.38±0.74 W1 8 0.006 1.71±0.58 2.57±0.67* 2.33±0.61 Et 8 0.006 1.93±0.23 2.38±0.53** 2.75±0.59 Bu 8 0.006 1.79±0.42 2.26±0.72* 2.50±0.69组别 模前 造模后 给药后

图2 益母草不同提取物对缩宫素所致痉挛子宫收缩的影响

4 讨论

现代研究表明，益母草药理作用相当广泛，其对子宫有双向调节作用，即当子宫在正常状态下用药引起子宫兴奋收缩，而当子宫在痉挛状态时用药则引起松弛[4～6]。

本试验结果显示，益母草的3种不同提取物中W1、Bu均具有一定兴奋大鼠离体子宫平滑肌的作用，其中以W1、Bu较为明显，均使子宫活动力、收缩张力均值和最小值明显增加，并呈一定的量效关系。缩宫素又名催产素，是垂体后叶素的主要成分，其主要作用为促进子宫平滑肌收缩[7]。本实验结果表明缩宫素对大鼠离体子宫平滑肌有兴奋作用，主要体现在增加子宫活动力、收缩张力均值和最小值。此兴奋作用可以被3种提取物对抗，均使子宫活动力和收缩张力的均值、最大值降低。以上实验结果与相关报道[2,8～9]一致。据本试验结果可知，益母草对子宫的调节作用与子宫状态有关，对正常子宫主要表现为兴奋作用，其中以正丁醇部位最明显；对缩宫素所致痉挛离体子宫主要表现为舒张作用，以乙酸乙酯部位作用较为明显。结果提示益母草水部位和正丁醇部位为其缩宫的主要活性物质，而乙酸乙酯部位可作为研发治疗痛经药物的潜在活性部位。

[1] 张廷模.全国普通高等教育中医药类精编教材•临床中药学[M].上海:上海科学技术出版社,2006:246.

[2] 张恩户,刘耀武,孙涛,等.三种益母草提取物对大鼠离体子宫活动性的影响[J].陕西中医学院学报,2003,26 (3):46.

[3] 徐叔云,陈修,卞如濂.药理实验方法学•第三版[M].北京:人民卫生出版社,2002:1582.

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（责任编辑：陈思敏）

Effects of different extracts from Leonurus japonicus Houtt. on isolated smooth muscle of uterus

LI Dan, XIE Xiaofang, PENG Cheng, XIONG Liang, ZHAO Xiao-mei//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China)

Objective:To investigate the effects of extracts from Leonurus japonicus Houtt. on uterine smooth muscle in rats and to fnd the active extract.Method:There were three different extracts from Leonurus japonicus Houtt. including the water part(W1), ethyl acetate part(Et) and n-butano part( Bu). The effects of different extracts decoction on the spontaneous activity of uterine smooth muscle was observed with BL-420E biological signaling system and the activities of isolated uterus smooth muscle were recorded. The indexes included the amplitude, frequency and mobility in rat’s uterine smooth muscle movement track.Result:W1 and Bu had effect on rat uterus, and the activity, average and minimum values of uterus were signifcantly increased (P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01). And all three kinds of extract could inhibit oxytocin effect on the contraction of the uterus, which could signifcantly decrease uterine activity, average and maximum (P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01).Conclusion:Leonurus japonicus Houtt. has a two-way adjustment function of uterine activity. It stimulates the normal uterus of rats and inhibits the convulsive uterus. The water extraction part and n-butanol part may have the main active components.

Leonurus japonicus Houtt.；isolated uterus；active extract；dual-directional regulation

R 285.5

A

1674-926X(2014)03-008-04

国家“十一五”重点科技支撑计划项目（项目编号：2009BAI84B00）

成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

李丹，在读硕士研究生，主要从事中药复方药理毒理研究Tel:13558661832 Email:fdqlidan@163.com

彭成，教授，博导，主要从事中药复方药理与疾病动物模型研究Tel:028-61800018 Email:pengchengchengdu@126.com

2013-09-04