蒙药肝乐康胶囊的质量标准研究

2014-03-09包明兰巴根那白梅荣萨日古乐黑龙江中医药大学基础医学院哈尔滨150040内蒙古民族大学蒙医药学院内蒙古通辽08000

中国药房 2014年43期

包明兰，巴根那，白梅荣，萨日古乐（1.黑龙江中医药大学基础医学院，哈尔滨 150040；.内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古通辽 08000）

蒙药肝乐康胶囊是在传统验方地格达-4味汤基础上研制的复方制剂，由肋柱花、苦参、栀子、瞿麦等4味药组成，具有清“协日”、凉血、清糟归精、除“粘热”等功效，主要用于血热相搏、肝胆热、咽喉肿痛、口渴等证[1]。为有效控制其制剂质量，笔者采用薄层色谱（TLC）法对方中的肋柱花、苦参、栀子进行了定性鉴别；并采用高效液相色谱（HPLC）法对苦参的主要成分苦参碱与氧化苦参碱进行了含量测定。

1 材料

1.1 仪器

1260型HPLC仪，包括Openlab色谱工作站、G1315D检测器（美国Agilent公司）；ISO9001型电子天平（上海蓝习实业有限公司）；ZF-I型紫外灯（上海双旭电子有限公司）；HHS21-4型电子恒温水浴锅（上海跃进医疗器械）；KQ-200VDE型双频数控超声波清洗器（昆山市超生仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

肝乐康胶囊（乌兰浩特中蒙制药有限公司，批号：20120604、20120605、20120606）；獐牙菜苦苷对照品（批号：0785-200203）、栀子苷对照品（批号：110749-200613）、苦参碱对照品（批号：0805-9703）、氧化苦参碱对照品（批号：0780-200004）均由中国食品药品检定研究院提供；硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 肋柱花的TLC鉴别[2]取本品内容物1.0 g，加25 ml甲醇，超声（功率：50 W，频率：45 kHz）处理50 min，滤过，滤液浓缩成1 ml，作为供试品溶液；另取缺肋柱花的阴性样品0.75 g，同法制成阴性对照溶液；精密称取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇制成质量浓度为1.0 mg/ml的对照品溶液。照TLC法（2010年版《中国药典》）[3]试验，吸取上述3种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（17 ∶3，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于110 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点；阴性对照无干扰。肋柱花的TLC图见图1。

2.1.2 苦参的TLC鉴别[3-4]取本品内容物1.0 g，加10 ml三氯甲烷和0.2 ml浓氨试液，室温浸泡12 h，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取缺苦参的阴性样品0.75 g，同法制成阴性对照溶液；精密称取苦参碱对照品适量，加三氯甲烷制成质量浓度为0.2 mg/ml的对照品溶液。照TLC法（2010年版《中国药典》）[3]试验，吸取上述3种溶液各6µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲醇（8 ∶3 ∶0.5，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀氢氧化钾试液，于110 ℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。苦参的TLC图见图2。

图1 肋柱花的TLC图1.獐牙菜苦苷对照品；2～4.供试品；5.阴性对照Fig 1 TLC oflomatogonium.rotatum1.swertiamain control；2-4.test samples；5.negative control

图2 苦参的TLC图1.苦参碱对照品；2～4.供试品；5.阴性对照Fig 2 TLC ofSophora.flavescens1.matrine control；2-4.test samples；5.negative control

2.1.3 栀子的TLC鉴别[5-7]取本品内容物1.0 g，加50%甲醇10 ml，超声（功率：50 W，频率：45 kHz）处理40 min，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取缺栀子的阴性样品0.75 g，同法制成阴性对照溶液；精密称取栀子苷对照品适量，加50%甲醇制成质量浓度为1.5 mg/ml的对照品溶液。照TLC法（2010年版《中国药典》）[3]试验，吸取上述3种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（9∶3，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于110℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。栀子的TLC图见图3。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件色谱柱：lnertsil NH2Columns C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-3%磷酸水-无水乙醇（80 ∶10 ∶10，V/V/V）；流速：0.1 ml/min；柱温：30 ℃；检测波长：220 nm。

2.2.2 对照品溶液的制备[3]分别精密称取苦参碱对照品2.0 mg、氧化苦参碱对照品3.75 mg，加乙腈-无水乙醇（80 ∶20，V/V）制成苦参碱氧化苦参碱质量浓度分别为0.10、0.15 mg/ml的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备[8-13]称取肝乐康胶囊内容物约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加0.5 ml浓氨试液和20 ml三氯甲烷，密塞，称定质量，超声（功率：50 W，频率：45 kHz）处理30 min，放冷，再次精密称定，用三氯甲烷补足减失的质量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5 ml，加于中性氧化铝柱（内径1 cm）上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇溶液（70 ∶30，V/V）各20 ml洗脱，合并洗脱液，回收溶剂，残渣加无水乙醇定容至10 ml，摇匀，即得。

图3 栀子的TLC图1.栀子苷对照品；2～4.供试品；5.阴性对照Fig 3 TLC ofGardenia.jasminoides1.jasminoidin control；2-4.test samples；5.negative control

2.2.4 阴性对照溶液的制备精密称取缺苦参的阴性对照品0.75 g，按“2.2.3”项下方法制备阴性对照溶液，即得。

2.2.5 空白干扰试验精密量取上述对照品、阴性对照和供试品溶液各10 μl，按上述色谱条件分别进样测定，绘制HPLC图。结果表明，阴性对照对苦参碱和氧化苦参碱的测定无干扰。色谱见图4。

图4 高效液相色谱图A.供试品；B.对照品；C.阴性对照；1.苦参碱；2.氧化苦参碱Fig 4 HPLC chromatogramsA.test sample；B.substance control；C.negative control；1.matrine；2.oxymatrine

2.2.6 线性关系考察精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12 μl，按上述色谱条件进样测定，记录色谱图。以进样量（x，μg）为横坐标，峰面积积分值（y）为纵坐标，进行线性回归，得苦参碱的回归方程为y＝30 975x－1 543.1（r＝0.999 8）、氧化苦参碱的回归方程为y＝55 915x－4 977.1（r＝0.999 6）。结果表明，苦参碱和氧化苦参碱的进样量分别在0.2～1.2和0.3～1.8 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.2.7 精密度试验精密吸取对照品溶液10 μl，按上述色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果，苦参碱和氧化苦参碱的峰面积RSD分别为1.72%、0.35%（n均为6），表明仪器精密度良好。

2.2.8 稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24、36、48 h按上述色谱条件进样测定，记录色谱图。结果，苦参碱和氧化苦参碱的峰面积RSD分别为0.32%、0.26%（n＝7），表明供试品溶液在48 h内稳定。

2.2.9 重复性试验取同一批样品适量，按“2.2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，苦参碱和氧化苦参碱峰面积的RSD分别为0.59%、1.14%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.2.10 加样回收率试验精密称取已知含量的同一批样品6份，分别精密加入适量的苦参碱和氧化苦参碱对照品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按上述色谱条件进样测定，记录色谱图并计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

2.2.11 样品含量测定取3批样品各适量，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按上述色谱条件连续进样3次，记录峰面积，并以外标法计算样品含量。结果，3批样品（20120604、20120605、20120606）中苦参碱的平均含量分别为13.79、13.78、13.76 mg/g，氧化苦参碱的平均含量分别为6.57、6.56、6.59 mg/g。

3 讨论

研究表明，肝乐康胶囊具有抗乙型肝炎病毒的作用[14]，其中苦参为其重要药效成分[15]，苦参提取物苦参碱和氧化苦参碱具有明显的抗乙型肝炎的作用，有效率可达55%[16]。为此，本试验除采用TLC法对方中的肋柱花、苦参和栀子进行定性鉴别外，还运用HPLC法对苦参的有效成分苦参碱和氧化苦参碱进行了含量测定，试验结果较理想，可为制订含苦参制剂的质量控制标准提供参考。

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