正交试验优选槐角中山奈酚的提取工艺

2014-03-09王卫峰陕西中医学院药学院陕西咸阳71046陕西省食品药品检验所西安710065陕西省中医药研究院西安71000

中国药房 2014年43期

马敏，王莉，李芳，王卫峰#（1.陕西中医学院药学院，陕西咸阳 71046；.陕西省食品药品检验所，西安 710065；.陕西省中医药研究院，西安 71000）

槐角为豆科植物槐Sophora japonicaL.的干燥成熟果实，性寒、味苦，归肝、大肠经，有清热泻火、凉血止血之功效[1]。槐角中含有多种以苷类形式存在的黄酮类化合物，其基本的苷元有4种，即槲皮素、染料木素、山奈酚和异鼠李素[2]，本研究将山奈酚含量作为评价指标。山奈酚又称山奈素、4′，5，7-三羟基黄酮醇等，主要是3位或3，7位成苷而在山奈、槐角、银杏叶、金钱草中普遍存在的黄酮醇类化合物，在槐角中含量最高，其药理作用主要有抗氧化、抗炎、抗辐射和预防心血管疾病等药理活性[3]。

笔者拟找到一条工艺合理、操作简单和成本低兼的水浸提法从槐角中将山奈酚提取出来，为工业化提取提供更多的选择。本研究参考有关文献[4-8]，采取正交试验法，研究了各个影响因素，确定了槐角中山奈酚提取工艺的最佳条件。

1 材料

1.1 仪器

Acquity UPLC H-Class型超高效液相色谱仪，包括四元高压梯度泵、自动进样器、PDA检测器、柱温箱、EmpowerTM3色谱工作站（美国Waters公司）；BP211D型电子分析天平（德国赛多利斯天平有限公司）；98-1-B型电子调温电热套（天津市泰斯特仪器有限公司）；Synergy UV型超纯水器（美国Millipore公司）。

1.2 药材

槐角购于陕西省药材公司，经陕西省中医药研究院王卫峰研究员鉴定为真品。

1.3 试剂

山奈酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110861-200304）；乙腈（色谱纯，美国Tedia公司）；其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 水提取工艺

称取干燥槐角50 g，按正交试验设计方案，依次加热回流水煎煮，滤过，合并滤液，加热浓缩至200 ml，得提取液，贮藏，备用。

2.2 山奈酚含量测定

2.2.1 色谱条件色谱柱：BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液（23 ∶77，V/V）；检测波长：370 nm；柱温：30 ℃；流速：0.3 ml/min；进样量：1.0 μl。在此条件下山奈酚与其他组分可达到基线分离，理论板数按山奈酚计应不低于4 000。

2.2.2 对照品溶液的制备精密称取山奈酚对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.441 1 mg的对照品溶液，摇匀，即得对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备精密移取“2.1”项下提取液10 ml，置于100 ml具塞锥形瓶中，加入10 ml甲醇和1 ml 25%盐酸，于90 ℃水浴中受热水解1 h，取出迅速冷却，转移至25 ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀，滤过，滤液再用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.2.4 标准曲线的制备精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 μl，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以进样量（x，μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标（y），进行线性回归，得回归方程为y＝14 000 000x+6 012.2（r＝0.999 8）。结果表明，山奈酚进样量在0.088 22～0.882 2 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.3 单因素试验优选盐酸加入量

由于山奈酚主要与糖结合成苷而存在，所以需要用酸去水解而得到需要测定的山奈酚苷。笔者参考文献[9-15]，在90 ℃下，分别加入0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml 25%盐酸，测定山奈酚含量，选择最优加入量。结果表明，加入1.0 ml 25%盐酸水解后测定的山奈酚含量最高。25%盐酸加入量对山奈酚含量的影响见表1。