饲料粗蛋白测定应注意的四个关键环节

范桂芝

云南省昭通市畜牧兽医技术推广站，云南昭通 657000

蛋白质是动物新陈代谢、生长繁殖等生理活动必不可少的一种营养物质，是动物重要的营养源之一，对于体组织、器官和细胞的形成、修补、增生，胎儿的形成，以及酶类和激素功能的实现都是不可缺少的；其作用是其他营养物质不可替代的；其成本占饲料成本的45%左右。粗蛋白是饲料营养成分中的一个主要营养指标，也是评价饲料营养价值的重要指标之一，是饲料中含氮物质的总称，包括纯蛋白质和氨化物（非蛋白质含氮物质，如氨基酸、尿素等）。因此，饲料粗蛋白测定在饲料检测中占据了非常重要的位置。目前生产中常用的检测饲料粗蛋白的方法有国标法、凯氏定氮法、强碱直接蒸馏法、双氧水法、双缩脲法等。其中，在使用国标法测定饲料粗蛋白时，由于操作方法和实验仪器的原因，样本经消化、蒸馏、滴定诸道工序，易产生误差。本文以GB/T6432-1994为准，总结在多年的饲料粗蛋白检测操作实践中积累的经验，参阅相关资料，提出了饲料粗蛋白测定应注意的四个关键环节，供大家参考。

1 样品称取

饲料粗蛋白测定的称样与其他项目测定称样有所不同，其他项目测定可直接称样，而粗蛋白测定的称样由于凯氏定氮管（即消化管）较长，只能采取减量称样法。

即首先要在天平托盘上放一称样皿，再将需要取的样品放入称样皿中，然后将天平除零后采用减量法取样。

1.1 取样过程注重细节

为保证称样准确，在取样过程中要注意细节。例如，取出样品时应该让样品紧贴样品勺，避免取出的样品洒落。每称完一个样品后，都应该用定量滤纸擦拭干净取样勺，以免影响下一个样品取样。

取样时应使用干燥的消化管，潮湿的消化管容易弄潮取样勺，既可能带出刚放入的样品，又可能影响下一次样品取样，导致取样不准确。另外，取样时最好使用比较轻巧的长把取样勺将样品直接送到消化管底部。最后，取出的样品放入消化管时，尽可能不沾管壁，以免造成样品消化不完全。

1.2 试样用量要准确

试样的用量可根据具体情况而定，标准中规定为0.5～1.0 g。该用量是针对浓缩料、配合饲料、鱼粉、豆粕等蛋白含量较高的样品而定的，但对于蛋白含量比较低的样品，如稻谷、玉米等可适当增加到2～3 g，否则，滴定时盐酸的消耗量只有1～2 mL，会增加读数和测定的误差。

2 样液消化

2.1 催化剂的选择

样品消化前需加入硫酸铜-硫酸钾（或硫酸钠）混合催化剂，其目的是提高消化温度。除硫酸铜外，常用的催化剂还有汞、氧化汞、硒粉、还原铁或上述物质的混合物。催化剂的选择要根据样品的特性而定，对于一般的配合饲料样品、浓缩饲料样品等的消化，用硫酸铜作催化剂（在蒸馏氨时可作为碱性反应的指示剂），使用强热源即可；对于难消化物质的样品，硫酸铜催化效果不如汞，测得粗蛋白质含量偏低；对于富含脂肪或消化过程中易发泡的样品，可在消化前添加少量氧化剂，如过氧化氢。添加氧化剂可帮助有机质消化，一般不用高锰酸钾和次氯酸作氧化剂，因为氧化性较强的氧化剂会使氨氧化为氮气而损失。

2.2 催化剂的用量

混合催化剂的用量稍多一点不影响检测结果，但若过多（即硫酸钾的用量过大），会导致消化温度太高。这样，在消化过程中，随着硫酸的分解和水分的蒸发，硫酸钾的浓度将逐渐增大，会加速有机物的分解，生成的硫酸铵会分解出氨而使测定结果偏低。另外，消化液加水后，样液容易凝结成固体，蒸馏时需较长时间溶解，稍不注意，蒸馏不彻底会导致检测结果偏低。

2.3 硫酸的用量

硫酸的用量，要根据样品的取样量来确定，如果取2～3 g样，则需25 mL硫酸。对于含盐量高的样品，如某些劣质鱼粉、肉骨粉之类，需相应增加硫酸用量，因为NaCl+H2SO4→HCl↑，加热后HCl会挥发。

样品与催化剂混匀后再加入纯硫酸，加硫酸的同时应不断摇晃消化管底部，尽量使样品、催化剂和硫酸充分混溶，以免消化时烧焦未溶样品而影响检测结果。

2.4 消化火力的控制

样液消化时按国标GB/T6432-1994仲裁法要求是开始使用小火，待泡沫消失、样液焦化后再升温至380～410℃。但笔者通过反复试验发现，小火同样会使样液膨胀沾于消化管壁，因为温度低，形成的蒸汽回流不足以使沾于管壁的样液回流到管底，即使手工振摇消化管也很难将管壁上的样液全部回流到管底，而且这种逐步升温的方法需要时间较长，待样液变蓝绿色需要2～3 h。而使用国标GB/T6432-1994推荐法，一次性设置温度至420℃，只需半小时左右即可使样液变蓝绿色，而且样液回流较彻底，偶有个别发生沾壁，手工回流大多能办到。但如果样品用量大，硫酸用量相应增加，样液就多，消化时则需要适当控制温度。通过反复的试验比对发现，一次性设置温度至400℃左右的方法对检测结果并无影响。

在此需特别提醒，无论采用何种方法消化样液，手工回流时必须注意安全，不能剧烈摇晃，更不能用水冲洗管壁（切忌）；摇晃时要将管口朝向无人处，以免烫伤自己或他人。如出现固体物无法回流的，该样品必须重做，否则将会因消化不彻底而不同程度影响检测结果。

3 消化液的蒸馏

蒸馏是将硫酸消化过的样液加入足够的强碱，在加热的情况下生成氨气，同时用足够的硼酸将氨气吸收的过程。蒸馏过程的操作较复杂，特别对于初学者来说应特别注意以下几点。

3.1 空蒸及蒸馏检验

在空蒸前必需先打开冷凝水。空蒸是用空消化管先蒸馏10 min，目的是清洗管路和检查蒸馏器各管路是否密闭及蒸馏功能是否正常，特别要注意蒸馏管接口是否紧密，否则产生的氨气逸出将直接影响检测结果。必要时需进行蒸馏步骤的检验，即准确称取0.2 g硫酸铵代替试样，按蒸馏样液时的步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量应为21.19%±0.20%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

3.2 蒸馏样液

检查空蒸正常后，打开排废液阀才能插接盛有样液的蒸馏管，否则会发生回吸现象，管内气压会将大量样液压入废液管内，导致该样品检测彻底失败。开始蒸馏的同时必须关闭排废液阀，否则氨气会从废液管逸出，直接影响检测结果。

3.3 调整电流

蒸馏时电流应稳定在4～5 A，如距此范围不大，通过锅炉加水阀调整即可。

如电流过高，会使样液上冲喷入其他管道，造成样液损失而影响检测结果。可在蒸馏的同时打开锅炉排水阀，待电流降至4～5 A后，关闭锅炉排水阀，再通过锅炉加水阀调整电流至4～5 A。

如电流过低，会导致蒸馏不彻底而影响检测结果。可在蒸馏的同时关闭锅炉电源开关，观察锅炉进水后再打开锅炉开关，然后通过锅炉加水阀调整电流至4～5 A。

4 滴 定

滴定是饲料粗蛋白测定操作的最后一步，影响滴定结果的因素主要有以下几个方面。

4.1 标准滴定液的标定

标准滴定液标定的准确性直接影响检测结果，因此滴定液标定必须严格按照国标要求进行。在基准称量准确的基础上，滴定时为减少滴定误差，8个平行样加热前颜色应一致，加热后盐酸消耗最好不超过一滴。

4.2 准确读数

滴定读数的准确度也直接影响检测结果的准确度。滴定时读数不准、误读、滴定液洒漏或滴定管中有气泡都将不同程度地影响检测结果。因此滴定前要排出滴定管中所有气泡，并把握好活塞松紧度，防止滴定液洒漏。

5 小 结

实验室工作是一项科学严谨、耐心细致的工作，一个样品，要得到准确的检测结果，从样品采集、粉碎磨样到最后结果计算都需要处处小心、时时注意。实验室任何项目及指标的测定都有其关键环节，饲料粗蛋白检测也是如此，关键是需要操作者在检测操作实践中一丝不苟、用心体会、认真把握、力求精益求精。只有通过不断的归纳总结，才能逐步提高自身的检测操作技能和工作效率。