HPLC法测定氟他胺片含量的不确定度分析

李 静，朱静毅，闻琍毓

（扬州市药品检验所，江苏扬州225009）

HPLC法测定氟他胺片含量的不确定度分析

李 静，朱静毅，闻琍毓

（扬州市药品检验所，江苏扬州225009）

目的建立高效液相色谱法测定氟他胺片含量的不确定度分析方法。方法通过建立高效液相色谱法含量测定法的数学模型，找出影响不确定度的因素并对各个不确定度分量进行评估。结果计算各变量的不确定度，由此计算合成不确定度，最终给出测定结果的扩展不确定度。结论建立的方法可用于高效液相色谱法测定药物含量的不确定度分析。

不确定度；高效液相色谱法；含量测定；氟他胺

测量不确定度是“表征合理地赋予被测量值的分散性，与测量结果相关联的参数”，它是被测量客观值在某一量值范围内的一个评定，是对测量结果质量和水平的定量表征。不确定度越小，测量结果的质量越高，使用价值越大。

本文根据《测量不确定度评定与表示》中有关规定［1］，并参考《化学分析中不确定度的评估指南》［2］，采用HPLC法测定氟他胺片的含量，以期找出影响不确定度的因素，对不确定度进行评估，为评价检测报告提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 日本岛津LC－20AD高效液相色谱仪，SPD－10A紫外检测器，LC Solution化学工作站；瑞士Mettler公司AG135型电子分析天平。

1.2 试药 氟他胺对照品（中国药品生物制品检定研究院，批号：100598－200601，含量测定用，使用前不需干燥处理）；氟他胺片（上海复旦复华药业有限公司，批号：130303，规格：0.25 g）；甲醇为色谱纯，水为纯化水。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Extend－C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇－水（60∶40）；检测波长：230 nm；柱温：30℃；流速：1.00 mL·min－1；进样量：20μL。理论板数按氟他胺峰计不低于2 000。

2.2 对照品溶液的制备 取氟他胺对照品约10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相适量，振摇使氟他胺溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氟他胺0.1 g），置100 mL量瓶中，加流动相适量，振摇使氟他胺溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 含量测定结果 氟他胺片含量为标示量的98.3%。

3 不确定度的评估

3.1 建立数学模型含量计算公式为：

式中：Q：氟他胺片标示百分含量（%）；Ay：供试品溶液的峰面积；Ad：对照品溶液的峰面积；Wd：对照品称样量（mg）；Wy：供试品称样量（g）；P：对照品的纯度；Vd：对照品的稀释体积（mL）；Vy1：供试品的初次稀释体积（mL）；Vy2：供试品稀释时移液管取样体积（mL）；Vy3：供试品的末次稀释体积（mL）；¯W：供试品的平均片重（g）；0.25：供试品的规格（g）；1 000：由g转化为mg的换算系数。

3.2 不确定度分量来源的分析（因果图）

3.3 计算各分量的不确定度

3.3.1 对照品纯度引起的相对不确定度urel（P）氟他胺对照品由中国药品生物制品检定研究院提供，使用前不需干燥处理，纯度为100%，由于目前尚未给出不确定度，暂假定其分散区间的半宽度α＝0.25%，按矩形分布计算，取包含因子，则

3.3.2 对照品质量引起的相对不确定度urel（Wd）

主要有两个来源：第一，天平校准的不确定度。依据说明书，校准的线性为±0.03 mg，按矩形分布计算，取包含因子对照品取样量为9.59 mg，则相对不确定度第二，天平称量重复性的不确定度。天平说明书中标明u（m）＝0.02 mg，则10－3。故对照品质量引起的相对不确定度urel（Wd）

3.3.3 对照品稀释引起的相对不确定度urel（Vd）对照品溶液由对照品稀释而成，玻璃仪器引入的不确定度应计算在内。第一，容量瓶体积校准的不确定度。根据国家计量检定规程规定［3］，A级100 mL容量瓶的容量允差为±0.10 mL，按矩形分布计算，取包含因子10－4。第二，试验温度与校准温度的差异。由于本试验温度为20℃，与校准温度相同，所以此项可忽略。综上对照品稀释引起的相对不确定度urel（Vd）＝5.77×10－4。

3.3.4 对照品溶液色谱峰面积的相对不确定度urel（Ad） 色谱峰面积的不确定度主要由峰面积重复性和仪器环境、进样体积等因素的不确定度共同引起。由于对照品与供试品采用相同的进样条件，仪器环境、进样体积等因素引起的不确定度可相互抵消，所以此项可忽略不计。故对照品溶液峰面积的不确定度主要由峰面积重复性引起。

本次试验中，对照品溶液5次进样重复测量的峰面积为：2 382 732、2 389 022、2 384 930、2 381 065、2 382 417＝2 384 033，根据贝赛尔公式计算：s＝，则对照品溶液色谱峰面积的相对不确定度

3.3.5 平均片重引起的相对不确定度urel） 取供试品10片，精密称定，求得总重为6.686 6 g，平均片重¯W＝0.668 7 g／片，不确定度分析同“3.3.2”项下。由天平校准引起的不确定度：urel（）1＝，由天平称量重复性引起的不确定度2.99×10－6。故平均片重引起的相对不确定度urel

3.3.6 供试品称量引起的相对不确定度urel（Wy）

3.3.7 供试品稀释引起的相对不确定度urel（Vy）不确定度分析同“3.3.3”项下。因试验温度与玻璃仪器的校准温度相同，温度引起的不确定度可忽略不计。根据国家计量检定规程规定［3］，A级100 mL容量瓶的容量允差为±0.10 mL，A级50 mL容量瓶的容量允差为±0.05 mL，A级5 mL移液管的容量允差为±0.015 mL，按矩形分布计算，取包含因子k则供试品稀释引起的相对不确定度。

3.3.8 供试品溶液色谱峰面积的相对不确定度urel（Ay） 供试品溶液的色谱峰面积采用双样两平行进行测定，测定的结果用极差法计算，记录双样测量峰面积为：2 486 485、2 485 957，2 457 573、

取n＝2时的极差系数C＝1.13，则供试品溶液色谱峰面积的相对不确定度。

3.4 计算合成相对标准不确定度ucrel（Q）

3.5 给出扩展不确定度U（Q） 实验结果一般用扩展不确定度表示，取包含因子k＝2（置信概率约95%），则含量测定扩展不确定度U（Q）＝2× 0.43%＝0.9%。含量测定结果可表示为Q±U（Q）：98.3%±0.9%，k＝2（95%的置信区间），即氟他胺片的含量测定结果出现在98.3%±0.9%区间的概率为95%。

4 讨论

不确定度的测量是评定测量结果可信度的依据，对于评价分析方法、评定实验室及分析测试人员的技术水平和准确判定药品质量都具有重要意义。

在评定不确定度时，应尽量考虑到产生不确定度的所有来源，因为合成不确定度的数值几乎完全取决于重要的不确定度分量。由上述评估过程可知，天平的称量和玻璃仪器的校准是分析结果产生不确定度的主要原因。

本文建立的测量不确定度评定方法，可以为其他药品高效液相含量测定结果不确定度的评定提供参考。

［1］国家质量监督检验检疫总局.测量不确定度评定与表示（JJF1059.1－2012）［S］.北京：中国计量出版社，2012.

［2］中国合格评定国家认可委员会.化学分析中不确定度的评估指南［S］.北京：中国计量出版社，2006.

［3］国家质量监督检验检疫总局.常用玻璃量器检定规程（JJG196－2006）［S］.北京：中国计量出版社，2006.

Uncertainty analysis on determ ination of Flutam ide Tablets by HPLC

LIJing，ZHU Jing-yi，WEN Li-yu
（Yangzhou Institute for Drug Control，Yangzhou 225009，China）

Ob jectiveTo establish amethod for uncertainty analysis on determination of Flutamide Tablets by HPLC.MethodsA mathematic model was established by HPLC to identify the influence factors impacting uncertainty and each component of uncertainty was also evaluated.ResultsEach component of uncertainty was calculated by analyzing the various variable parameters in the procedure，the combined uncertainty and expanded uncertainty were finally obtained.ConclusionThismethod can be used for the uncertainty analysis of determination ofmedicines by HPLC.

Uncertainty；HPLC；Determination；Flutamide

R927.1

A

2095－5375（2014）05－0269－003

李静，女，研究方向：药品检验，E－mail：lijing320323＠163.com