HPLC法测定醋酸曲安奈德搽剂的含量及有关物质

张 磊

（临沂市食品药品检验检测中心，山东临沂276000）

HPLC法测定醋酸曲安奈德搽剂的含量及有关物质

张 磊

（临沂市食品药品检验检测中心，山东临沂276000）

目的建立高效液相色谱法测定醋酸曲安奈德搽剂含量及有关物质的方法。方法使用Capcell Pak C18（4.6mm×150mm，5μm），流动相为甲醇－水（70∶30），检测波长为240 nm，流速为1.0mL·min－1，柱温为30℃。结果醋酸曲安奈德的线性范围为：5.170～51.70μg·mL－1（r＝0.999 9）；平均回收率为102.90%，RSD为1.3%。结论该方法简便，快速，准确，专属性强，可用于醋酸曲安奈德搽剂含量和有关物质的控制方法。

醋酸曲安奈德；高效液相色谱法；含量测定；有关物质

醋酸曲安奈德搽剂是由醋酸曲安奈德溶于二甲基亚砜中，加适量乙醇和甘油制成的医院制剂。临床用于治疗神经性皮炎、湿疹及银屑病等有较好的疗效。目前，对于该制剂含量测定方法仅限于分光光度法［1，2］。另外，该制剂中醋酸曲安奈德易降解产生曲安奈德［3］，所以有必要对该制剂中有关物质进行控制。为使该制剂质量控制方法快速、准确，本文建立了高效液相色谱法同时测定含量及有关物质，该方法准确可靠，操作简便易行。

1 仪器和试药

1.1 仪器 Agilent 1200液相色谱仪，包括自动脱气机、四元泵、自动进样系统、紫外检测器、柱温箱、1200化学工作站、Mettler XS205电子分析天平。Capcell Pak C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm，Col NO.AKAB04912，Col NO.AKAB04913）；Inertsil ODS SP色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；SunFire C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm）。

1.2 试药 醋酸曲安奈德搽剂（临沂市皮肤病医院制剂室提供，批号：20120811、20120906、20120911），醋酸曲安奈德对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100125－200404）；曲安奈德对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100055－200302）；色谱纯甲醇，高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Capcell PAK C18（4.6 mm×150 mm，5μm），流动相：甲醇－水（70∶30），检测波长：240 nm，流速：1.0 mL·min－1，进样量：20μL，柱温：30℃。精密量取混合对照品溶液20μL，注入液相色谱仪，理论板数按醋酸曲安奈德峰计不低于2 000，醋酸曲安奈德峰与曲安奈德峰之间的分离度符合要求，见图1。

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液 精密量取本品2 mL，置50mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液储备液 精密称取醋酸曲安奈德对照品约10 mg，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液储备液。

2.2.3 混合对照品溶液 精密称取醋酸曲安奈德对照品与曲安奈德对照品约25 mg，分别置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述两种对照品溶液各1 mL，置同一100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

图1 HPLC图谱

2.3 线性关系考察 精密量取对照品溶液储备液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL分别置于10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为系列溶液，用0.45 μm微孔滤膜过滤后，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，对照品溶液浓度（X，μg·mL－1）为横坐标，制备标准曲线，得回归方程：Y＝39.606X＋2.366 3（r＝0.999 9），表明醋酸曲安奈德在5.170～51.70μg·mL－1范围内呈良好线性关系。

2.4 稳定性考察 取本品，按“2.2.1”供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件分别在0、2、4、8、12、24 h进样，记录色谱图。结果醋酸曲安奈德及曲安奈德峰面积RSD分别为0.7%、1.2%。表明样品在24 h内稳定性良好。

2.5 精密度考察 取同一供试品溶液，连续进样6次，测定醋酸曲安奈德峰面积。结果：RSD＝0.2%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性考察 按“2.2.1”方法平行制备6份供试品溶液，分别进样。结果：6份样品平均含量为0.54 mg·mL－1，RSD＝0.7%，表明方法的重复性良好。

2.7 加样回收率试验 精密量取样品1 mL，置50 mL量瓶中，分别精密加入对照品储备液4、5、6 mL，每个浓度制备3份样品，按“2.2.1”方法制备供试品溶液，精密吸取20μL，注入液相色谱仪，计算加样回收率。结果，其平均回收率为：102.90%，RSD＝1.3%。说明该方法可行。加样回收率试验结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）

2.8 检测限和定量限 精密吸取混合对照品溶液适量，加流动相逐步稀释成不同浓度的溶液，在上述色谱条件下分别进样，按信噪比S／N＝10测定其定量限，按信噪比S／N＝3测定其检出限。测得醋酸曲安奈德的定量限为0.3μg·mL－1，曲安奈德的检出限为0.1μg·mL－1。

2.9 方法专属性试验 取本品2 mL，置50 mL量瓶中，分别进行以下试验：①光破坏：加流动相稀释至刻度，置于强光下（4 500 Lx）照射24 h；②高温破坏：加流动相适量，置于水浴中加热5 h后，放至室温，加流动相至刻度；③氧化破坏：加30%过氧化氢2 mL，振摇，水浴加热30 mim，放至室温，加流动相至刻度；④酸破坏：加0.5 mol·L－1的盐酸溶液2 mL，振摇，水浴加热30 mim，放至室温，用0.5 mol· L－1的氢氧化钠溶液2mL中和，加流动相至刻度；⑤碱破坏：加0.1 mol·L－1的氢氧化钠溶液2 mL，振摇，水浴加热30 min，放至室温，用0.1 mol·L－1的盐酸溶液2 mL中和，加流动相至刻度；⑥空白：稀释所用流动相。取上述溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，见图2。在建立的色谱条件下，醋酸曲安奈德峰和曲安奈德峰之间的分离度良好，且与其他杂质峰之间成到完全分离，基线平稳，在醋酸曲安奈德出峰处无杂质峰干扰。且经破坏试验后，产生的降解杂质主要为曲安奈德。

2.10 耐用性考察 通过改变流动相比例变化甲醇－水（65∶35）与甲醇－水（75∶25）；柱温变化30、40℃及室温；流速0.8 mL·min－1及1.2 mL·min－1；色谱柱品牌型号Capcell Pak C18色谱柱（4.6 mm× 150 mm，5μm，Col NO.AKAB04912，Col NO.AKAB04913）；Inertsil ODS SP色谱柱（4.6 mm ×150 mm，5μm）；SunFire C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm）等试验条件，经试验，以上变动均能通过本试验系统适用性试验的要求。

图2 破坏试验色谱图

2.11 样品含量测定 按“2.2.1”方法制备供试品溶液，按色谱条件进液相，记录色谱图，求得样品中醋酸曲安奈德含量见表2。同时，按照参考文献［1］报道的方法进行含量测定，3批样品的含量测定结果如表2所示。

表2 样品测定结果（n＝2）

2.12 有关物质 分别取3批样品，按“2.2.1”方法制备供试品溶液，每批2份；按“2.2.3”方法制备杂质对照品溶液。分别取供试品溶液和杂质对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分保留时间的2倍。按外标法以醋酸曲安奈德标示量计算杂质曲安奈德的含量，结果见表2，3批样品杂质含量均未超过1.0%，且未检出其他有关物质。

3 讨论

3.1 流动相的选择 本研究分别考察了甲醇－水在不同比例时的色谱图，结果表明，甲醇比例大于75%时，曲安奈德峰保留时间太短，与辅料峰分离较差；当甲醇比例小于65%时，醋酸曲安奈德峰保留时间太长，峰形较宽，积分不准确；选择甲醇－水比例为70∶30时，色谱峰之间的分离度较好，且基线平稳峰形较好，积分准确。

3.2 检测波长的选择 本研究对醋酸曲安奈德和曲安奈德进行紫外光谱扫描，发现两种成分在240 nm处均有较大吸收。同时参考《中国药典》2010年版（二部）中醋酸曲安奈德原料药的检测方法［4］，选择在240 nm紫外波长处进行检测。

醋酸曲安奈德是临床广泛应用的激素类药物，临床应用时往往做成各种剂型，《中国药典》2010年版（二部）收载的有乳膏和注射液［4］，其含量测定方法也有分光光度法和高效液相色谱法，对于醋酸曲安奈德搽剂含量测定方法仅有分光光度法。但是，分光光度法受显色条件的影响较大，其测定结果准确性较差。本研究采用高效液相色谱法，其测定结果准确度和灵敏度均较分光光度法有较大提高。且此方法操作简单，重复性好，对于该制剂的质量控制具有较高的实用价值。

［1］刘荣，张显杰，谭贺文，等.醋酸曲安奈德搽剂的含量测定［J］.解放军药学学报，2004，20（4）：308－310.

［2］陈新善，刘玉波，张波，等.分光光度法测定复方醋酸曲安奈德搽剂中醋酸曲安奈德的含量［J］.解放军药学学报，2004，17（4）：227－228.

［3］郭江红，赵亚萍，姜红，等.RP－HPLC法测定曲安奈德氯霉素溶液的含量及有关物质［J］.药物分析杂志，2012，32（2）：323－326.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：1122－1123.

Determ ination of triam cinolone acetonide and its related substances in Triam cinolone Acetonide Acetate Liniment by HPLC

ZHANG Lei
（Linyi Center for Food and Drug Testing，Linyi276000，China）

ObjectiveTo establish amethod for the determination of triamcinolone acetonide and its related substances in Triamcinolone Acetonide Acetate Liniment.M ethodsA Capcell Pak C18（4.6mm×150mm，5μm）column was adopted with amobile phase ofmethanol－water（70∶30）at the flow rate of1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 240 nm，and the column temperature was 30℃.ResultsThe linear range of triamcinolone acetonide acetate was 5.170～51.70μg·mL－1（r＝0.999 9）.The average recovery was102.90%，and the RSD was1.3%.ConclusionThe proposed method was simple，rapid，accurate，repeatable，and can be used to control the quality of Triamcinolone Acetonide Acetate Liniment.

Triamcinolone acetonide acetate；HPLC；Determination；Rrelated substances

R927.2

A

2095－5375（2014）02－0087－003

张磊，男，研究方向：药品检验，E－mail：lei0528＠126.com