关于盆腔炎性疾病动物模型的研究概况

刘文娥，张婉妮(综述)，陈燕霞(审校)

(1.湖南中医药大学第一附属医院妇产科，长沙 41007； 2.湖南中医药大学七年制研究生班，长沙 410007)

盆腔炎性疾病(pelvic inflammatory disease，PID)是女性生殖器及其周围结缔组织、盆腔腹膜发生的炎症，是女性常见的多发病，其严重影响育龄期妇女的生殖健康和生活质量。PID主要包括子宫内膜炎、输卵管炎、输卵管卵巢脓肿、盆腔腹膜炎等，若PID未得到及时、彻底的治疗，可导致不孕、输卵管妊娠、慢性盆腔痛，炎症反复发作可严重影响妇女的生殖健康，增加家庭与社会的经济负担[1]。动物模型对深入系统研究PID具有重要意义，随着科研技术发展的不断进步，PID的造模方法也在不断完善，现对相关方法综述如下。

1 物理性方法

1.1异物置入法 将异物置入体内，一方面会对正常组织产生刺激作用，引发局部炎性反应；另一方面也会引起机体的免疫反应。刘元等[2]、张晴等[3]麻醉大鼠后，于下腹正中切开2 cm，暴露子宫，沿左侧子宫角上1 cm处做一横切口，将酒精消毒的塑料管(管径2 mm，长5 mm，重2 mg)埋入子宫内制备大鼠子宫炎症模型。

1.2机械损伤法 机械损伤法是常用的造模方法，但很少单独应用，多与他方法联合。实验多采用磨口针头在宫腔内来回抽拉数次，机械性损伤子宫内膜组织，细菌通过破损处侵入或长期刺激子宫，促使炎症形成。黄淑凤等[4]和常润等[5]在机械损伤的基础上加以化学烧伤或细菌接种法均达到预期效果。

2 化学性方法

2.1苯酚胶浆法 该法是PID动物模型中使用较早、应用较为广泛的造模方法之一，其通过苯酚对组织的化学性烧伤而达到致炎目的。研究中常用25%苯酚胶浆(苯酚5 mL、西黄芪胶1 g、甘油4 mL加水至20 mL制成或由液化苯酚、蒸馏水以及羧甲基纤维素钠配置而成)。马云等[6]麻醉大鼠后开腹，注射器针头于子宫分岔处进入宫腔内，朝右侧卵巢方向缓慢推注苯酚胶浆0.06 mL。造模后第11日，肉眼可见模型组右侧子宫明显水肿，有炎性包块，与周围组织粘连不清；镜下显示腔壁结构紊乱，腺体萎缩变形，全层可见大量炎性细胞浸润。汪明德等[7]、程靖等[8]和张彦等[9]均采用此法制备大鼠PID模型。付桂香等[10]采用苯酚胶浆大鼠阴道注射制备阴道及宫颈炎症模型：用锥形静脉切开针进入大鼠阴道深部，并注入苯酚胶浆，每只0.3 mL，每3天注射1次，共3次。

苯酚胶浆法属于化学性烧伤法，可造成炎性反应与粘连，发病特点虽与人类PID相异，但在阻塞性输卵管炎及不孕的研究中占优势。因苯酚胶浆法简单易行，造模时间短，在某种程度上仍为学者所接受。

2.2盐酸法 盐酸是一种强酸，体内注射盐酸可对正常组织产生刺激、腐蚀作用而致炎。傅汝廉等[11]最早使用盐酸阑尾静脉注射法建立阑尾炎性包块模型，刘庆等[12]参考傅氏方法，向双侧宫腔注射0.3 N的盐酸,除2只大鼠因麻醉原因死亡外，其余大鼠镜下可见宫腔内大量脓细胞积聚，部分上皮变性、坏死，黏膜下层充血水肿、炎细胞浸润。

盐酸致炎法方法虽简单，但由于酸性太强，因而在实验研究中并不常用，其剂量与浓度的选择需根据实验研究的具体要求而定。

3 生物性方法

引起PID的病原体包括内源性和外源性两类，两种病原体可单独应用，但常混合存在[1]。生物性造模法更接近人类PID的致病过程，但造模时间较长，一般需20 d左右[13]。造模所选菌液可为单一细菌，也可为混合菌液，混合菌液造模更有利于炎症产生，也更接近人类PID致病特点。动物造模中菌液浓度的选择要合理，既要满足实验的致炎目的，又不能引起菌血症导致动物死亡。

3.1内源性病原体感染法 内源性病原体主要来自于寄居于阴道内的微生物群，包括需氧菌和厌氧菌，需氧菌主要是大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌，而厌氧菌主要是脆弱类杆菌。

孙晓玮等[14]取大鼠下腹正中做长0.8～1.0 cm的切口，暴露右侧子宫，用注射器取0.1 mL大肠埃希菌菌液(浓度为6×109个/L)注入大鼠子宫。模型组大鼠肉眼可见子宫肿胀、发硬，与周围组织粘连，形成硬结；镜下可见管壁黏膜层与肌层结构模糊，上皮细胞变性坏死脱落，组织充血水肿伴炎性细胞浸润。卫昊等[15]将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌按2∶1∶1比例溶于无菌性生理盐水中，运用比浊法配制成浓度为3×1011个/L的混合菌液，在大鼠右侧子宫注入混合菌悬液0.1 mL。结果提示，模型组大鼠子宫黏膜上皮有明显的变性坏死，肌层与固有层均有明显的结缔组织增生及炎细胞浸润，肌层排列紊乱，管腔有一定粘连阻塞，浆膜层有散在炎细胞浸润。师伟等[16]、杨林波等[17]和邱赛红等[18]均采用混合菌液接种法造模成功。

以上方法均为开腹后子宫注射器接种。此外，冯平安等[19]采用小鼠腹腔直接注射脆弱类杆菌悬液0.35 mL、大肠埃希菌菌液0.5 mL制备小鼠盆腔炎模型。李俊良等[20]采用逆行宫腔插管灌注细菌法，将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌以1∶1配制成浓度为1×1010/L的菌液后多次经阴道注入宫腔内以持续刺激宫腔。实验结果显示，双侧输卵管水肿、充血、盆腔积液，双侧输卵管壁增厚，呈串珠样改变。

3.2外源性病原体感染法 外源性病原体主要为性传播疾病的病原体，如解脲支原体、沙眼衣原体、淋病奈瑟菌等，其主要沿生殖道黏膜上行蔓延感染。

刘弘等[21]采用苯甲酸雌二醇预处理(皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.2 mL，每周1次，共4次)小鼠，然后给予小鼠阴道多次接种解脲支原体血清8型感染液制备PID模型。造模后小鼠阴道发红，分泌物增多，宫颈肥大，子宫及输卵管水肿；阴拭子培养支原体均为阳性；病理切片显示生殖器官4个部位均有明显的中性粒细胞浸润。韩建德等[22]给予雌性小鼠阴道内接种小鼠肺炎沙眼衣原体，3周内输卵管发生急性炎症，3周后输卵管出现扭曲、阻塞、积水等慢性炎性改变。

此外，朱叶等[23]和师振予等[24]将解脲支原体、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌按 1∶1∶1的比例混合配制成浓度为3×1015/L的混合菌液，并将其注入大鼠一侧宫腔内制备PID模型；李鑫等[25]将蘸有金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌以及解脲支原体混合菌液的医用明胶片经阴道塞至宫腔内，连续4次，制备PID模型。

国内制备PID模型多采用小动物，如大鼠、小鼠、豚鼠、兔等，小动物模型具有成本低、易于处理、并能够改变其基因(如敲除小鼠基因)等优点,但其与人类疾病机制相差甚远。自非人灵长类动物(non-human primates,NHPs)允许用于人类生物、生理、解剖的研究后，国外多倾向使用NHPs用于生物医学研究。雌性NHPs生殖系统的大小和形态与女性相似[26]。国外多采用沙眼衣原体感染NHPs(黑猩猩、狨猴、猕猴、狒狒等)制备PID模型，通过多次重复逆行性宫颈、子宫内膜或输卵管直接接种沙眼衣原体致宫颈炎、子宫内膜炎或输卵管炎模型，其更类似于人类PID模型[27]。但NHPs本身价格昂贵,且还需要专业设施以及职业技术人员来照顾这些动物，所需的成本巨大，对于很多实验室来说都是无法完成的。

4“病证结合”制备PID动物模型

目前，关于建立不同证型的PID动物模型的研究报道较少，且单一。凌娜等[28]制备了阳虚证慢性盆腔炎大鼠动物模型：在采用混合菌接种法(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌比例2∶1∶1)制备大鼠盆腔炎的基础上，将造模后的大鼠用地塞米松混悬液(18 mg/L)2 mL+生理盐水2 mL，每日下午17：00～19：00灌胃，连续 7 d，中间休息1 d，共灌胃16次。采用地塞米松混悬液灌胃后实验大鼠逐渐出现行动迟缓、神志萎靡、蜷缩、拱背、足部肿胀、体毛稀疏尤以尾部突出等脾肾阳虚的表现。

黄青等[29]对大鼠皮下注射0.08 mg/100 g的盐酸肾上腺素后，将大鼠放入0 ℃冰水中，5 min后取出，2 h后再次注射盐酸肾上腺素0.08 mg/100 g，再次放入0 ℃冰水中5 min，制备大鼠盆腔炎急性血瘀模型。通过测定血液流变学指标提示造模的准确性。

叶秋香等[30]采用苯酚胶浆法叠加冰浴法建立寒凝血瘀证慢性盆腔炎大鼠模型，即在苯酚胶浆法建立盆腔炎模型的基础上，将大鼠放入冰浴槽中，不断加入水和冰块，直至测水温为0 ～1 ℃、水面与直立大鼠颈部相平为止，每日冰浴1次，每次20 min，连续2周。

5 小 结

PID是一个全球性的健康问题，其严重影响着女性的正常工作、学习和生活。随着对PID研究的不断深入，其造模方法也在不断的发展与改进，使其更加接近人类疾病的致病特点。但研究中仍然存在很多弊端，如动物造模多采用开腹手术，实际过程中难免造成腹腔感染，严重影响动物造模术后的存活率、造模效果及实验的准确性；逆行性宫腔混合菌液接种接近人类上行感染机制，但接种感染率低，需多次重复试验，实际造模效果难以判定；NHPs价格昂贵，且数量有限，而小动物模型无法真实复制人类疾病模型。因此开发出一种高效、安全、持久、快捷的造模方式仍是摆在研究者面前长期而艰巨的任务。

此外，中医“病证结合”PID动物模型尚不够成熟，仅见于个别报道，且局限在血瘀、阳虚等方面，而湿热、气滞、气虚等方面的研究还很欠缺，关于中医证候与PID的相关性研究还需要研究者不断大胆创新，使动物造模及诊治上更加凸显中医特色。

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