血管内皮生长因子-C在肾癌中的表达及意义

李修明，于 满，汪 立

(承德医学院附属医院泌尿外科，河北承德 067000)

血管内皮生长因子-C在肾癌中的表达及意义

李修明，于 满△，汪 立

(承德医学院附属医院泌尿外科，河北承德 067000)

目的:探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在肾癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学SP法检测VEGF-C在肾癌及正常肾组织中的表达情况。结果:肾癌组织VEGF-C的阳性表达率(85.0%)显著高于正常肾组织(P＜0.01)。肾癌组织VEGF-C的阳性表达与年龄、性别、分化程度无关(P＞0.05)，与有无淋巴结转移和肾癌临床分期有关(P＜0.05)。结论:VEGF-C可能通过促进淋巴管生成参与肾癌的淋巴结转移，在肾癌的发生发展中发挥重要作用。

肾癌;血管内皮生长因子-C;免疫组织化学

肾细胞癌(renal cell carcinoma，RCC)占成人恶性肿瘤的2%-3%，发病率居泌尿系统肿瘤的第2位。仅2008年全世界诊断肾癌约2.71万例，因肾癌死亡约1.16万人[1-2]。尽管血行转移是肾癌最重要的转移途径，但仍有7%-17%的患者存在肾门或局部淋巴结转移。新近研究证明，血管内皮生长因子-C(VEGF-C)及其受体VEGFR-3信号通路是淋巴管形成的基础，并在转基因动物模型观察到VEGF-C可诱导肿瘤淋巴管生成并促进肿瘤的淋巴结转移。本研究通过检测VEGF-C在肾癌中的表达，探讨其在肾癌发生发展中的作用及相关机制。

1 材料与方法

1.1 材料 2012年8月-2013年8月承德医学院附属医院泌尿外科RCC手术切除标本40例，18例行保留肾单位手术、22例行根治性肾切除术，伴有淋巴结转移的患者均行根治性肾切除术加区域淋巴结清扫术。患者中男25例、女15例，年龄24-65岁(平均51.9岁)。所有病例均经病理证实为RCC，其中透明细胞癌37例、乳头状腺癌1例、嫌色细胞癌2例，所有患者术前均未接受放化疗及免疫治疗。肿瘤分级按1997年WHO标准:高分化20例，中分化11例，低分化或未分化9例。肿瘤分期按2002年AJCC肾癌临床分期:Ⅰ期22例，Ⅱ期6例，Ⅲ期11例，Ⅳ期1例。其中无淋巴结转移者29例，有肾门周围淋巴结转移者11例。以10例取自根治性肾切除标本中距肿瘤最远处正常肾脏组织为对照。

1.2 方法 标本常规4%甲醛固定，石蜡包埋，5μm连续切片。采用免疫组织化学SP法检测VEGF-C的表达。一抗为兔抗人VEGF-C多克隆抗体(武汉博士德公司，1:100稀释)，DAB显色，苏木素复染。PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定 以肾癌细胞胞质和/或胞膜出现清晰棕黄色颗粒为阳性反应，采用Volm双评分法判定结果[3]。在染色均匀的肿瘤区，选取5个高倍镜视野(×400):①按阳性细胞百分率(A值)评分:无明显阳性细胞为0分，＜25%为1分，25%-50%为2分，＞50%为3分;③按染色强度(B值)评分:不着色为0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。综合染色阳性细胞数(A值)与染色强度(B值)判断结果:阴性(-):0分，弱阳性(+):1-2分，中度阳性(++):3-4分，强阳性(+++):5-6分。

1.4 统计分析 采用SPSS 17.0统计软件，行卡方检验和等级资料的秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同肾组织VEGF-C的表达情况 40例RCC组织中，VEGF-C的阳性表达率为85.0%(34/40)，明显高于正常肾组织，差异具有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

表1 VEGF-C在正常肾组织及肾癌中的表达情况

2.2 VEGF-C阳性表达与肾癌病理特征的关系 见表2。VEGF-C阳性表达与年龄、性别、分化程度无关(P＞0.05)，与有无淋巴结转移和肾癌临床分期有关(P＜0.05)。

表2 VEGF-C表达与肾癌病理特征的关系

3 讨论

VEGF-C是VEGF家族中第一个被发现的特异性促进淋巴管生成的因子，作为配体与VEGFR-3结合，通过激活VEGFR-3诱导淋巴管内皮细胞增殖、迁徙，促进淋巴管增生[4]。虽然肿瘤是否能诱导淋巴管生成目前仍有争议，但已证实淋巴生成因子如VEGF-C的过量表达可促使生成更多的淋巴管，有利于肿瘤的淋巴结转移。关于实验小鼠肿瘤模型的研究发现，VEGF-C能够诱导淋巴管出芽，并能诱导肿瘤细胞进入毛细淋巴管[5];Ruddell等[6]研究发现，VEGF-C能诱导集合淋巴管扩张，利于淋巴液流动，运送大量的肿瘤细胞向淋巴结积聚，从而有助于肿瘤的远处转移。并且目前的研究已经发现，大多恶性肿瘤，如前列腺癌、结直肠癌、胃癌、乳腺癌和肺癌等均发现VEGF-C的表达明显高于正常组织。本研究亦证实了这一点，肾癌组织VEGF-C的阳性表达率明显高于正常肾组织;同时发现，肾癌VEGF-C的阳性表达与肾癌病理分期和有无淋巴结转移有关。本研究亦提示，VEGF-C在肿瘤的生长和转移中具有重要作用，淋巴管生成可能是RCC淋巴结转移的重要因素。

近年来肿瘤淋巴结转移的研究引起了广大学者的高度重视，但肿瘤淋巴结转移的具体过程尚不十分清楚。Wong等[7]的研究证实，采用稳定的短时间RNA干扰抑制VEGF-C的表达，肿瘤的淋巴管形成减少达99%，但不影响淋巴结转移;还有研究显示，虽然新生淋巴管可完全被VEGFR-3抗体抑制，但仍在淋巴结中发现肿瘤。提示肿瘤分泌VEGF-C为新生淋巴管必需，但淋巴管新生不是淋巴结转移所必需的。可见，肿瘤的淋巴结转移取决于淋巴管和肿瘤细胞迁移双方面的作用，不能单纯将肿瘤淋巴管新生作为判断肿瘤转移和预后的指标，但目前以VEGF-C为靶向的抗淋巴管生成研究已经开展。多项研究均显示，VEGFR-3抑制性抗体或以VEGF-C为靶向的siRNA能够降低肿瘤淋巴结转移的发生率[8-9];Kimura[10]等发现，黄芩的提取物黄芩素可通过抑制VEGF-C诱导的淋巴管内皮细胞VEGFR-3的磷酸化，抑制肿瘤淋巴管生成，从而抑制肾癌的生长及转移，提示VEGF-C可作为基因治疗的靶点。

随着对VEGF-C结构、功能以及肾癌淋巴管生成机制的进一步研究，相信在不久的将来将逐渐阐明肾癌淋巴管生成的机制及其与肾癌生物学行为的关系，因此，针对肾癌淋巴管新生的靶向治疗在临床中的应用也将具有广阔的前景。

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EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR-C IN RENAL CELL CARCINOMA

LI Xiu-ming, YU Man, WANG Li
(Department of Urology, the Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To investigate the effects of vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C) in development of renal cell carcinoma.Methods:SP immunohistochemical staining was used to observe the expressions of VEGF-C in renal cell carcinoma and normal renal tissue.Results:The positive rate of VEGF-C in renal cell carcinoma was 85.0%, which was obviously higher than that of normal renal tissue (P＜0.01). In renal cell carcinoma, the positive expression of VEGF-C had no relations with age, sex and differentiation degree (P＞0.05); but was related to lymphatic metastasis and clinical classif i cation of renal cell carcinoma (P＜0.0).Conclusions:VEGF-C may participate in lymph node metastasis of renal cell carcinoma by promoting lymphangiogenesis, so plays important role in carcinogenesis and development of renal cell carcinoma.

Renal cell carcinoma; VEGF-C; Immunohistochemistry

R737.11

A

1004-6879(2014)03-0191-03

2013-11-05)

△ 通讯作者