抗核抗体及抗核抗体谱的实验检测方法及结果分析

朱凤丹 尹秀杉

四川省南充市中心医院检验科 637000

自身免疫性疾病（Autoimmune diseases，AID）是由机体免疫功能异常引起的，这类疾病患者体内常伴有如抑制性T细胞功能低下、体液免疫功能亢进等免疫功能的异常，同时还可出现最具诊断与鉴别意义的自身抗体。笔者采用间接免疫荧光法（Indirect immunofluorescence，IIF）和免疫印迹法（Immumoblot test，IBT）检 测 与AID相 关 的 自 身 抗体——抗核抗体（Antinuclear antibodies，ANA）、抗核抗体谱（Antinuclear antibodies spectrum，ANAs），并对近期检测的2 317例样本的结果资料进行回顾性分析，旨在探讨分析两种方法联合检测在诊断AID的价值，为临床减少漏诊，提供实验室依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集我院2013年1月－2014年6月间门诊、住院、健康体检等人群的自身免疫性疾病筛查或诊断资料2 317例，其中男845例，女1 472例，年龄0～93岁。按年龄分为0～12岁、13～18岁、19～35岁、36～55岁、≥56岁组。

1.2 IIF检测 ANA，以Hep－2细胞和猴肝切片作为抗原基质，血清采用1∶100，1∶320，1∶1 000滴度系列，起始滴度为1∶100；检测抗双链DNA抗体（anti－double strand DNA antibody，dsDNA），以绿蝇短毛虫天然DNA作为抗原基质，血清采用1∶10，1∶20，1∶40滴度系列，起始滴度为1∶10。商品试剂由德国欧蒙（杭州）医学实验诊断有限公司生产。

1.3 IBT检测 ANAs，包括抗nRP／Sm、抗Sm、抗SSA、抗Ro52、抗SSB、抗Scl－70、抗PM－Scl、抗Jo－1、抗CNEP B、抗PCAN、抗核小体、抗组蛋白、抗核糖体P蛋白、抗AMA M2、抗dsDNA抗体共15项（德国欧蒙医学实验诊断股份公司）。血清标本作1∶100稀释。全自动免疫印迹仪（奥地利Tecan公司），实验结束后膜条用Lide 100扫描仪（日本佳能公司）扫描，EUROLineScan自动判别软件（德国欧蒙医学实验诊断股份公司）自动判读，再进行人工核对。

1.4 分组 2 317例受检血清均同时检测ANA和ANAs。为探讨IIF和IBT对结缔组织疾病的诊断效能，分为IIF组：仅用IIF检测ANA；IBT组：仅用IBT检测ANAs（IBT检测ANAs，只要出现1条阳性反应带，即定为阳性）；IIF＋IBT组：同时用IIF和IBT检测ANA和ANAs。

1.5 统计学分析 采用SPSS19.0统计软件进行，两组间率比较用χ2检验分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2 317例受检者中，ANA（＋）和／或ANAs（＋）共914例，其中女710例，男204例；36岁及以上年龄段，女458例，男147例。女性患自身免疫性疾病的可能性或发病率明显高于男性，随着年龄的增长，男性和女性患病概率均呈增长趋势。结果见表1。

表1 不同性别、不同年龄段ANA和／或ANAs阳性例数〔n（%）〕

2.2 2 317例血清ANA和ANAs检测结果中，ANA阳性740例（31.9%），ANAs阳性723例（31.2%），ANA和ANAs均阳性549例，ANA（＋）和ANAs（＋）符合率74.2%，ANA（－）和ANAs（－）符合率89.0%，总体符合率84.2%。结果见表2。

表2 2 317例样本ANA和ANAs检测结果〔n（%）〕

2.3 740例ANA阳性结果，以颗粒型为主（占56.08%），其次为均质性、胞浆颗粒型。结果见表3。

表3 740例ANA主要荧光核型

2.4 ANA（＋）／ANAs（＋）标本不同核型中各特异性抗体分析。颗粒型多为SSA，Ro52，nRP／Sm抗体，均质型多为SSA，Ro52和抗核小体抗体，胞浆颗粒型中多为SSA，Ro52和AMA－M2抗体，着丝点型多为CNEP B抗体。Ro52抗体是ANA谱中最活跃的抗体，几乎可以见于各种核型，特异性较差。结果见表4。

表4 549例ANA（＋）／ANAs（＋）标本不同核型中各特异性抗体的检测结果

3 讨论

本文对2 317例自身免疫性疾病相关抗体检测的结果资料进行了回顾性分析，笔者发现ANA和／或ANAs阳性人群中，女性占77.7%，男性占22.3%，男女比为1∶3.48，表明女性患自身免疫性疾病的可能性或发病率高于男性。由于男女性别之间的免疫环境和免疫强度存在差异，女性较男性有更强的体液和细胞免疫反应，即有更好的免疫反应能力；同时由于雌激素的作用使女性下丘脑－垂体－肾上腺轴（HPA）对应激的敏感性高于男性，HPA分泌的糖皮质激素不仅是机体应激应答必要的内分泌激素，而且还有抗炎和免疫抑制作用［1］，因此女性患自身免疫性疾病的概率明显高于男性。从年龄段观察，36～55岁的女性阳性率达34.2%，明显高于其他年龄段，36岁及以上年龄段阳性率50.1%；而在男性人群，36岁及以上年龄段阳性率16.1%，相对于其他年龄段较高。由此可见，36岁以上人群，无论男女性别，自身免疫性疾病发生的可能性或发病明显增高。

本文对2 317例受检者血清同时检测ANA和ANAs。按准断效能分组判断，IIF检测ANA，阳性740例，占检测总数的31.9%；IBT检测ANAs，阳性723例，占检测总数的31.2%，而同时检测ANA和ANAs，阳性共914例，占检测总数的39.4%。IIF检测ANA可应用于大范围的AID患者初筛并减轻患者经济负担及实验室工作压力，但仅检测ANA或ANAs均可导致临床患有AID或潜在AID患者的漏检，联合检测则可显著提高阳性检出率，从而降低现症及潜在AID患者的漏检率［2］。本文结果显示，联合检测ANA和ANAs，阳性检出率明显高于单独ANA或ANAs检测。笔者还对650例样本同时用IIF和IBT检测ds－DNA，其中IIF阳性14例（2.2%），IBT阳性24例（3.7%），两组间比较，阳性检出率差异有统计学意义（χ2＝8.9，P＜0.05）；而IIF和IBT同时阳性仅有8例，可见如果单独用其中一种方法检测，可能出现假阳性或假阴性，而两种方法联合起来可以最大限度的避免此类问题。

联合ANA阳性荧光模型和ANAs出现的抗原多肽，是诊断和鉴别自身免疫性疾病的重要实验室依据。ANA检测以抗原谱完整的Hep－2细胞为基质，针对细胞靶抗原的特异抗体可产生特定的荧光模型，而后者与某些疾病有关［3～5］。本文结果显示，740例ANA阳性样本的荧光分型以核颗粒型最常见，占56.08%，其次是均质型，占19.32%，部分样本还可见2种或2种以上核型，每种核型的代表性抗体各不相同，因此核型分型有助于缩小靶抗原确认的试实验范围；同时检测ANAs，可发现在每一种ANA核型中，有一种或几种靶抗原存在。本文中核颗粒型相对应的抗原多肽以抗SSA、抗Ro52、抗nRP／Sm出现的频率最高，由此可以推论这3种靶抗原应该是核颗粒型的代表性多肽（靶）抗原，而其他核型的代表性多肽（靶）抗原也可以根据其抗原多肽出现的频率进行推测。本文分析中发现有ANAs阳性者中出现核型不一致的情况，ANA阴性但出现ANAs特异性抗体阳性，这可能与血清中其他抗体效价较强，使不一致抗体在IIF分析中被遮蔽有关［6］；或者Hep－2细胞不是某些抗体的最佳检测基质；如固定不当，SSA等可溶性抗原可被洗去而出现IIF分析的假阴性［7，8］。IBT检测ANAs的特异性抗体，在反应膜条上平行包被多种高度纯化或重组的抗原物质，一次可检测多种与自身免疫性疾病诊断相关的特异性自身抗体。但同时抗核抗体谱免疫印迹法也存在着较高的漏检率，其原因分析为，该谱只含有与常见自身免疫性疾病相关的抗核抗体，而不代表全部抗核抗体。此外，该免疫印迹法也存在一定的错检率，这可能与血清处理不当，产生非特异性吸附有关。

有学者提出ANA检测选择原则［9，10］，通 常首先采用以HEp－2细胞为抗原基质片的间接免疫荧光技术（IFA）进行筛查实验，阴性结果结合临床一般可以排除自身免疫性疾病的存在，若ANA阳性还必须进一步筛查ANAs和抗双链DNA（ds－DNA），以期对疾病做出明确诊断。本文同时检测了ANA抗体、dsDNA和ANAs，结果表明ANA检测选择原则是正确的，但笔者也认为，同时用IIF和IBT检测ANA和ANAs，不仅可以减少阳性漏检率，而且还可对临床诊断提供更有力的实验室证据。

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