牛病毒性腹泻/黏膜病的诊断流行病学调查及防控

王淑娟，王 华，宋晓晖，孙成友，徐天刚，刘春菊，张永强，赵永刚，刘海生，王志亮

（1.中国动物卫生与流行病学中心，山东 青岛 266032；2.国家奶牛产业技术体系，北京 海淀 100093；3.中国动物疫病预防控制中心，北京 朝阳 100125；4.青岛农业大学，山东 青岛 266109）

牛病毒性腹泻/黏膜病（BVD/MD）是由黄病毒科、瘟病毒属的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的主要侵害牛、羊、鹿、牦牛等反刍动物及猪的一种重要传染病。临床上以发热、腹泻、黏膜糜烂、肺炎、蹄叶炎、流产或产畸型胎儿为主要特征。病毒引起的急性疾病称为牛病毒性腹泻，引起的慢性持续性感染称为黏膜病。该病于1946年由Olafson[1]等在纽约首次发现。目前已在世界各国普遍存在，尤其养牛业发达的地区，广泛存在于欧美等许多养牛发达国家，给世界各国的畜牧业造成了严重的经济损失，每年死于此病感染的牛不少于500万头，由于其持续感染等造成的间接损失，也严重阻碍了畜牧业的发展。1980年以来，我国从西德、美国、加拿大、新西兰等10多个国家引进奶牛和种牛，因处理不当造成陆续在20多个省市自治区检出此病[2]。本文从牛病毒性腹泻/黏膜病的诊断、流行病学调查、防制措施等几方面进行了概述，希望能为该病的防控提供一些依据。

1 牛病毒性腹泻/黏膜病的诊断

牛病毒性腹泻/黏膜病根据临床表现主要分为以下3种类型。黏膜病型是BVDV感染引起的一种最严重的临床类型，发病率低，死亡率高。该病的潜伏期为7～9 d，主要特征为腹泻、脱水、白细胞减少及出现临床症状后几天发生死亡。主要侵害犊牛和青年牛，发病突然，病牛体温升高，当病程进一步发展时，鼻镜干燥，表皮剥落，病后几天鼻镜、舌、齿龈、腭、口腔黏膜充血并有溃疡；腹泻持续数周，粪便呈黄色水样，瓦灰色，恶臭，内含大量黏液和气泡，恶臭，病牛多因脱水死亡；腹泻型表现为间歇性腹泻，进行性消瘦，可发生跛行、球节部皮肤发红肿胀，腹泻初呈水样，后内含血液和黏液，并常见排出成片的肠黏膜；胎儿感染型表现为怀孕母牛感染后，发生流产、死胎、木乃伊或胎儿发生小脑发育不全、眼睛失明等先天性缺陷。如果病牛出现以上某种临床症状，剖检之后食道黏膜糜烂。鼻镜、鼻孔、齿龈、上颚、舌面两侧及颊黏膜有糜烂及浅溃疡，食道黏膜、胃黏膜、十二指肠黏膜等有出血条纹，空肠和回肠有点状或斑状出血，黏膜呈片状脱落，全身淋巴结黑灰色，可以做出初步诊断，但确诊需作病原鉴定和血清学检测。

1.1 病原鉴定 可采取病畜的血液、骨髓、脾、淋巴结及呼吸道、眼、鼻分泌物等进行病毒分离，或通过电镜检查、核酸杂交、RT-PCR、基因芯片技术、免疫组化等方法进行病原鉴定。

1.2 血清学检测 用于牛病毒性腹泻／黏膜病诊断的血清学方法有病毒中和试验、补体结合试验、琼脂扩散试验、免疫荧光试验、ELISA等。常用检测方法有病毒中和试验和ELISA，与病毒中和试验相比，ELISA检测方法极大的缩短了检测时间，且具有敏感、简便、易于标准化等优点，是进行血清流行病学调查的良好方法[3-4]。

2 流行病学调查

牛病毒性腹泻／黏膜病的危害之一是由突然发病死亡、腹泻、继发感染、流产、早产或死胎等造成的直接经济损失；危害之二是除导致动物疾病造成的直接损失外，对生物制品的污染造成的损失也不可轻视。因为生物制品常用到动物源的生物活性材料，如牛血清广泛用于细胞培养，也是病毒性疫苗生产所使用的重要生物材料之一，细胞培养物中污染BVDV，会污染疫苗、干扰素等生物制品[5]；危害之三是持续性感染，怀孕牛感染BVDV时，如果不发生流产、死胎等，其胎儿出生后将呈持续性感染，对BVDV免疫耐受的犊牛体内无BVDV抗体，不易被检出，但一直带毒，并通过分泌物向体外排毒，成为同群牛和胎儿感染的重要传染源。奶牛场一旦发生该病，将很难根除。鉴于此病的危害严重，且分布较广，因此对我国该病的发生与流行情况进行调查十分必要。本研究对来自北京、天津、陕西、山西、山东、新疆、河南、河北等地的996份血清进行了BVDV抗体检测，希望这些数据能让奶牛场对该病引起足够重视。

2.1 材料与方法

2.1.1 血清 被检牛血清样品996份，分别采自北京、天津、陕西、山西、山东、新疆、河南、河北等地的l1个奶牛场。

2.1.2 ELISA检测试剂盒 牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒（INGEZIMBVD）为西班牙Ingenasa公司产品

2.1.3 主要仪器 恒温培养箱、不同量程微量移液器、酶标仪等。

2.1.4 检测方法 所有的试剂盒组分在使用之前都必须恢复到室温。然后严格按照西班牙Inge⁃nasa公司的牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒的说明书进行操作。

2.1.5 结果判定 按试剂盒说明书所示进行结果判定。

2.2 结果 通过对来自北京、天津、陕西、山西、山东、新疆、河南、河北等地l1个奶牛场的996份血清样品进行BVDV抗体检测，共检出阳性血清688份，检出的群阳性率为100%，结果显示，这些牛场中都不同程度的存在BVDV的感染，最高阳性率达95.2%，最低阳性率为28.8%，平均阳性率为69.1%，抗体阳性率50%以上的牛场占了72.7%。结果见表1。

3 讨论

据报道[6]，当已感染的牛免疫机制受到抑制时，无论其体内是否存在病毒或抗体，都会向外界排毒，病牛康复后长期带毒就成为长期的潜在传染源。因此可以认为，在非免疫牛的血清中检测出BVDV抗体，就可确认牛体中有BVDV的存在，并有排毒的可能性[7-8]。牛病毒性腹泻/黏膜病在世界范围内广泛分布，尤其是养牛业发达国家，根据各国血清学的调查，牛群中有高度的感染率。本病常年均可发生，通常发生于冬末和春季。新疫区急性病例多，不论放牧牛或舍饲牛，大牛或小牛均可感染发病，发病率通常不高，约为5%，但病死率为90%～100%，发病牛以6-18个月龄居多；老疫区则急性病例很少，发病率和病死率很低，而隐性感染率在50%以上。我国从1980年首次报道也存在该病。杨得胜[9]等2006年对福建省9个地区大型牛场和散养户牛进行血清学调查，总阳性率达92.5%，王文[5]等通过对采自新疆10个地区(牛群）的875份牛血清进行BVDV抗体检测，结果显示，这些地区牛群中都不同程度的存在BVDV的感染，最高阳性率达100%，最低阳性率为55%，平均阳性率为86.7%。调查结果表明，我国不同地区广泛存在该病的发生。近年中国规模化奶牛和肉牛养殖业得到发展，牛病毒性腹泻/黏膜病应该引起政府和科研工作者的足够重视。BVDV的宿主不仅局限于牛羊等反刍动物，猪同样也是BVDV的宿主，所以对该病的控制也是发展养猪业所面临的问题。

表1 牛血清样品分布及BVDV抗体检测

4 防制措施

由于BVD广泛流行，而且致病机理复杂，给该病的防控带来很大困难，综合国内外的成功经验，可采用检疫预防、淘汰持续性感染动物，进行疫苗接种、对症治疗、提高饲养管理水平等综合防制措施。

4.1 检疫 严禁从病区购进牛只。对进口牛应严格检疫，学国内及省内调运种牛也要严格检疫，防止疫牛引进，特别是防止引进持续性感染的种牛。国内在进行牛只调运或交易时，要加强检疫，防止本病的扩大或蔓延。平时做好检疫工作，一旦查出阳性牛立即处理。在有条件情况下，发现病牛扑杀、无害化处理是较理想的办法。

4.2 免疫接种 目前国外已选育出弱毒株并制成疫苗，接种后免疫持续时间较长，但有接种反应，孕畜不宜使用。应用弱毒疫苗对断奶前后数周内牛只进行预防接种。对受威胁较大的牛群应每隔3—5年接种1次，育成母牛和种公牛于配种前再接种1次，多数牛可获得终生免疫。也有报道[10]，根据BVDV与猪瘟病毒的交叉免疫性原理，采用猪瘟兔化组织苗预防黏膜病安全有效，并不断用于生产实践。若应用灭活疫苗，可在配种前给牛免疫接种2次。

4.3 治疗 本病目前尚无有效疗法，只能在加强监护、饲养以增强牛机体抵抗力的基础上，进行对症治疗。应用收敛剂和补液疗法可缩短恢复期，减少损失。用抗生素和磺胺类药物，可减少继发性细菌感染。有文献报道[11]，用2%漂白粉消毒圈舍，清洁场地；0.3%高锰酸钾溶液清洗口腔和鼻黏膜，更换牛鼻绳；鼻黏膜、口腔及舌糜烂处涂擦碘甘油，3～4次/d，连用5 d；紧急免疫接种猪瘟脾淋苗20～30头份/头；肌肉注射黄芪多糖10～20mL，控制继发感染；对症状严重者静脉滴注葡萄糖生理盐水、ATP、辅酶A、葡萄糖酸钙、碳酸氢钠、维生素C、维生素B、头孢噻呋钠等，另加清瘟败毒散煎水灌服，3次／d，连用5 d。经采取以上措施后，发病牛场的病情得到控制，病牛体温逐渐恢复正常。

4.4 日常管理 提高饲养管理水平，保证奶牛的健康，增强奶牛的体质和提高奶牛的抗病力。定期对饲养工具及其环境消毒。限制外来人员进入牛场，减少应激作用特别是断奶及转群时。发病牛群要做好隔离消毒工作，防止疫情扩散。

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