山东规模化猪场猪流感（H1N1亚型）血清流行病学调查

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（1.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛 266109；2.山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南250100；3.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东济南 250100）

山东规模化猪场猪流感（H1N1亚型）血清流行病学调查

黄秉政1，2，孙文博2，3，殷斌2，杜以军2，3，李俊2，3，吴家强2，3，于江2，周顺1

（1.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛 266109；2.山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南250100；3.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东济南 250100）

本研究应用酶联免疫吸附试验对2012年2月至2013年5月来自山东省规模化猪场的1573份血清样品进行了猪流感HIN1亚型抗体检测，结果显示阳性血清524份，阳性率33.31%，这对了解山东及周边地区规模化猪场猪流感HIN1亚型的分布和流行状况提供了重要依据，对猪流感的防治具有参考意义。

猪流感；HIN1亚型；血清学调查

猪流感（Swine Infuenza，SI）是由A型猪流感病毒引起的一种猪群常见的急性、传染性呼吸系统疾病，该病的潜伏期为2～7天，病程一周左右。患病猪发病初期精神不振，食欲减退或不食，发病猪常横卧在一起，不愿活动。有的突然发热，个别病猪呼吸困难、喘气、咳嗽剧烈，呈腹式呼吸，有的呈犬坐姿势，夜里可听到病猪哮喘声。眼和鼻有黏性液体流出。个别病猪关节疼痛，不愿站立，尤其是膘情较好的猪发病较严重。病猪发热时体温升高至40℃～41.5℃，眼结膜充血。母猪在怀孕期感染，产下的仔猪在产后2～5天发病很重，有些在哺乳期及断奶前后死亡[1]。该病呈世界分布，目前，猪流感已遍及欧洲、美洲、亚洲、非洲、澳洲等世界各大洲。近年， 我国SI呈现不断蔓延的趋势，主要以地方流行性为主，已成为规模化养猪场的常见传染病之一，如果在发病期不及时治疗，则易并发支气管炎、肺炎和胸膜炎等疾病，猪的死亡率会大大增加，给猪场带来很大的经济损失[2]。

猪流感病毒（SIV）属于正粘病毒科，流感病毒属，包括A、B型流感病毒属（Infuenza virusA，B），C型流感病毒属（Infuenza virus C）和类托高土病毒属（Thogoto like virus），世界各地的猪流感病毒主要包括三种亚型：H1N1、H3N2和H1N2，其中又包括不同的基因型：古典猪H1N1、类禽H1N1、类人H3N2、基因重配的H3N2以及多基因型的H1N2亚型。在整个流感病毒的遗传进化和生态分布中都占有重要地位，感染猪的主要是A型流感病毒，特别是对人类健康具有潜在的威胁。因为猪呼吸道上皮同时具有两种类型流感病毒受体，所以人和禽流感病毒都可以感染猪，猪是禽、人、猪流感毒基因重组的“混合器”[3]。

山东是养猪大省，但山东养猪场规模偏小，标准化养猪场相对较少，家庭式小型养猪场和散养户众多，饲养管理水平普遍较低。近年来无论是规模化养猪场还是散养户，猪流感时有发生，给山东养猪业造成一定的损失[4]。本实验利用山东不同地区不同猪群的血样在山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室经血清处理、试剂盒检测、酶标仪读数计算出采集样品的抗体阳性率，最终判断猪场不同猪群感染猪流感的状况，为早日治疗猪流感和预防其暴发流行提供了重要依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料与方法

1.1.1 病料来源

山东规模化养猪场的不同日龄猪群中送检和采集的1573份血样，经5000rmp离心15min，取上血清制备样品，编号待检。

1.1.2 试剂

样品稀释缓冲液、底物液、（10×）浓缩洗涤液、酶标抗体、终止液、阳性对照、阴性对照、蒸馏水等试剂购自美国IDEXX公司。

1.1.3 仪器设备

单道和多道移液枪、各型号的灭菌枪头、配置有650nm滤光片的96孔酶标仪、样品稀释管、加样槽、冰箱、烤箱、高压灭菌锅、恒温孵育箱、一次性口罩手套等。

1.1.4 试验方法

酶联免疫吸附试验

1.1.5 计算结果

2 结果

2.1 ELISA试验检测结果

对1573份规模化猪场血清猪流感抗体水平进行ELISA检测，共检测出阳性样品524份， H1N1亚型阳性率为33.31%。

2.2 H1N1亚型猪流感不同猪群分布情况

通过对不同猪群H1N1亚型猪流感检测结果显示，在所有的524份阳性样品，育肥猪为484份，占阳性样品比例为69%；保育猪为33份，占阳性样品比例为13.3%；哺乳仔猪为3份，占阳性样品比例为1.94%；种公猪为4份， 占阳性样品比例为3.57%。见表1。

表1不同猪群H1N1猪流感抗体ELISA检测结果

2.3 H1N1亚型猪流感不同季节分布情况

由表2可见，H1N1亚型猪流感阳性率随季节变化较大，其中冬季与春季样品阳性率较高，分别为36.44%、34.95%，夏季H1N1亚型猪流感阳性率最低为6.34%。

2.4 H1N1亚型猪流感不同地区分布情况

H1N1亚型猪流感病毒在以下6个地区均有发生，从本次调查结果来看，鲁北和鲁西北地区样品阳性率比较高，分别为43.18%、41.20%；其次为鲁中地区，阳性率为34.90%；鲁西南地区样品阳性率最低，为6.67%。结果见表3。

表2 2012—2013年山东地区规模化猪场H1N1猪流感抗体检测结果季节分布情况

表3 2012—2013年山东地区规模化猪场H1N1猪流感抗体检测结果地区分布情况

3 分析与讨论

SIV自1918年美国首次报道， 至今在猪群中流行已近百年。猪在禽流感病毒“禽-猪-人”种间传播中充当中间宿主而备受关注。从本次调查来看山东规模化猪场SIV抗体阳性率为33.31%，阳性样品不同地区均有分布，说明在山东地区H1N1亚型猪流感病毒还普遍存在，猪场普遍存在SIV感染，且猪流感在山东地区的分布不均，采取科学有效的防控措施对于控制猪流感在山东的扩散具有重要意义。

从不同猪群H1N1猪流感抗体检测结果来看，育肥猪的阳性率最高，其次为保育猪。可以看出日常饲养管理对猪流感的流行有一定影响，高密度、多应激的集约化养猪和恶劣的养殖环境以及不完善的防疫及管理制度可能是致使本病发生。平时加强饲养管理，严格做好消毒免疫工作对猪流感的治疗与防控具有重要意义，制定科学规范的饲养管理模式，从而使猪流感得到有效控制。

本次研究的样品采集时间为2012年2月至2013年5月，从检测结果可以看出猪流感病毒阳性率随季节变化较大， 在天气寒冷或天气变化频繁的季节发病率也相应提高， 在冬春季节采集的样品中，感染猪流感病毒的病猪比较多，阳性率也较高，这说明在季节交替的时候应加强饲养管理和对猪群的监控， 并做好应对恶劣天气的准备。

李海燕等早在1993年就分离到了大量经典型H1N1 SIV。从黑龙江、安徽、山东、河南、江苏、浙江、福建等省猪群中分离到H1N1 及其他亚型SIV；从我国东北、华南、华东、华中、华北地区部分猪群中共分离到H3N2 亚型、H1 亚型及多株其他亚型SIV。所调查猪群体内均存在H1N1流感病毒抗体，证明我国猪群中H1N1亚型猪流感的污染相当普遍[5]。鄢明华等对2002年至2005年天津10个区县44家养猪场进行了Hl和H3亚型猪流感病毒抗体检测，结果75%的被调查猪场呈抗体检测结果阳性[6]。韩庆功，张智勇，乔传玲于2006-2007年采集河南省部分地区猪群139份血清样品进行抗原同步检测得出猪群中HI亚型SIV抗体阳性率为43.17%[7]。

猪流感是世界上最常见的猪传染病之一，传播迅速，常引起急性呼吸道疾病暴发。其典型的临床症状为流涕、咳嗽和呼吸困难，伴有发热、厌食和消瘦等症状。由于猪在新型流感病毒的产生上可扮演“混合器”的角色，既可感染人流感病毒，又可感染禽流感病毒，两种或三种不同的流感病毒感染猪经过基因重排或适应，可能对人类造成较大的危害[8]，因此，进行猪流感的检测，尤其猪流感病毒的分子流行病学调查与研究，无论对动物流感还是人间流感的防控具有重要指导意义。

[1] 万遂如. 猪流感的防控对策[J].养猪，2012，65（6）：113-115.

[2] 李海燕，于康震，辛晓光，等.部分省市猪群猪流感的血清学调查及猪流感病毒的分离与鉴定[J].动物医学进展，2003，24（3）：67-72.

[3] 陈义祥，蒙雪琼.猪流感病毒在世界范围内的流行情况及公共卫生意义[J].微生物学通报，2008，35（4）：0582-0588.

[4] 陈静，马慧玲，田夫林，等.山东省猪流行性感冒血清学调查[J].中国兽医杂志，2009，45（7）：54-55.

[5] 李海燕，李雁冰，于康震，等.猪流感病毒的分离与鉴定[J].中国预防兽医学报，2002，24（1）：12-17.

[6] 鄢明华，李秀丽，王英珍，等.天津地区猪流感血清学调查[J].动物医学进展，2006，27（10）：92-95.

[7] 韩庆功，张智勇，乔传玲.河南省部分地区猪流感血清学调查[J].河南畜牧兽医（综合版），2009，30（7）：23-24.

[8] 顾春英，张宏伟，曹广文. 2009年新型甲型H1N1流感病毒进化过程中猪作为宿主及“混合器”的作用[J].第二军医大学学报，2009，30（6）：605-609.

Serological investigation of swine infuenza H1N1 subtype in large-scale swine farms of Shandong Province

Huang Bingzheng1，2，Sun Wenbo2，3，Yin Bin2，Du Yijun2，3，Li Jun2，3，Wu Jiaqiang2，3，Yu Jiang2，Zhou Shun1
（1.College Of Animal Science And Technology of Qingdao Agricultural University，Qingdao 266109；2.Shandong Key Laboratory of Animal Disease Control and Breeding，Jinan 250100；3.Institute of Animal Science and Veterinary Medicine，Shandong Academy of Agricultural Sciences，Jinan 250100）

During February，2012 to May，2013， 1573 serum samples from different swine herds in Shandong province were tested for swine H1N1 subtype antibodies by ELISA. resulting in 524 positive samples with a positive rate of 33.31%.This research presented signifcant information of swine H1N1 subtype epidemiology in large-scale swine farms and the surrounding areas in Shandong province，and provided practical guidance for the prevention and treatment of swine infuenza as well.

Swine infuenza；H1N1subtype；Serological investigation

S858.28

：B

：1005-944X（2014）06-0055-04

国家自然科学基金31200123；山东省博士基金Bs 2013sw022；山东省现代农业产业技术体系（SDAIT-06-011-07）

周 顺