B细胞血液肿瘤患者外周血CD40、CD154的表达及意义

谢治军 薛重重 杨丽萍 黄继贤 韦 湘 廖建军

粤北人民医院血液内科，广东韶关 512026

B细胞血液肿瘤患者外周血CD40、CD154的表达及意义

谢治军 薛重重 杨丽萍 黄继贤 韦 湘 廖建军

粤北人民医院血液内科，广东韶关 512026

目的分析B细胞血液肿瘤外周血淋巴细胞CD40、CD154表达率的特点。方法28例B细胞血液肿瘤患者分为多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma，MM）17例，B细胞性非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）11例；选取30例健康体检人员作为对照组。应用流式细胞术检测B细胞血液肿瘤患者外周血淋巴细胞（Peripheral Blood Lymphocytes，PBL）CD40、CD154的表达率。结果①MM组：CD40表达率为（17.50±8.32）%，CD154表达率为（1.00±3.26）%；B-NHL组：CD40表达率为（29.84±15.61）%，CD154表达率为（2.01±0.59）%；对照组：CD40表达率为（6.48±3.34）%，CD154表达率为（3.25±1.04）%。②化疗后B-NHL患者外周血淋巴细胞CD40表达低于化疗前,P＜0.05。③MM患者III期组PBLCD40表达率高于I～II期组,P＜0.05。B-NHL患者PBL CD154表达率III～IV期低于I～II期组,P＜0.05。结论①MM患者、B-NHL患者均存在PBL CD40高表达，B-NHL患者同时存在PBL CD154低表达；CD40高表达提示MM预后差，CD154低表达与B-NHL预后有关。②化疗降低了B-NHL患者PBL CD40表达率。为临床上进行B细胞血液肿瘤诊断与治疗提供一定的依据。

B细胞；血液肿瘤；CD40；CD154

大部分的 B淋巴细胞血液肿瘤表达 CD40分子，CD40、 CD154与肿瘤细胞生物学意义非常复杂，国内外有关其与实体肿瘤和B细胞血液肿瘤的表达的研究众多，但结果不尽相同[1-2]。

鉴于上述情况该课题将就这一问题进行探讨，初步了解CD40、CD154与B细胞血液肿瘤发生、发展的关系，为临床B细胞血液肿瘤患者治疗时机、方法及预后评估依据，以2011年7月—2013年3月的28例B淋巴血液肿瘤患者为研究对象，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

粤北人民医院血液内科收治的28例B淋巴细胞血液肿瘤患者，男18例，女10例，年龄39～81岁。28例B淋巴细胞血液肿瘤患者张之南主编《血液病诊断和疗效标准》[3]分两组：MM组17例，其中男11例，女6例，按照Durie和Salmon分期标准分为I～II期8例，III期9例；B-NHL组11例，其中男7例，女4例，按照Ann/Arbor制定的分期标准，分为 I～II期4例，III～IV期 7例。 对照组为该院门诊体检健康人员，男19例，女11例，年龄25～67岁。

1.2 方法

1.2.1 主要仪器、试剂 FACS-Calibuer流式细胞仪、红细胞裂解液（美国Becton-Dickinson(BD)公司）；ROCHE 7600全自动生化分析仪（美国罗氏公司）；流式细胞荧光标记抗体CD45-Per-CP、CD40-PE、CD145-PE，流式细胞荧光标记抗体阴性对照为IgG1-PE和IgG1-FITC（美国Beckman公司）。

1.2.2 CD40、CD145检测 空腹8 h后外周静脉采血 2 mL入EDTA抗凝管 （安徽赫尔生物医学检验科技有限公司），混匀，EPICS-XL型流式细胞仪 （Beckman-Coulter公司）进行CD40、CD154荧光抗体标记检测。检测鼠Ig G1阴性对照，并以阴性对照为对照标准检测CD40、CD154的百分比，分析数据并打印出二维散点图，以荧光抗体染色阳性的细胞百分数记录结果。

1.3 统计方法

使用SPSS17.0软件对数据进行统计与分析，计量资料用均数±标准差()表示，组间比较采用独立样本t检验，计数资料比较采用配对t检验。

2 结果

2.1 B细胞血液肿瘤患者PBL CD40、CD154表达情况

MM组PBL CD40表达水平明显高于对照组 （t=3.018,P＜0.01），但其CD145表达水平与对照组比较差异无统计学意义（t= 0.803,P＞0.05）；B-NHL组PBL CD40表达水平明显高于对照组（t=7.882,P＜0.01），其CD145表达水平低于对照组 （t=2.401,P＜0.05）。见表1。

表1 CD40、CD154在B细胞血液肿瘤组和正常对照组的表达水平[(),%]

表1 CD40、CD154在B细胞血液肿瘤组和正常对照组的表达水平[(),%]

组别CD40CD145 MM组（n=17）B-NHL组（n=11）对照组（n=30）17.50±8.31 29.84±15.60 6.48±3.34 3.00±1.00 2.41±0.58 3.25±1.04

2.2 B细胞血液肿瘤患者化疗前后PBL CD40、CD154表达水平的变化

MM组有7例患者，B-NHL组有5例患者进行化疗，化疗前后仅有B-NHL患者PBL CD40表达差异有统计学意义（t=2.997, P＜0.05），化疗后表达水平低于化疗前，其余表达水平化疗前后无明显变化。见表2。

表2 化疗前后外周血淋巴细胞CD40、CD154表达水平()

表2 化疗前后外周血淋巴细胞CD40、CD154表达水平()

项目CD40 CD154 MM组 化疗前（n=7）化疗后（n=7）B-NHL组化疗前（n=5）化疗后（n=5）18.42±10.54 13.65±5.90 37.35±11.72 19.74±5.94 2.72±1.90 2.62±2.01 1.21±2.05 2.33±2.01

2.3 MM和B-NHL患者PBL CD40、CD154表达水平在不同疾病分期的比较

MM患者PBL CD40表达率在I～II期组和III期组间差异有统计学意义，见表3。B-NHL患者PBL CD154表达率在I～II期组、III～IV期组比较差异有统计学意义，P＜0.05，见表4。

表3 MM患者各分期PBLCD40、CD154表达水平()

表3 MM患者各分期PBLCD40、CD154表达水平()

注：△表示两组间比较差异有统计学意义，P＜0.05。

组别（MM）CD40CD154 I～II期组（n=8）III期组（n=9）tP 16.15±5.26 28.45±10.10 2.612 0.045△2.97±2.91 1.67±2.06 1.952 0.163

表4 B-NHL各分期PBL CD40、CD154表达水平()

表4 B-NHL各分期PBL CD40、CD154表达水平()

注：△表示两组间比较差异有统计学意义，P＜0.05。

组别（B-NHL）CD40CD154 I～II期组（n=4）III～IV期组（n=7）tP 21.77±7.23 34.46±17.64 1.671 0.131 2.54±1.68 1.21±0.17 2.563 0.044△

3 讨论

国内外关于CD40及CD154在恶性肿瘤患者的临床研究已有报道，有文献[4-7]报告在卵巢癌、小细胞肺癌、胃癌和乳腺癌等多种肿瘤患者的外周血和肿瘤局部CD40表达率增加。该研究中B淋巴细胞血液肿瘤患者PBL CD40表达率高于健康人群，这与国内外研究数据基本一致[8-10]，另外，该研究还提示B-NHL患者同时存在PBL CD154低表达。

该研究中化疗后B-NHL患者PBL CD40表达率低于化疗后，B-NHL患者经化疗后PBL淋巴细胞亚群中B淋巴细胞百分比下降，B-NHL组的PBL CD40表达率与B细胞百分比存在正相关性，故其化疗后PBLCD40表达率下降，但MM患者PBL CD40化疗后表达率偏低，但与化疗前差异无统计学意义，这可能与MM患者所采用的化疗强度较低，而化疗后PBL淋巴细胞亚群中B淋巴细胞百分比下降不明显有关。

该研究提示MM预后与临床分期密切相关，晚期的MM患者肿瘤负荷较高，外周血所含的骨髓瘤细胞较高，故CD40表达较高。B-NHL分期与CD154低表达有关，CD40-CD154结合可激活体内特异性免疫反应系统，参与机体的体液免疫和细胞免疫反应，而在 CD154与 CD40结合后，CD154的表达率升高，CD154联合IL-4、CpG可以高效促BCP-ALL细胞表面免疫分子的表达，从而有效提高机体T淋巴细胞细胞毒性效应从而产生抗肿瘤效应[11-12]。如上所述，CD154的低表达反应了CD154与CD40结合率较低，CD154与CD40结合率较低，导致机体的免疫缺陷，该研究中III～IV期组的B-ALL患者CD154表达率明显低于I～II期组。

综上所述，CD40高表达与MM预后有关，CD154低表达与B-NHL预后有关，CD40、CD154表达水平可以作为MM、B-NHL这两种B细胞血液肿瘤预后评估的有效指标之一。增加膜CD154效应的相关抗体有望在B细胞血液肿瘤治疗中取得成效，这为临床B细胞血液肿瘤患者临床综合治疗提供了参考。

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Expression and Significance of CD40,CD154 in Patients with B-cell Hematologic Malignancies

XIE Zhijun XUE Zhongzhong YANG Liping HUANG Jixian WEI Xiang LIAO Jianjun
Blood Internal Medicine,Yuebei People's Hospital,Shaoguan,Guangdong Province,512026,China

ObjectiveTo analyze the characteristics of expression rate of peripheral blood lymphocytes(PBL)CD40 and CD154 in patients with B-cell hematologic malignancies.Methods28 cases of patients with B-cell hematologic malignancies were divided into 17 cases with multiple myelom(MM)and 11 cases with B-cell non-Hodgkin's lymphoma(B-NHL);30 healthy people underwent healthy examination were selected as the control group.Flow cytometry was used to detect the expression rate of PBL CD40 and CD154 of patients with B-cell hematologic malignancies.Results1.MM group:the expression rate of CD40 was(17.50 ±8.32)%,and that of CD154 was(1.00±3.26)%;B-NHL group:the expression rate of CD40 was(29.84±15.61)%,and that of CD154 was (2.01±0.59)%;Control group:the expression rate of CD40 was (6.48±3.34)%,and that of CD154 was (3.25± 1.04)%.2.The expression rate of PBL CD40 of B-NHL patients after chemotherapy was lower than that before chemotherapy,P＜0.05.3.PBL CD40 expression rate of stage III subgroup in MM group was higher than that of stage I and stage II subgroups,P＜0.05.PBL CD154 expression rate of stage III and IV subgroups in B-NHL group was lower than that of stage I and II subgroup, P＜0.05.Conclusion1.Patients with MM and patients with B-NHL had high expression of PBL CD40,and B-NHL patients also had low expression of PBL CD154;high expression of CD40 was associated with poor prognosis in patients with MM;low expression of CD154 was associated with poor prognosis in patients with B-NHL.2.Chemotherapy reduced the expression rate of PBL CD40 in patients with B-NHL.It provides a basis for the diagnosis and treatment of B-cell hematologic malignancies.

B-cell;Hematologic malignancies;CD40;CD154

R732

A

1674-0742（2014）08（b）－0009-03

2014-05-06）

谢治军（1981-），男，硕士，主治医师，研究方向：血液病。