恩诺沙星对鸡大肠杆菌病临床疗效试验

江俊 胡强 宋炎鑫

（镇江威特药业有限责任公司，江苏 镇江 212009）

恩诺沙星对鸡大肠杆菌病临床疗效试验

江俊 胡强 宋炎鑫

（镇江威特药业有限责任公司，江苏 镇江 212009）

为验证A、B、C、D四个不同配比的10%长效恩诺沙星注射液对鸡大肠杆菌病的临床疗效，选用人工诱发大肠杆菌病的鸡为试验对象，设计14日龄三黄鸡雏鸡动物实验，经颈部皮下注射不同配比的10%长效恩诺沙星注射液，10%长效恩诺沙星注射液A、B、C、D四个配比符合注射液要求，通过实验室和临床疗效两方面数据综合筛选出疗效最佳的10%长效恩诺沙星注射液。结果同时显示，实验室10%长效恩诺沙星注射液配比C药动学参数[消除半衰期(9.821±2.256)h、最大浓度(3.032±0.152)μg/mL、药时曲线下面积(19.865±1.876)(mg·h)/L]比其他3组10%长效恩诺沙星注射液配比A、B、D的药动学参数明显高，通过指标对比，说明配比C优越；临床10%长效恩诺沙星注射液C组的治愈率、存活率（90.0、96.8%），均极显著高于其他3组（P<0.01），证明了配比C对致病菌有明显的治疗作用，适合临床需求。

恩诺沙星；注射液；大肠杆菌；鸡

恩诺沙星(enrofloxaein)是动物专用的氟喹诺酮类抗菌药，因抗菌谱广、杀菌作用强、吸收快、体内分布广，在治疗鸡的细菌性疾病[1]与支原体病[2]方面应用广泛。为客观、科学地评价恩诺沙星注射液对鸡大肠杆菌病的临床疗效，通过人工诱发鸡大肠杆菌病，颈部皮下注射给药方式进行疗效试验，为临床提供科学依据。

1 材料与方法

1.1试验用动物

选取三黄鸡雏鸡120只，公母兼有，未经大肠杆菌菌苗免疫，饲养于专门的试验区，试验前按常规饲养，自由饮水和采食，饲料为不添加任何药物的全价日粮，从1日龄开始适应性喂养14d后进行试验，随机分为①、②、③、④组，每组30只，分组情况见表1。1.2试验主要药物药品及试剂

表1 试验分组及处理kg

四种不同10%长效恩诺沙星注射液；正己烷、羧甲基纤维素钠、吡咯烷酮粉、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、0.1mol/L氢氧化钠溶液、0.05mol/L氢氧化钠溶液、pH试纸。

1.3主要试验仪器

TGL-16B离心机；JSWII恒温水浴箱；高效液相色谱仪；Shimadu LC-2010C HT；C-212-103光学显微镜；PHS-25B数字酸度仪。

1.410%长效恩诺沙星注射液制备

要用到恩诺沙星原料10%、抗氧化剂0.2%、络合剂3.2%、助溶剂4%、缓释剂2%、稳定剂10%、其余注射用水等，按照四种不同比例进行配合备用。

1.5液相色谱仪色谱条件

谱条件：不锈钢柱，柱温25℃，检测波长275nm，流速1mL/min，检测范围0.05～20μg/mL,进样量20 μL。在选定色谱条件和参数下，得到相关标准曲线的回归方程y=0.25+120.1x，相关系数r=0.9997。用其测得的峰面积在标准曲线上进行多点外标法校准，得其血浆长效恩诺沙星的浓度。

1.6数据处理

试验采用MCPKP药代学数据处理程序，自由选择最佳模型，符合一级吸收二室开放模型，将血浆长效恩诺沙星的浓度经过MCPKP药代学数据处理，计算出药动力学参数（如表2）。

1.7鸡的致病性试验方法

1.7.1菌株的选择。选择的是江苏地区鸡大肠杆菌菌株，江苏地区大肠杆菌血清型以O78、O127、O18、O2等血清型为主[4，5]，由合作单位提供具有代表性的血清型O78作为这次试验的菌株（如图1）。

表2 药敏试验判定标准mm

图1 大肠杆菌形态特征

图2 普通营养琼脂培养基

1.7.2检验大肠杆菌菌株的敏感性。使用前，保存的强毒菌种先接种普通营养琼脂平板[3]，培养24h时，挑选典型菌落于普通肉汤中，经37℃培养18～24h后取出。肉汤培养物接种鸡经复壮后，从病死鸡肝脏分离大肠杆菌并接种营养琼脂平板培养（如图2），根据抑菌圈直径的大小不同区分敏感性的高低，按美国

NCCLS判定标准划分方式分为极敏感、高度敏感、中度敏感、低度敏感和不敏感（如表2）。经药敏试验检验抑菌直径为16～18mm，故所选大肠杆菌O78血清型标准菌株对恩诺沙星敏感。

1.7.3临床试验接种剂量。将大肠杆菌O78血清型标准菌株经口接种14日龄健康雏鸡，每只0.2mL大肠杆菌悬液，约含1.2×108个菌CFU[6]。各组隔离分开饲养，观察记录其发病、死亡和剖检病变（如图3、图4）。

图3 心包炎

图4 肝周炎

1.7.4试验动物给药。表现出临床症状时（精神沉郁、食欲减退、下痢等），用10%长效恩诺沙星进行治疗，按注射用量0.5mL/kg，直至全愈。

1.8实验室数据处理（见表3）

表3 动力学参数

2 结果分析

2.1致病性

在试验期间，根据接种鸡死亡或产生严重病变（心包炎、肝周炎、气囊炎等）确定大肠杆菌菌株的致病性（如图3、图4）。

2.2动力学参数

由表3可以看出，由配方C制成的10%长效恩诺沙星注射液在鸡体内的药代动力学参数为：消除半衰期(9.821±2.256)h、最大浓度(3.032±0.152)μg/ mL、药时曲线下面积(19.865±1.876)(mg·h)/L，主要指标都比其他配比优越，而且达到血药峰浓度的时间比其他配比短，说明该配方可以在短时间达到血药浓度，且可以维持较长时间的有效血药浓度。

2.3治愈率

在试验期间，鸡经给药后，精神状态、食欲等恢复正常，均属治愈。根据治愈鸡数占整个试验鸡数

给的比率计算治愈率。

2.4有效率

经用药后，治愈的和没有死亡但有临床症状表现的鸡均为“有效”；试验结束时每组存活的鸡数占试验鸡数的比率为有效率（见表4）。

表4 各试验组疗效效果%

2.5各组的治疗效果

比较配比C长效恩诺沙星注射液的有效率和治愈率（90.0%，96.7%）都比其他3组的数据高，见表4。

经统计表明:C配比的长效恩诺沙星注射液治疗率、有效率（90.0%，96.7%），均极显著高于其他3组①、②、④治愈率、存活率(P<0.01)。

3 讨论

本试验中配比C10%长效恩诺沙星注射液药动学数据消除半衰期(9.821±2.256)h、最大浓度(3.032± 0.152)μg/mL、药时曲线下面积(19.865±1.876)(mg·h)/ L，说明血药峰浓度时间比其他配比短，因而长效恩诺沙星注射液消除比较缓慢，在体内存留时间较长，说明药物吸收缓慢，从而导致消除半衰期延长，使恩诺沙星注射液起长效的作用，从而具有明显的抑菌和杀菌效果。此外，配比C临床治愈率和有效率高（90.0%、96.7%），因此配比C10%的恩诺沙星注射液是适合临床需求的产品。

[1]方炳虎，曾振灵，冯淇辉，等.恩诺沙星对鸡大肠杆菌病及葡萄球菌病的药效研究[J].中国兽医学报，1997，17(2):157～160.

[2]Barbour EK，Hamadeh S，Talhouk R，et a1.Evaluation of anenrofloxacin treatment program against Mycoplasmagallisepticurn infection in broilers[J].Preventive Vet Med，1998.35(2):91～99.

[3]俞树荣.微生物学和微生物学检验[M].北京:人民卫生出版社，2002:169～175.

[4]高崧，吴长新，文其乙，等.不同地区101个禽源性大肠杆菌分离株的致病性试验[J].中国预防兽医学报，1999.21（1）：13～16.

[5]挥时峰，郑明球，潘震寰.鸡源性大肠杆菌的分离、鉴定及特性[J].西南农业学报，1998.11(1):90～96.

[6]廖延雄.兽医微生物实验诊断手册[M].北京:中国农业大学出版社，1977.

1004-2342（2014）03-0011-03

S859.79+4

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2014-03-22）