抗-HCV阳性反应血清中HCV核酸检测结果分析

臧希卉

吉林省疾病控制中心消毒所，吉林长春 130000

为了防止丙型肝炎的交叉感染发生，往往在对抗-HCV 指标进行筛查的时候，都会采用灵敏度较高的试剂来完成筛选。目前，为了快速地缩短运用抗-HCV 进行检验的“窗口期”，很多机构已将HCV 核酸的检测方法使用于对抗-HCV 的筛选[1]。为了探讨与分析抗-HCV 阳性反应中，受检者血清中的HCV 核酸的检测状况，本研究选取部分受检者抗-HCV 阳性的血清，进行HCV 核酸指标的相关检测和研究，取得了较好的效果，现进行如下报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集本所从2011年6月—2013年5月期间筛选出血清抗-HCV 阳性反应标本一共152 份，其中，同时使用两种ELISA 的试剂而进行检测呈阳性反应的血清一共50 份，使用单种试剂而通过检测呈阳性反应的血清一共102 份，主要包括使用试剂2 检测出的阳性(含使用试剂1 检测出阴性)标本共有59 份；使用试剂1 来检测出的阳性(包含使用试剂2 检测出阴性)标本共有43 份。

1.2 检测方法

使用HCV 核酸扩增酶免检测试剂盒（由华美生物制造）、抗-HCV ELISA 检测试剂和基因扩增仪以及高速冷冻离心机等。抗HCV 阳性的标本采用受检者的单份血清进行HCV 核酸扩增酶免的检测，然后依照说明书来进行操作，首先在采集血液以后，于6 h 内进行血清的分离，放置于零下70℃的冰箱内进行冷冻保存，在实验之前解冻后，取每份样品100μL 的放到样品管内，再用酶免样品处理液和乙醇（浓度为75%）来处理血清样品，弃上清以后快速进行烘干；然后将1 其在样品管内冷却，并加入反转录酶与反转录混合物以后进行孵育，另外加入尿嘧啶DNA 糖基化酶和PCR扩增反应的混合物，迅速在扩增仪内进行扩增处理[2]；之后把扩增的产物转移到捕捉板内，同时加入杂交反应液后，在温度是37℃的环境中，进行孵育、洗板并显色，最后再用酶标仪来确认检测的结果，然后分析。

1.3 统计学原理

本文研究所得的数据全部采用软件SPSS 18.0 进行统计学进行处理，两组之间的计数资料对比采用χ2的检验，全部计量资料用均数加减标准差进行表示，以P＜0.05，表明差异具有统计学意义。

2 结果

通过本次试验中收集的50 份通过2 种ELISA 试剂来检测抗-HCV 呈阳性反应血清。其中，共有7 份抗-HCA 呈阳性受检者，运用2 种试剂进行检测都显示出强阳性(S/CO 大于10)，其HCV核酸检测也全部显示为阳性（比例为100%），其它43 份抗-HCA阳性受检者，经检测均显示为较弱的阳性(S/CO 小于5)，其中HCV 核酸检测显示阳性的共20 份（占46.5%）。

另外，通过运用1 种试剂来检测抗-HCV 阳性血清，都显示出较弱阳性(S/CO 小于5)，该HCV 核酸检测的阳性率也比较低（11例，占10.8%），说明抗-HCV 阳性反应血清中的HCV 核酸的检出率和S/ CO 数值的高低存在相关性。同时，运用2 种试剂检测抗-HCV 阳性率要比运用1 种试剂进行检测抗HCV 阳性率，二者对比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同试剂抗-HCA 阳性血清核酸扩增酶免检结果对比

3 讨论

本次试验中收集的50 份抗HCA 阳性中，有7 份抗HCA 呈阳性受检者，运用2 种试剂进行检测都显示出强阳性(S/CO 大于10)，其HCV 核酸检测也全部显示为阳性（比例为100%），因此可以证明，若抗HCV 呈阳性并且HCV 核酸检测也呈现阳性，则可以确定已经是HCV 感染；但是，如果抗-HCV 呈现阳性，为何HCV 核酸检测结果却呈现阴性？ 究其原因则值得进行深入的研究和分析。

许志远等[3]研究证明，即使血清当中仅存在有1 个病毒核酸分子，那么经过PCR 扩增以后也可以被检测出来，但是在实际的操作中，由于检测出血清中的病毒核酸如果含量真是太少，常常会导致在提取核酸时无法实现。同样，对于PCR 试剂的检测灵敏度和样本及扩增体系中，均很有可能存在着某类抑制病毒核酸扩增效果的影响因素等，从而影响到病毒核酸的总检出率与准确性[4]。在本组检测中，一部分抗HCV 呈弱阳性，反应血清的HCV 核酸在进行检测时却呈阴性，43 份抗HCA 阳性受检者经检测均显示为较弱的阳性(S/CO 小于5)，其中HCV 核酸检测显示阳性的共20 份（占46.5%）。其余为阴性，这些极有可能和上述相关因素密切相关。

林洪铿等[5]有关研究文献报道，只有55%的抗HCV 阳性者可以检测出HCV RNA，此时病毒极有可能会自发性的丢失。通过对本组资料进行分析表明，仍然有抗HCA 受检者，在通过使用两种试剂情况下，进行的抗-HCV 检测呈现阳性，但实在通过HCV 核酸检测时却呈现阴性，其中很大的原因的，就是抗HCV 检验筛查结果属于假阳性，而在现实中，受检者根本并没有被感染HCV；另外的原因则可能是：HCV 的病毒血症已经完全消退或者是病毒的基因产生了变异等。另据闵志军等[6]有关文献表明，抗-HCV呈阳性的受检者，在通过HCV 的核酸检测虽然呈现阴性，但是仍然会使他人受到交叉感染。

以上研究表明，通过针对HCV 的血液指标筛查，不应当仅仅参照HCV 核酸而进行检测，而应当取代为抗-HCV 的指标检测，而且两者必须密切结合，这样才能有效地缩短患者HCV 感染的“窗口期”，以此来保证供血和受血者的安全与健康。

[1]欧阳玲,李雪丽,黄呈辉,等.对HBsag 和抗-HCV ELISA 筛查阳性献血者进行确认试验分析[J].中国现代医学杂志，20119(12)：177-178.

[2]任芙蓉，龚晓燕，李晶晶，等.献血员丙型肝炎病毒抗体酶免疫法检测试剂的测定值与其真阳性的相关性[J].中华肝脏病杂志，2012,13(7)：255.

[3]许志远,李冬妹,冷婵,等.对国产及进口抗-HCV 酶联免疫试剂实验室检测效果的探讨[J].中国输血杂志，2010,16(2)：104.

[4]Operska EA,Mosley JW.HCV viral load in anti-HCV-positive donors and terout come in their recipients[J].Transfasion，2011,18(3)：750-752.

[5]林洪铿,江伟梅,周晓真,等.献血者ELISA 抗-HCV 筛查反应性强度与RIBA 确证阳性的相关性研究[J].中国输血杂志，2010,20(8)：83-85.

[6]闵志军,张力超,张建伟,等.试剂盒平衡时间对抗-HCV 检测结果的影响因素分析[J].临床血液学杂志：输血与检验版，2010,11(6)：128.