臭菜抗氧化活性研究

杨新周，杨子仙，郝志云

（德宏师范高等专科学校理工系，云南德宏 678400）

臭菜抗氧化活性研究

杨新周，杨子仙，郝志云

（德宏师范高等专科学校理工系，云南德宏 678400）

为了研究臭菜提取物体外抗氧化活性，考察其对DPPH自由基和羟自由基活性的清除能力，并且与多种抗氧化剂进行对照研究。通过实验得出，臭菜提取物清除DPPH自由基活性的能力优于对香豆酸。结果表明，臭菜提取物具有很好的清除DPPH自由基和羟自由基活性的能力，是一种良好的天然抗氧化剂。

臭菜；DPPH自由基；羟自由基；抗氧化活性

羽叶金合欢［Acacia pennata（Linn.）Wind］又名臭菜，傣族称为“帕哈”，隶属于豆科（Leguminosae）金合欢属（Acacia Miller）。分布于广东、福建、广西及印度东部、中南半岛、非洲和云南的西双版纳、思茅、德宏等地区。羽叶金合欢是种食疗皆宜的植物，其根、树皮及嫩叶均具有药用价值，茎可作木材［1，2］。另外臭菜营养价值丰富，具有很高的经济价值，且价格昂贵，是西双版纳、德宏、文山等地区最具特色的野生木本蔬菜［3］。目前对臭菜的研究主要包括人工种植［4］、民族植物学、营养成分分析［5］、其遗传多样性［1，3］等方面，而对臭菜的抗氧化活性研究鲜见报道。本文采用传统方法-分光光度法进行定量分析［6］。通过对臭菜乙醇提取物进行清除DPPH自由基和羟自由基（·OH）的能力测定，希望能为臭菜的综合利用提供理论依据。

1 实验部分

1．1 主要仪器和试剂

V-1100型可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司），超声波（SK2200H），电子天平（AR224CN）；数字显示恒温水浴锅（HH-S24S，上海君竺仪器制造有限公司）；电热真空干燥箱（ZK 82J型）；旋转蒸发仪（EYELA N-1100）。

DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼），质量分数＞99.0%，国药集团化学试剂有限公司；臭菜（嫩茎叶，采于云南德宏州，烘干，粉碎，过筛），槲皮素、山奈酚、咖啡酸、芦丁、没食子酸、对香豆酸（购自国药集团浙江华东医药有限公司，质量分数＞98%）；番红花红、EDTA-Fe2＋（现配现用）、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、双氧水（现配现用）、乙醇等试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。

1．2 实验内容及方法

1．2．1 DPPH储备液的制备

准确称取10mgDPPH，用无水乙醇溶解定容至100 mL容量瓶中，得质量浓度为0.1mg／mL的储备溶液。然后稀释成质量浓度为0.024mg／mL的标准溶液。

1.2.2 臭菜提取物的制备

准确称取2.000 0 g样品于100mL的锥形瓶中，加入20 mL的乙醇溶液，封口，超声提取3次，每次45min，合并3次滤液于旋转蒸发仪中浓缩，转移到25mL的容量瓶中，乙醇定容，备用。

1．2．3 清除DPPH自由基能力的测定

准确移取4.5 mL DPPH标准溶液液，依次加入一定体积的提取物稀释液于10 mL比色管中，定容至5m L，置于暗处30 min，在波长517 nm下测定空白DPPH溶液的吸光度值（A空白）和加入提取物后DPPH溶液的吸光度值（A样品），按下式计算自由基清除率［6］。

1．2．4 羟自由基（·OH）的清除活性测定

1）调零管：准确移取1.00mLPBS于10m L比色管中，加入3.5 mL的水，37℃水浴中恒温30 min室温下冷却，调零。

2）对照组：依次加入1.00 mL PBS、1.50 mL 40 μg／mL番红花红、1.00mL EDTA-Fe（Ⅱ）、1.00mL蒸馏水于10mL比色管中，37℃水浴中恒温30min室温下冷却，测定吸光度A（λ＝520 nm），V总＝4.50mL。

3）空白组：依次加入1.00mLPBS、1.50m L 40 μg／mL番红花红、1.00mLEDTA-Fe（Ⅱ）、1.00mL 3%H2O2于10 mL比色管中，37℃水浴中恒温30 min室温下冷却，测定吸光度A0（λ＝520 nm），V总＝4.50mL。

4）样品组：依次加入1.00mLPBS、1.50mL40 μg／mL番红花红、1.00m LEDTA-Fe（Ⅱ）、10.0μL不同浓度的样品溶液，1.00mL 3%H2O2于10mL比色管中，37℃水浴中恒温30 min室温下冷却，测定吸光度As（λ＝520 nm），V总＝4.50mL［7］。

清除率＝［As－A0］／［A－A0］×100%

2 结果与讨论

2．1 臭菜清除DPPH自由基活性能力

按照1.2.3的方法测定臭菜提取物清除DPPH自由基活性的能力，以清除率对总固形物浓度作图，实验结果见图1。

图1 臭菜提取物对DPPH自由基的清除曲线Figure 1 DPPH radical scavenging curve of Acacia pennata extracts

从图1中看出，清除率随着样品质量浓度的增加而增大，当样品质量浓度达到一定量时，清除率增加缓慢。从图1看出当臭菜总固形物质量浓度为0.08～1.6mg／mL之间，DPPH清除率与浓度呈线性关系，线性方程为y＝40.407x＋15.152，R2＝0.9933，计算出总固形物IC50＝0.86 mg／mL。实验中同样的方法，测定对香豆酸、没食子酸、香草酸、咖啡酸、芦丁对DPPH自由基的清除率，计算出IC50。各抗氧化剂质量浓度与清除率之间线性方程分别表示如下，咖啡酸：y＝15246x－1.0143，R2＝0.9933，IC50＝0.0033 mg／mL；没食子酸：y＝49340x＋4.5849，R2＝0.9775，IC50＝0.000 92mg／mL；香草酸：y＝74.736x＋9.116，R2＝0.9282，IC50＝0.5471 mg／mL；对香豆酸：y＝17.437x＋10.388，R2＝0.9565，IC50＝2.27 mg／mL。芦丁：y＝8238x＋14.592，R2＝0.9457，IC50＝0.0043 mg／mL；自由基清除作用以IC50值来计算，IC50值越小，表示抗氧化活性越好，芦丁、咖啡酸、臭菜提取物、没食子酸、香草酸、对香豆酸清除DPPH自由基能力顺序为对香豆酸＜臭菜提取物＜香草酸＜芦丁＜咖啡酸＜没食子酸。

2.2臭菜清除羟自由基活性能力

按照1.2.4的方法测定了臭菜提取物清除羟自由基活性的能力，以清除率对总固形物浓度作图，实验结果见图2。

图2 臭菜提取物对羟由基的清除曲线Figure 2 Hydroxyl radical scavenging curve of Acacia pennata extracts

由图2可知，清除率随着样品浓度的增加而增大，根据所测定清除率及臭菜提取物总固形物浓度的关系，得出清除率及臭菜提取物浓度的线性方程为y＝126.11x＋17.353，R2＝0.951 8，IC50＝0.258 9mg／mL。实验中同样的方法，测定山奈酚、槲皮素、咖啡酸、芦丁对羟自由基活性的清除率，计算出IC50。各抗氧化剂浓度与清除率之间线性方程分别表示如下，槲皮素：y＝6694.5x＋31.077，R2＝0.994 7，IC50＝0.003mg／mL；芦丁：y＝1996.5x＋3.0273，R2＝0.995，IC50＝0.023mg／mL；咖啡酸：y＝1252.3x＋27.674，R2＝0.990 6，IC50＝0.018mg／mL；山奈酚：y＝7735.3x＋7.982，R2＝0.999 8，IC50＝0.005mg／mL。从实验结果可知，臭菜提取物、山奈酚、芦丁、槲皮素、咖啡酸清除羟自由基活性能力顺序为：臭菜提取物＜芦丁＜咖啡酸＜山奈酚＜槲皮素。

3 结论

臭菜提取物对DPPH自由基和·OH具有一定的清除作用，且随着臭菜提取物浓度的提高，其清除能力也相应地增强。通过试验得出，臭菜乙醇提取物清除DPPH自由基能力优于对香豆酸。这一结果为开发抗氧化剂提供了一个新的来源，为评价臭菜的价值提供一个依据。

［1］ 高洁，李巧明.羽叶金合欢的DNA提取和SSR引物筛选［J］.云南植物研究，2008，30（1）：64-68.

［2］ 施洪，李茂琳.充分发挥资源优势打造芒市云药之乡［J］.德宏师范高等专科学校学报，2012，22（2）：59-62.

［3］ 高洁，李巧明.云南西双版纳地区羽叶金合欢的遗传多样性研究［J］.生物多样性2008，16（3）：271-278.

［4］ 潘奇.臭菜人工栽培技术［J］.云南农业，2004（11）：7.

［5］ 许又凯，刘宏茂，刀祥生，等.臭菜营养成分分析及作为特色蔬菜的评价［J］.广西植物，2004，24（1）：12-16.

［6］ 穆怀雪，杨新周，姚福泉，等.不同提取方法对五味子清除DPPH自由基作用的影响研究［J］.时珍国医国药，2012，23（6）：1454-1455.

［7］ 刘琼，李乔丽，放茂良，等.傣族药竹叶兰不同极性部位提取物的抗氧化性研究［J］.中国农学通报，2011，27（14）：77-81.

Study on Antioxidative Activities of Acacia Pennata

YANG X in-zhou，YANG Zi-xian，HAO Zhi-yun

（Dehong Teachers college，Science and Engineering Department，Dehong 678400，China）

The antioxidant activities in vitro of extract from Acacia pennata were investigated，its scavenging activities for DPPH free radical（DPPH·）and hydroxyl radical（·OH）was studied，and also comparatively with othermultip le antioxidants wasmade.The results show that the order of DPPH free radical scavenging activities is Acacia pennata，p－Coumaric acid.The results show thatextracts of Acacia pennata have antioxidant activities，Acacia pennata is a good natural antioxidant.

Acacia pennata；antioxidant activities；DPPH free radical；hydroxyl radical

Q946

： A

： 1004-275X（2014）01-0015-03

12.3969／j.issn.1004-275X.2014.01.004

收稿：2013-07-10

杨新周（1986-），男，助教，硕士研究生，研究方向：分析化学。