粤西地区某规模化猪场紧急接种猪繁殖与呼吸综合征基因缺失苗的抗体监测

台凡力，陈民佣，蒋福松，黄如渠，邓东养

（广东省湛江农垦畜牧有限公司，广东 湛江 524022）

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪的一种繁殖障碍和呼吸道炎症的传染病[1]。其临床特征为厌食、发热、母猪繁殖障碍，怀孕期发生大批流产，产死胎和木乃伊胎；仔猪与育成猪发生严重呼吸道疾患及高死亡率为特征的一种传染病。

广东湛江地区某规模化猪场，在2014年1月份的血清学常规检测中，发现猪繁殖与呼吸综合征抗体水平明显波动，怀疑有野毒在场内活动，马上采购一批猪繁殖与呼吸综合征基因缺失苗做紧急接种。为了了解掌握该批疫苗紧急接种后的免疫效果，以及猪群猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体的变化动态，笔者从紧急接种后的第3周开始，采集血清，对猪繁殖与呼吸综合征抗体进行监测，采集血清样本52份。为该猪场有效控制PRRS提供了科学依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 血清来源 广东湛江地区某规模化猪场共采集52份血清。

1.1.2 试剂 猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒（PRRS X3 Ab），美国IDEXX公司生产。

1.1.3 仪器设备 MK3酶标仪，MK2自动洗板仪，MILLI-Q-A超纯水机，单道微量移液器，多道微量移液器，涡旋混合仪。

1.2 方法

1.2.1 样品采集 采取随机抽样的方法，每一次采血不低于5份。紧急接种前采集样本20份，紧急接种后21 d采集有效血清6份，28 d采集有效血清7份，35 d采集有效血清6份，42 d采集有效血清样本13份。血样采集后及时进行常规血清分离，冷冻备检。

1.2.2 抗体测定 取10 μL血清，利用猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒进行抗体检测。操作程序按照试剂盒说明书进行操作，在630 nm处测定样本以及对照的吸光度值（OD630）。只有阴性对照的平均OD630小于等于0.150，阳性对照的平均值减去阴性对照的平均值大于或等于0.150时，该检测结果才能有效。如果被检样品阻断率大于或等于40%,该样本被判为阳性(有PRRSV抗体存在)；如果被检测样品的阻断率小于或等于30%，该样本就被判为抗体阴性（无抗PRRSV抗体存在）；如果被检测样品的阻断率在30%～40%之间，就应在数日后再对该动物进行重测。如果重测结果仍旧可疑，就使用血清中和试验的方法再次进行确认。

1.2.3 离散度分析 离散度（CV）采用变异系数表示。如果被检测猪场PRRSV抗体的离散度小于或等于40%，我们认为该猪场PRRS抗体比较整齐，免疫效果比较确实。反之，如果该场的离散度大于40%，我们认为该猪场的猪PRRSV抗体水平参差不齐，免疫效果不理想。

2 结果

由表1可见，在紧急接种前该场的猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体的阻断率均值为1.938 5。紧急接种基因缺失苗后21 d、28 d、35 d和42 d的抗体阻断率平均值分别为2.305 6、2.050 2、1.641 7和1.301 0。在紧急接种前该场的猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体的离散度为99.83%。紧急接种基因缺失苗后21 d、28 d、35 d和42 d的抗体离散度分别为66.20%、57.00%、78.90%和86.59%。

3 分析与讨论

3.1 结果分析

由表1可见，该规模化猪场在2014年1月份监测的血清样本中，虽然总体抗体阻断率平均值1.938 5还算理想，但是出现很多极端值。有4份血清的阻断率大于3，其中编号为7号的血清高达5.6，编号为16号的血清高达7.6。在实际生产中，现有的诊断试剂盒还不能区分野毒和疫苗毒所产生的抗体，但我们一般认为现有的疫苗干预所能产生的抗体阻断率一般都小于3.0。因此当样品的阻断率超过3.0时，我们都判为野毒感染。因此我们怀疑该场目前有PRRS野毒感染。同时有4份血清的抗体阻断率小于0.3，就是说这4份血清没有PRRS抗体。这和阻断率高达7.6的血清相比，形成强烈的反差，进一步验证该场遭受了PRRS野毒感染。紧急接种21 d后，抗体阻断率平均值上升，平均值为2.305 6，接种后28 d，抗体阻断率平均值开始下降,平均值为2.050 2，随后的3周，匀速下降，到第42天的时候，抗体阻断率下降到1.301 0。这说明在紧急接种PRRS基因缺失苗后，该疫苗起到了有效的干预作用，使得PRRS抗体产生了明显变化。这也说明该猪场这次紧急接种PRRS基因缺失苗起到了紧急接种的作用，达到了预期效果

表1 猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体监测结果

该规模化猪场在2014年1月份对PRRS进行抗体监测时，PRRS抗体离散度为99.83%，高于40%，说明这一时期该猪场的PRRSV抗体水平参差不齐，免疫效果不理想。紧急接种PRRS基因缺失苗后，到28 d的时候下降到57.00%。这说明在紧急接种PRRS基因缺失苗后，该疫苗起到了有效的干预作用。在紧急接种35 d后，抗体离散度又开始上升，到42 d的时候，离散度又重新上升到86.59%，这反映这次紧急接种，随着时间的推移，对猪PRRS野毒感染的干预作用在减小。因此建议，就针对PRRS,针对这个型号的PRRS基因缺失苗，最好在紧急接种42 d后，重新接种一次，以确保紧急接种的效果。

综上所述，结合PRRS阻断率平均值的变化和抗体离散度的变化，我们认为该场紧急接种的PRRS基因缺失苗，有效地干预了该场PRRS抗体的变化。可以判断该猪场这次紧急接种PRRS基因缺失苗起到了紧急接种的作用，达到了预期效果。

3.2 讨论

3.2.1 抗体变化和临床表现 笔者通过和该场兽医人员的沟通了解到，该场在紧急接种PRRS基因缺失苗前，产房仔猪开始腹泻，久治不愈。但并没有出现典型的PRRS临床症状，即：猪群出现厌食、发热、母猪繁殖障碍，怀孕期发生大批流产，产死胎和木乃伊胎；仔猪与育成猪发生严重呼吸道疾患及高死亡率。紧急接种1个月后，产房仔猪拉稀现象逐步消失，生产恢复正常。这和笔者监测到的抗体变化成正相关，在紧急接种前，该场的猪群PRRS的阻断率出现很大的波动，出现一些极高和极低的阻断率，并且离散度高达99.83%。虽然临床没有出现典型的PRRS临床症状，但是由于PRRSV对免疫系统有一定的破坏力，致使临床仔猪拉稀，变得很难治愈。猪群PRRS抗体阻断率在紧急接种21 d后上升到2.305 6，抗体离散度下降到66.20%，说明已经有效干预PRRS野毒感染。所以在紧急接种后1个月左右，产房仔猪拉稀问题，得到了有效的控制，生产逐步稳定。虽然在42 d后，抗体离散度重新回升，但是抗体阻断率还是一直处于下降状态，所以生产非常稳定。这似乎说明，该场虽然遭受了PRRS野毒感染，但是由于接种及时，接种的疫苗效果确实，该场并没有暴发PRRS。

3.2.2 抗体依赖性增强作用 PRRS感染有一个很重要的特点是抗体依赖性增强作用，即无论在体内或者体外的试验条件下，PRRSV抗体的存在可介导和加强感染，而不是保护。该规模化猪场在2014年1月份抗体监测的时候，虽然抗体水平总体不错，但是临床还是出现仔猪腹泻的问题，紧急接种PRRS基因缺失苗后，PRRS抗体阻断率整体虽然下降，但是临床的生产却非常稳定。PRRS感染的这一特点，刚好解释了这一现象。因此单单通过血清抗体水平来评估PRRS病毒疫苗的免疫效果不科学，但可以通过监测PRRS病毒 N蛋白抗体水平的变化状态来监测群体中PRRSV的活跃程度。

3.2.3 监测方法 目前临床上监测猪繁殖与呼吸综合征抗体的多采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）的方法。国内外很多生物制品厂家都生产检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的试剂盒，质量参差不齐。钱欢，唐利对市场一些常见的试剂盒做了对比试验，发现美国IDXX公司生产的猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒重复性和一致性比较高，适用于发病诊断和疫病预警[2]。马超峰，孙何云等也对市场一些常见的试剂盒做了对比试验，最后的实验结果是美国IDXX公司生产的猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒具有较高的敏感性和特异性，可以作为PRRS检测的首选试剂[3]。IDEXX猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA检测试剂盒，是用重组的PRRSV抗原包被的微量反应板，利用ELISA原理来检验猪血清或血浆中的PRRSV抗体。该试剂盒具有较高的重现性、敏感性和特异性，检测结果可靠。所以笔者认为对广东湛江地区该规模化猪场的检测结果比较可靠。

3.2.4 疫苗选择 目前市场上PRRS疫苗的生产厂家比较多，生产规格也很多。PRRS疫苗免疫后能不能真正地，有效地干预到猪体对PRRS病毒的免疫，笔者通过过去几年对湛江地区PRRS免疫抗体的检测发现，不同规格、不同厂家的疫苗所产生的免疫效果相差甚远。因此笔者建议，大家一定要慎重选择疫苗。同时笔者还发现，目前湛江地区的规模化猪场在设计PRRS免疫程序的时候，大多都是根据经验，或者专家教授的推荐来设计的，有的很多年都没有变过。目前疫苗的生产工艺不断在改进，疫苗免疫效果不断在进步，因而我们的免疫程序一定也要做出相应的调整。所以笔者建议，有条件的猪场最好借助实验室检测手段，根据抗体的消长规律，来选择适合自己猪场的PRRS疫苗，来完善适合自己猪场的免疫程序。

[1] 宣长和,马春全,陈志宝，等.猪病学[M]. 第3版.北京:中国农业大学出版社，2010：146-172.

[2] 钱欢，唐利.3种检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的ELISA试剂盒 的比较[J].猪业科学， 2012， 29（10）：42-44.

[3] 马超锋，孙何云，张轶，等.几种检测猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体ELSA诊断试剂盒的对比试验 [J].猪业科学，2013，30（9）：82-83.