云南松松塔抗HIV-1活性提取物急性毒性实验研究

史志婷，刘 熙，张海珠*

（1.大理学院药学与化学学院，云南大理 671000；2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理 671000）

云南松松塔抗HIV-1活性提取物急性毒性实验研究

史志婷1，2，刘 熙1，2，张海珠1，2*

（1.大理学院药学与化学学院，云南大理 671000；2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理 671000）

目的：研究云南松松塔抗HIV-1活性提取物的急性毒性，对其用药安全性进行初步评价。方法：急性毒性实验采用最大给药量法，松塔提取物一次灌胃给药25 g∕kg，观察小鼠在14 d内毒性表现，14 d后测量小鼠体重，脏器质量并对肝脏和肾脏作病理组织学检查。结果：急性毒性实验未见明显毒性。空白组与给药组各脏器指数差异无统计学意义，病理检查结果各组均未见异常。结论：本次实验结果显示，松塔活性提取物未见急性毒性反应。

松塔；抗HIV-1；急性毒性

松塔是松科松属植物的果实，《本草纲目》记载其性温、味苦，能祛风、祛痰止咳、平喘、滋润肠道和安神，主治气管炎、咳嗽有痰、哮喘等症〔1〕。松塔被1997年中国药典所收录。松属植物共有近百种，我国有近50种，云南主产云南松、乔松、马尾松、思茅松、华山松等〔2〕。随着现代实验研究的深入开展，发现松塔中含有糖、木质素、二萜、黄酮、挥发油等多种化学成分〔3-7〕，具有很多药理活性，如抗癌、抗菌、抗病毒类〔8-9〕。本课题组前期试验表明云南松松塔提取物具有很好的抗HIV-1活性，在抗HIV-1方面有着很大的药用价值和临床应用前景，但对于该松塔提取物的毒性研究还未见报道。本文对松塔提取物的急性毒性进行研究，对其用药安全性进行评价，为进一步开发利用该资源提供理论依据。

1 材料与方法

1.1实验动物昆明种小鼠，体重（20±2）g，雌雄各半，由昆明医科大学动物实验中心提供，动物合格证号为SCXK（滇）2011-0004。饲养环境：室温：20℃，相对湿度：50%～60%，光照时间：12∕12 h。

1.2云南松松塔提取物的制备云南松松塔粗粉10 kg用85%乙醇提取2次，每次用乙醇4 000 mL，浸泡24 h。过滤，将残渣用热水提取，过滤除去热水提取液。在室温条件下，向残渣中加碱液进行提取并过滤得到碱性提取液。用醋酸调所得碱性提取液的pH值至5，浓缩、过滤，滤液用乙醇分级沉淀，制成冻干粉备用。

1.3仪器与设备全自动脱水机（TP1020 LEICA，德国）；生物组织包埋机（BM-V孝感市电子仪器厂）；电热恒温鼓风干燥箱（101-1-BS）；石蜡切片机和图像分析系统（LEICA-Q550CW，德国LEICA公司）。

1.4急性毒性实验先进行半数致死量（LD50）测定预试验，发现在最大给药浓度和最大给药体积下，未见动物出现死亡。所以进行最大给药量法〔10-15〕，小鼠20只，雌雄各半，随机分为2组，对照组和给药组。给药组小鼠禁食约12 h，3次∕d灌胃松塔提取物0.04 mL∕g，给药剂量为25 g∕kg；对照组给予相同体积分数的重蒸水。仔细观察并记录给药后即刻至14 d内小鼠出现的毒性反应与死亡情况。比较各组脏器指数，采用SPSS 17.0统计软件进行t检验。取肝、肾做病理组织检查。

2 实验结果

2.1一般情况观察14 d内对小鼠的饮水、进食、排泄、皮毛、自由活动等情况的观察发现，各组动物饮水、饮食正常，眼、口、鼻处无异常分泌物，粪便成形无黏液，耳、鼻、尾部未见发绀，亦无苍白、潮红现象，被毛光润致密，呼吸、活动正常。给药期间无动物死亡，未见毒性反应。

2.2松塔提取物对小鼠脏器系数的影响松塔提取物对小鼠的各脏器系数与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.1）。见表1。

表1 松塔提取物对小鼠脏器系数的影响（xˉ±s）

2.3肉眼尸检各组小鼠解剖肉眼观察：心脏大小正常，表面光亮，心包膜内无积液；双肺表面无充血、出血及粘连；肾脏红褐色，皮髓质分界清楚，无水肿、充血等病变；脾脏暗红质软，大小正常，表面无皱纹；胃黏膜无充血、出血、溃疡；其余胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫等亦未见明显异常。

2.4病理组织学检查给药14 d后，对2组小鼠的肝和肾做HE染色切片，病理检查未见异常。结果表明，肝脏包膜完整无损伤。肝小叶结构清晰，肝细胞索排列有序，细胞无水肿、脂变、坏死，中央静脉及肝血窦无充血扩张，枯否氏细胞无明显增生；小叶内及汇管区无炎细胞浸润，未见瘀胆。肾脏切片表明：肾脏皮、髓质分布清楚，皮质内肾小球体积及细胞数正常，无坏死、玻璃样变及纤维化等病变。小球毛细胞血管内皮细胞无增生、肿胀、基底膜无蛋白性物质沉积。肾小管结构正常，上皮细胞无变性、坏死、脱落，管腔未见狭窄，腔内无蛋白、细胞管型。肾髓质及间质、肾盂均未见病理性损伤及炎性病变。见图1。

图1 各组小鼠肝脏、肾脏组织学变化（HE，×100）

3 讨论

近年来，云南松松塔的药用价值逐渐得到人们的重视，本实验室前期大量的实验表明松塔提取物在抗HIV-1病毒方面作用突出，具有治疗艾滋病的潜在价值。利用松塔资源开发具有抗HIV-1活性的药物既可以为艾滋病患者带来福音，又能充分利用云南这一特有的地域品种优势〔16-21〕。本次实验结果证实，在给定的用药剂量下，松塔提取物对小鼠无急性毒性，表明云南松松塔提取物是一种安全的天然植物提取物，这为其今后的开发利用奠定了毒理学基础。本次实验结果中胸腺指数略有增加，这可能与松塔具有免疫调节作用有关〔2〕，有待进一步研究。

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*通信作者：张海珠，讲师.

（责任编辑 李 杨）

Experimental Study on Acute Toxicity of Anti-HIV-1 Active Extracts from Pinecone of Pinus yunnanensis

SHI Zhiting1,2,LIU Xi1,2,ZHANG Haizhu1,2*
（1.College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000，China;2.Yunnan Provincial Key Laboratory of Entomological Biopharmaceutical R&D,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To study acute toxicity of anti-HIV-1 active extracts from pinecone of Pinus yunnanensis and to evaluate its medicinal safety.Methods:The maximum dosage test was used,and after intragastric administration of pinecone extracts in mice(25 g∕kg once)for14days,with acute toxicity observed during this period,the body weight and organ weight were measured and the histopathological examination on the liver and kidney was conducted.Results:The acute toxicity test showed no toxicity,the control group and the treatment group showed no significant difference statistically on organ index and pathological examination showed no abnormal results in each group.Conclusion:There was no acute toxicity reaction on anti-HIV-1 active extracts from pinecone.

pinecone;anti-HIV-1;acute toxicity

R285.5

A

1672-2345（2014）08-0004-03

10.3969∕j.issn.1672-2345.2014.08.002

国家自然科学基金资助项目（81260632）

2014-02-25

2014-05-06

史志婷，硕士研究生，主要从事中药质量控制研究.