柠檬提取物漱口液在儿童牙菌斑中的应用效果

姬长兰，张向宇，王玉芝，余志芬，汪大照

儿童是龋齿病的高发人群，5岁儿童龋齿患病率较高，为76%，其主要原因与儿童的生活习惯及好食含糖类高的食品有关[1]，儿童龋齿病的预防和治疗非常重要。吴丹等[2]研究发现，蔗糖浓度可使牙菌斑生物膜的细菌组成发生变化(可筛选出具有潜在强产酸和耐酸能力的菌群)、pH值降低(产生过多乳酸)。研究表明，柠檬提取物(lemon peel extracts，LPE)具有杀菌和抗病毒作用[3]，对龋齿致病菌有很好的抑制作用[4]，可改变成年人早期牙菌斑内细菌构成，具有良好的早期牙菌斑抑制效果[5]。但目前关于柠檬提取物对儿童牙菌斑治疗作用的研究报道较少，本研究旨在探讨柠檬提取物漱口液在儿童牙菌斑中的应用效果，以指导临床对儿童龋齿病的治疗。

1 对象与方法

1.1 病例纳入与排除标准 病例纳入标准：(1)身体健康；(2)规律刷牙，口腔健康状况良好；(3)无缺失牙，无活动性龋齿病；(4)近2个月内未使用相关的预防龋齿病的药物和保健品；(5)年龄5～8岁，有吃甜食习惯；(6)父母了解本研究目的及干预措施等相关情况，签署知情同意书并同意积极配合治疗。病例排除标准：(1)不满足上述纳入标准者；(2)因各种原因未完成规定治疗者。

1.2 研究对象 根据以上标准，选取2011年3月—2013年3月在天津市儿童医院口腔科门诊和病房就诊的龋齿病患儿120例，均居住在天津市6区，按照随机数字表法将所有患儿分为A、B、C 3组，每组40例。A组中男22例、女18例，平均年龄为(6.4±1.0)岁；B组中男19例、女21例，平均年龄为(6.3±0.1)岁；C组中男20例、女20例，平均年龄为(6.5±1.0)岁。3组患儿性别构成(χ2=0.463，P=0.795)、平均年龄(F=0.23，P=0.93)比较，差异均无统计学意义，具有可比性。

表1 3组患儿治疗前及治疗后PI变化

注：与B组比较，△P>0.05；与C组比较，*P<0.05

1.3 方法 将3组患儿统一编号，A组为A1～A40，B组为B1～B40，C组为C1～C40。A组给予柠檬提取物漱口液(天津医科大学口腔基础实验室提供，1∶800浓度)，含漱3～5 min，15 ml/次，2次/d，刷牙后使用，使用后不必清水漱口；B组给予复方醋酸氯己定漱口水漱口(立口定漱口液，珠海安保健药业有限公司生产，250 ml/瓶，国药准字H20058018)，使用方法同上；C组给予康师傅纯净水漱口，使用方法同上。以每例患儿上下、左右对称的16颗乳牙(以门牙为中心)为目标牙，参照文献[6]中的方法，严格按照Turesky改良法记录3组患儿治疗前及治疗后1、2、3周牙菌斑指数(plaque index，PI)，同时记录治疗相关不良反应，如局部变态反应、口腔黏膜浅表脱屑、口腔黏膜及牙齿着色、舌苔发黄、味觉改变等。

2 结果

2.1 治疗前后PI变化 3组患儿治疗前及治疗后PI比较，差异有统计学意义(F时间=21.670，F组间=3.430，F交互=7.329；P时间=0.001，P组间=0.036，P交互=0.001)，其中治疗后1、2、3周时，A、B组PI均低于C组，差异有统计学意义(P<0.05)，A、B两组间差异无统计学意义(P>0.05,见表1)。A、B组患儿治疗后PI呈下降趋势，C组治疗后1周时降低后逐渐升高(见图1)。

2.2 不良反应 A组有1例患儿出现口腔黏膜及牙齿着色，1例患儿出现舌苔发黄；B组有2例患儿出现局部变态反应，1例患儿出现口腔黏膜及牙齿着色、舌苔发黄；C组无一例患儿出现不良反应。3组患儿不良反应发生率比较，差异无统计学意义(χ2=2.922，P=0.232)。

图1 3组患儿治疗后PI变化趋势

Figure1 Trend of PI change after treatment in the three groups

3 讨论

龋齿俗称“虫牙”“蛀牙”，是细菌感染导致的非特异性、传染性疾病，发病率极高[7]。龋齿病的致病菌主要是变形链球菌、远缘链球菌和表兄链球菌[8-9]，其中最为重要的是变形链球菌，不同基因型变形链球菌对儿童的致龋齿能力不同[10]。龋齿病致病菌主要存在于牙菌斑，并主要通过牙菌斑的生物膜发挥作用。牙菌斑生物膜是各种细菌在口腔中存在的主要生态形式，也是龋齿病发生、发展的始动因子和主要因素，还可引起其他疾病[11]。预防和治疗牙菌斑是预防和治疗龋齿病的关键[12]。临床上龋齿病治疗方法主要包括化学漱口液漱口、中药提取物漱口液漱口及物理方法等[13]。

随着临床对牙菌斑治疗研究的不断深入与发展，牙菌斑早期治疗方法因疗效不佳而不断被淘汰，目前常用的治疗方法是提取自然界有价值植物(主要是芳香类植物)的有效成分来预防和治疗龋齿病[3]。柠檬树为芸香科柑橘属植物，含有机酸、矿物质、黄酮类化合物及挥发性芳香油等，柠檬提取物有较强的生物学活性，具有抑制口腔常驻细菌生长的作用，低浓度的柠檬提取物还可抑制变形链球菌的黏附能力。

张向宇等[14]研究发现，柠檬提取物可对抗变形链球菌的黏附作用，抑制变形链球菌乳酸脱氢酶和蔗糖酶活性，对龋齿致病菌及牙菌斑具有抑制作用[14]。笔者所在团队进行的前期研究发现，柠檬提取物具有抗单纯疱疹病毒作用。史艳芬等[15]研究发现，低于最小抑菌浓度的柠檬精油同样能够有效抑制表兄链球菌葡糖基转移酶(GTF)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性及水不溶性多糖(WIG)的合成，对表兄链球菌致龋齿毒力因子有抑制作用。孙志滢等[6]研究发现，柠檬提取物漱口液可改变早期牙菌斑内细菌构成，具有良好的早期菌斑抑制作用，有助于减低龋齿病敏感性。韩慧等[4]研究发现，柠檬提取物对口腔致龋菌有生长有抑制作用。

本研究选取5～8岁乳牙未退、牙齿完整的儿童为研究对象，同时为减少外界因素的影响，仅纳入规律刷牙、口腔健康状况良好且喜吃零食的儿童，并在研究开始前对孩子及其家长进行了教育培训，使其充分配合治疗。对于研究过程中脱落病例采取再采集同编号填补的办法，以保证研究顺利进行；数据采集由3位医师共同观察，分别记录，取其均值，再由专人录入数据库，保证了数据的准确性。本研究结果显示，A、B组患儿治疗后PI均呈下降趋势，C组在治疗后1周时降低后逐渐升高；表明柠檬提取物漱口液与复方醋酸氯己定漱口液效果相当，对儿童牙菌斑有抑制和治疗作用。3组患儿不良反应发生率间无明显差异，表明柠檬提取物漱口液安全性较好。值得注意的是，A组和B组患儿PI在治疗后2周时才出现明显下降，提示柠檬提取物漱口液与复方醋酸氯己定漱口液起效时间均较慢，需坚持使用至少2周以上。但本研究观察指标较为单一，观察时间较短，柠檬提取物漱口液应用于儿童牙菌斑的远期疗效还有待进一步深入研究。

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2 吴丹，王帅，郭丽宏，等.蔗糖浓度对牙菌斑生物膜细菌组成及pH值影响的体外实验[J].中华口腔医学杂志，2011，46(z1)：6-10.

3 Allaker RP，Douglas CW.Novel anti-microbial therapies for dental plaque-related diseases[J].International Journal of Antimicrobial Agents，2009，33(1)：8-13.

4 韩慧，张向宇，杨丽杰，等.柠檬提取物对口腔致龋菌生长影响的研究[J].口腔医学研究，2012，28(2)：117-120.

5 张向宇，余志芬，汪大照，等.柠檬提取物对变形链球菌乳酸脱氢酶和蔗糖酶活性的影响[J].中华口腔医学杂志，2010，45(12)：754-758.

6 孙志滢，张向宇，郭卯丁，等.柠檬提取物漱口液对早期牙菌斑细菌构成的影响[J].实用口腔医学杂志，2011，27(1)：123-124.

7 Pretty IA，Edgar WM，Smith PW，et al.Quantification of dental plaque in the research environment[J].J of Dentistry，2005，33(3)：193-207.

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13 邹朝晖，常秀明，阴慧娟，等.光动力疗法对牙菌斑生物膜活性及结构的影响[J].国际生物医学工程杂志，2012，35(3)：169-172.

14 张向宇，郭卯丁，李晓眠，等.柠檬提取物抗变形链球菌附着作用的研究[J].中华口腔医学杂志，2008，22(6)：587-589.

15 史艳芬，张向宇，韩慧，等.柠檬精油对表兄链球菌致龋毒力因子的影响[J].中华口腔医学杂志，2012，47(12)：739-743.