巳时、申时健脾益智胶囊对AD大鼠全血AChE表达的影响※

蔡华珠 汤慧敏 于晓艳 洪虹雅 陈超云 刘启鸿

（1福建中医药大学中医学院，福州350122；2福建中医药大学骨伤学院，福州350122）

巳时、申时健脾益智胶囊对AD大鼠全血AChE表达的影响※

蔡华珠1汤慧敏1于晓艳1洪虹雅1陈超云2刘启鸿1

（1福建中医药大学中医学院，福州350122；2福建中医药大学骨伤学院，福州350122）

目的探讨巳时、申时健脾益智胶囊对老年性痴呆（AD）大鼠全血乙酰胆碱酯酶（AChE）表达的影响，揭示“脾主巳时”理论的科学性。方法通过腹腔注射D-半乳糖，同时胃饲氯化铝（ALCL3）的方法塑造AD动物模型，设立正常对照组、模型组、中药申时组、中药巳时组，应用分光光度测定方法测TChE活性，通过比较巳时和申时健脾益智胶囊对AD大鼠全血中AChE表达的影响来揭示“脾主巳时”的科学性。结果AD大鼠经过治疗，中药巳时组AChE活性明显降低，与模型组和中药申时组比较有显著差异（P＜0.05或P＜0.01）。结论健脾益智胶囊可以降低全血AChE活性，起到治疗AD的作用，而中药巳时组效果显著，从而验证“脾主巳时”理论的科学性。

脾；巳时；申时；阿尔茨海默病；乙酰胆碱酯酶；健脾益智胶囊

中医学认为，气血在十二经脉的运行具有昼夜节律性，十二经脉气血的运行与十二时辰相应，每一经脉的气血旺盛于其相应的时辰，如足太阴脾经旺于巳时（上午9点到11点）。老年性痴呆(Altheimer's disease，AD)的基本病机为髓减脑消，髓由精所化，而脾为“后天之本”，“气血生化之源”。从2000年开始，研究人员不断对中药制剂健脾益智胶囊治疗老年性痴呆进行了相关理论、临床和实验研究，成效显著[1-2]。

本研究主要通过巳时、申时对老年性痴呆大鼠（AD）给健脾益智胶囊，应用分光光度测定的方法测定AD大鼠全血乙酰胆碱酯酶（Acetyl cholinesterase，TChE）活性的变化，揭示“脾主巳时”理论的科学性。现将实验研究部分进行分析讨论。

1 材料与方法

1.1 动物及其分组实验动物SPF级40周龄SD雄性大鼠60只，体重500±10g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证SCXK(京)2012-0001，实动单项准11400700020031号。动物饲养于福建中医药大学实验动物中心，医学实验动物环境设施合格证书为医动字第23-016号。适应性喂养一周后，随机分成空白对照组、模型组、中药巳时组、中药申时组，每组15只。

随机分成空白对照组、模型组、中药巳时组、中药申时组，每组15只。

1.2 药品、试剂和仪器氯化铝（中国医药集团上海化学试剂公司提供，批号：F20130628）；分析纯；D一半乳糖（上海恒信化学试剂有限公司，批号F20130613）；健脾益智胶囊（福建中医药大学国医堂）；AChE测定试剂盒（南京建成生物工程研究所,批号:20130821）；多功能酶标仪（TECAN Infinite M200）。

1.3 药物配制及给药健脾益智胶囊由人参、黄芪、水蛭、石菖蒲、远志等加工制成。大鼠给药剂量按《中药药理实验方法》所提供的“实验动物与人按体表面积等效剂量换算比率表”倍数折算。用蒸馏水将其制备成0.2 g/m L浓度的强脾益智胶囊混悬液给药给中药巳时组和中药申时组大鼠；模型组，中药巳时组和中药申时组每日腹腔注射浓度为4.8mg/mL的D-半乳糖，按1ml/0.1kg·d剂量，同时胃饲浓度为20 mg/mL的ALCL3，按lmL/0.1kg·d剂量，塑造AD动物模型，持续30天。中药巳时组、中药申时组均从实验第31天开始给药，连续7天。

1.4 标本的采集与制备造模第30天和实验结束后，各组大鼠均进行断尾，用定量采血10ul后，立即注入含有990 uL生理盐水的试管中(即按1：99稀释)，大鼠尾部压迫止血，所采血液冰箱低温(4℃)储存待测全血中AChE活力水平。

1.5 AChE活性的测定AChE水解乙酰胆碱生成胆碱及乙酸，胆碱可以与巯基显色剂反应生成对称三硝基苯（TNB）黄色化合物，根据颜色深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数量可反应胆碱酯酶的活力，计算出AChE的活力，具体操作参照AChE测定试剂盒说明书。1.6统计学处理实验结果均采用SPSS18.0统计软件分析，计量资料均采用（x±s）表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

造模第31天和给药第8天4组大鼠全血AChE的活性比较见表1。

表1 4组大鼠全血中AChE活性比较

表1 4组大鼠全血中AChE活性比较

注：与正常对照组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2)P＜0.01，3)P＜0.05；与西药组比较，4)P＜0.05

组别例数造模第30天AChE活性(U·ml-1)中药巳时组1556.03±6.111)中药申时组1554.94±13.861）模型组1556.14±3.451）正常对照组1533.30±6.22 8例数1 091 0给药第8天AChE活性(U·ml-1) 34.27±1.702)4）42.59±4.612)61.36±13.221）58.14±3.433）

3 讨论

自然界的一切生物不仅具有适应自然的生理结构和生理机制，还具有适应自然环境的节律变化(季节、昼夜、时辰)而形成的高度时间节律的生物活动特性[3]。中医学是最早认识和应用这种特性的学科之一，如其中的子午流注学说便是很好的例证。子午流注学说将人体气血运行比喻为水流，从子时到午时，随时间先后顺序，人体阴阳盛衰，营卫运行，经脉流注，时穴开阖，均与自然界具有同步的节律变化，如巳时(上午9～11时)流经脾经；申时(下午15～17时)流注膀胱经。该学说指出：气血迎时而至为盛，过时而去为衰；逢时为开，过时为阖；定时开穴或给药，方可有效地调和阴阳，纠正机体的偏胜偏衰[4]。根据此学说可知“脾”应“巳时”。

脾藏意主思，与情志密切相关，而大脑主要功能是主导运动、感受、意识、思维、记忆、情绪等，其主司精神、意识、思维和情感活动可归属于中医情志范畴。因此中医脾胃与大脑存在密切的相关性。

基底前脑胆碱能神经元丢失严重为AD主要病理改变之一。中枢胆碱能神经系统重要的神经递质是乙酰胆碱(acetylcholine，Ach)，它由胆碱乙酰化转移酶(choline acetyltransterase，CHAT)催化合成，AChE催化分解。AD患者脑组织中Ach含量明显减少，而合成Ach的胆碱乙酰化转移酶(CHAT)活性降低，分解Ach的AChE活性明显增高，从而使Ach含量明显减少。

本研究结果提示，健脾益智胶囊可以降低全血AChE的活性，保护Ach这一中枢胆碱能神经系统重要的神经递质，改善中枢胆碱能神经系统的功能，从而达到治疗AD的作用。而中药巳时组大鼠全血中AChE活性较中药申时组下降更为突出。由此可说明某一脏腑经络的疾病，在不同时间给药疗效是不一致的。正如王冰所说：“藏在内，其象在外可阅者也。”本实验通过这种“天人相应”观指导下的“以时测脏”的思路确切地证实脾经气血旺盛于巳时，以及在脾脏功能活跃之时，“因时制宜”对AD进行治疗可取得显著的疗效。因此依脏腑相应之时用药很有必要进行深入挖掘研究，以完善中医学“时脏相应”的现代科学内涵及临床运用。

[1]蔡华珠，纪立金.强脾益智胶囊对老年性痴呆大鼠脑海马星形胶质细胞增殖的影响[J].福建中医学院学报,2009，19(6):57-58.

[2]冯珂，纪立金.健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞大鼠海马神经干细胞增殖及Notchl、Jaggedl表达的影响[J].中华中医药杂志,2013，28(4):921-924.

[3]李财.中药制剂给药时间的探讨[J].社区医学杂志，2005，3（6）：45-46.

[4]郭霞珍.刘晓燕.马淑然.“以时测脏”理论的分析和探讨[J].中医杂志，2006，47（2）:85-87.

Effects of Jianpi Yizhi Capsule on Whole Blood AChE in Rats with Alzheimer Disease During 9～11 am and 3～5pm

Cai Huazhu1Tang Huimin1Yu Xiaoyan1Hong hongya1Chen Chaoyun2Liu Qihong1
(1 Fujian university of traditional Chinese medicine,Fuzhou350122,China; 2 Orthopedics Institute of Fujian university of traditional Chinese medicine,Fuzhou350122,China)

Obejective To detect the effects of Jianpi Yizhi Capsule on the whole blood AChE in the rats with Alzheimer Disease during 9~ 11 am and 3~5pm and reveal the scientific theory of"Spleen in 9~11am".Methods The AD racts model was established by D(+) Galactose injected into the rats and intragastric administration of ALCL3,the rats were divided into 4 groups,the control group,the model group,the chinese herbal medicine Si-shi group,the chinese herbal medicine Shen-shi group,Spectrophotometric method was used to measure the whole blood of AChE activity,by comparing the expression of Jianpi Yizhi Capsule on the whole blood AChE in the rats with alzheimer disease during Si-shi(9~11am)9~11 am and Shen-shi(3~5pm)to reveal the scientific theory of"Spleen in Si-shi(9~ 11am)".Results After the treatmeat of AD rats,the AChE activity of the chinese herbal medicine Si-shi group was significantly reduced, compared with that of the model group and the chinese herbal medicine Shen-shi group,it had highly significant difference(P＜0.05 or P＜0.01）).Conclusion The Jianpi Yizhi Capsule can reduce the whole blood of AChE activity,it had the therapeutic effect on AD,and the Chinese herbal medicine Si-shi group had significant effect,that verified the scientific theory of"Spleen in 9~11am".

spleen;Si-shi(9~11am);Shen-shi(3~5pm);alzheimer disease;AChE;Jianpi Yizhi Capsule

10.3969/j.issn.1672-2779.2014.24.087

1672-2779（2014）-24-0153-02

杨杰 本文校对：郑春松

2014-12-02）

国家自然科学基金资助项目[No：81202613]；福建省教育厅B类课题[No：JB08158]；福建省大学生创新课题[No：201310393037]