癫痫患者脑组织中SCG10的表达及其与耐药的相关性分析

葛晓霞

癫痫患者脑组织中SCG10的表达及其与耐药的相关性分析

葛晓霞

目的 探讨癫痫患者脑组织中SCG10的表达及其与耐药的相关性。方法 选取本院收治的38例耐药性癫痫患者作为观察组, 同时选取18例神经外科减压或清创患者作为对照组, 对其临床资料进行回顾性分析。结果 观察组患者的SCG10及MAPK表达均明显高于对照组(P＜0.05), 且癫痫患者脑组织中SCG10及MAPK表达位于同一细胞上。结论 耐药性癫痫患者脑组织中的SCG10及MAPK表达增加, 且两者间的共同表达表明, 耐药性癫痫的发生发展可能与SCG10及MAPK的相互作用有关。

癫痫；脑组织；SCG10表达；耐药

为探讨癫痫患者脑组织中SCG10的表达及其与耐药的相关性, 对收治的38例耐药性癫痫患者的临床资料进行了回顾性分析, 并取得了良好的效果, 现将具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院自2010年12月～2011年12月收治的38例耐药性癫痫患者作为观察组, 患者均符合相关诊断标准, 其中男26例, 女12例, 年龄8～57岁, 平均年龄27.9岁；同时选取18例神经外科减压或清创患者作为对照组, 其中男12例, 女6例, 年龄9～51岁, 平均年龄28.3岁；两组患者临床资料比较差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 标本制备及随机化处理 两组患者脑组织取出后均及时利用浓度为4%的多聚甲醛进行固定, 固定时间为48 h,然后利用石蜡进行常规包埋, 保存备用。取出石蜡块, 利用石蜡切片机进行冠状切片, 且要保证其连续性, 切片厚度应控制在5μm, 各标本均制备10张切片, 随机抽取两张切片进行免疫组化检测及荧光染色检测。

1.2.2 免疫组化检测 组织切片后, 利用电吹风进行烘烤,烘烤时间为10 min, 然后利用乙醇进行脱蜡, 利用自来水进行浸泡, 浸泡时间为5 min, 并利用PBS缓冲液反复冲洗三次。利用蒸馏水配置双氧水, 双氧水浓度应为3%, 室温放置10 min；利用0.01M枸橼酸钠缓冲液进行为期30 min的热修复抗原, 温度应控制为95℃, 然后将抗原修复液I加入其中, 室温放置10 min, 然后利用PBS缓冲液进行冲洗, 每次冲洗时间为3 min, 共冲洗3次。将正常兔血清滴加其中, 室温下放置30 min后将多余液体甩掉, 然后将适量稀释后的一抗山羊抗人SCGl0加入其中, 阴性对照则应利用PBS替代一抗室温过夜。将冰箱温度设置为4℃, 在其中过夜, 第二天在37℃的水浴箱中进行30 min的孵育, 并利用PBS缓冲液进行冲洗, 每次冲洗5 min, 共冲洗3次, 然后添加生物素化二抗,然后按上述方式进行孵育及冲洗, 然后滴SABC, 同样进行孵育及冲洗, DAB显色, 利用苏木素进行复染, 利用二甲苯进行脱水、透明, 并利用中性树胶封片。MAPK检测步骤同SCGl0相同。

1.2.3 免疫荧光检测 切片脱蜡后行抗原修复, 然后将浓度为1%的牛血清蛋白及0.4%的ritonX-100滴加至其中, 室温下反应一小时, 然后将兔血清封闭液添加至其中, 进行为期5 h的封闭, 然后将MAPK小鼠抗人多克隆一抗及SCGl0山羊抗人多克隆一抗添加至其中, 阴性对照利用PBS代替.4℃下放置一夜。过夜后37℃的水浴箱中进行30 min的孵育,并利用PBS缓冲液进行冲洗, 每次冲洗5 min, 共冲洗3次。然后将FITC一兔抗小鼠二抗及RITC-兔抗羊二抗滴加至其中, 室温下孵育3 h, 利用PBS缓冲液冲洗, 并利用油-PBS进行封片。

1.3 统计学方法 本次研究所有患者的临床资料均采用SPSS18.0统计学软件处理。两组间比较用χ2检验, P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

免疫组化检测表明观察组患者SCGl0表达为(0.4738±0.0249), MAPK表达为(0.4259±0.0139), 对照组患者SCG10表达为(0.3412±0.0218), MAPK表达为(0.3174±0.1331), 观察组均明显高于对照组(P＜0.05)；经荧光双标检测, 癫痫患者脑组织中SCG10及MAPK表达位于同一细胞上。

3 讨论

癫痫是临床上常见的一种神经系统疾病, 其属于慢性反复发作性短暂脑功能失调综合征, 其主要特征为脑神经元异常放电导致反复痫性发作［1］。该病具有较高的发病率, 据调查癫痫的发病率仅低于脑卒中, 且患者以婴幼儿居多, 若不及时给予患者行之有效的治疗极易对患者的身体健康造成威胁［2］。现阶段临床上通常将药物治疗作为治疗该病的主要方式, 然而因该病的发病机理尚未明确, 因此, 约有20%～30%的患者经药物治疗不能取得良好的效果。因此, 及时明确癫痫的发病机制, 探讨更加安全、有效的治疗方式就显得至关重要。

SCG10属于神经特异性蛋白的一种, 其在胚胎期神经元发生的过程中生长锥部位具有较高的表达, 而在婴儿出生后其表达含量骤然减少, 然而其在成熟大脑神经元突触重塑部位依然有表达, 这就说明CG10与神经结构重塑间有着一定的关系［3］。相关研究表明SCG10表达过高可在一定程度上促进神经延伸, 使得突触重塑, 从而对神经系统的可塑性产生影响。同时也有研究表明SCGl0的表达在动物癫痫模型中明显增高, 这就说明SCGl0于耐药性癫痫的形成有着较大关系。此外, 也有研究表明SCGl0的激活和MAPK有着一定的关联, 而多种神经系统疾病的病理过程均与MAPK信号传导途径有关。因此, 明确癫痫患者中SCGl0和MAPK的表达情况对提高癫痫患者的治疗效果有着非常重要的作用。

本次研究表明观察组患者的SCG10及MAPK表达均明显高于对照组(P＜0.05), 且经免疫荧光双标法检测, 癫痫患者脑组织中SCG10及MAPK表达位于同一细胞上。这就说明耐药性癫痫患者脑组织中的SCG10及MAPK表达增加, 且两者间的共同表达表明, 耐药性癫痫的发生发展可能与SCG10及MAPK的相互作用有关。

［1］ 杨柳. ROCK1, TRAF3mRNA在耐药性癫痫患者海马组织中的表达及意义.重庆医科大学学报.2011.2(6):176-177.

［2］ 韩璞. ATP-结合相关基因mRNA在耐药性癫痫患者脑组织中的表达.中华医学杂志.2011.2(33):198-199.

［3］ 赖永秀.癫痫发作的两种模式.电子科技大学学报.2010.2(3).113-115.

450000 河南省郑州市第二人民医院神经内科