噬菌体的检验程序分析

邓晓鑫

黑龙江省边防总队医院，黑龙江 哈尔滨 150016

噬菌体的检验程序分析

邓晓鑫

黑龙江省边防总队医院，黑龙江 哈尔滨 150016

噬菌体对相应的易感细菌有强大的溶菌力和具有严格的种及型的特异性，因而可应用噬菌体作细菌的鉴定、分型、检测标本中的未知细菌和防治某些传染病。用于结核病的实验诊断，尤其是初诊患者的鉴别诊断，直接判定患者是否为活动性结核患者。通过噬菌斑数量变化，实验结果强阳性、弱阳性、阴性的转变来实时监控抗痨药物是否对症。

噬菌体；检验；分析

噬菌体广泛分布于自然界，凡有细菌繁殖的地方，都可能有噬菌体存在。噬菌体具有严格寄生性，须在活的易感的细菌体内增殖，并能将菌体裂解。由于对相应的易感细菌有强大的溶菌力和具有严格的种及型的特异性，因而可应用噬菌体作细菌的鉴定、分型、检测标本中的未知细菌和防治某些传染病［1］。

1 资料与方法

1.1 一般资料

噬菌体常见于粪便、污水和水中，故可用这些材料做噬菌体分离。

1.1.1 粪便及污水（下水道水） 取粪便约5 g或污水10 ml，加入含有50 ml肉汤三角烧瓶内，充分振摇使成乳剂匀液，然后放于37℃温箱中培养12～14 h，再经蔡氏滤菌器过滤，取滤液作噬菌体检查。将此滤液滴加2～3滴于经8～12 h培养的某一种幼龄细菌（例如痢疾杆菌或伤寒杆菌等）培养液中，再放入37℃温箱培养4～6 h左右，若发现培养液变清时，即为溶菌现象，可表明滤液中含有与某一种细菌（痢疾或伤寒杆菌）相应的噬菌体。

1.1.2 水 取水200 ml加入3倍浓缩肉汤100 ml内，放于37℃温箱中培养12～14 h后，其余步骤与上述相同。其他标本如脓液等亦可按上方法进行噬菌体分离。

1.2 方法

1.2.1 噬菌体的检定 在琼脂平板上产生的透明溶菌区（溶菌斑或蚀斑），或在培养液中形成透明溶菌现象，有可能是同一种细菌中的几个不同型别菌株共同作用的结果。因此，必须对噬菌体进行检定，作法如下：用肉汤将滤液（含噬菌体）作10倍连续稀释（从10-1～10-9）；在各管加入适量的已知各型细菌幼龄培养液，以使稀释滤液微呈混浊为度；再从各管取出混悬液数滴于琼脂平板上；用玻璃涂布棒将菌液均匀涂布；将琼脂平板置37℃温箱培养12～24 h；若在某1菌型平板上见有微小、零散的噬斑（或称蚀斑），其余各型平板无噬斑出现者，则为该菌型的噬菌体（因其具有高度特异性）。

1.2.2 溶菌现象的观察法与噬菌体的增殖 经培养过滤后的滤液，是否含有噬菌体，除了上述观察培养液外，还可按如下检查：即取某1种细菌（例如痢疾杆菌或伤寒杆菌）幼龄肉汤培养液2～3接种环于琼脂平板上作划线接种，待其干燥后，于划线上滴加滤液于几个地方，然后置37℃温箱培养1夜。

2 讨论

噬菌体是能侵袭细菌、真菌、放线菌、螺旋体等微生物的病毒，只能在活的宿主菌细胞内复制增殖，噬菌体的DNA能赋予宿主菌某些生物学性状，也能介导宿主菌之间以及宿主菌与噬菌体之间的基因转移。噬菌体寄生有严格的宿主特异性，其特异性取决于噬菌体吸附器官和宿主菌表面受体的分子结构的互补性。

先以特异性噬菌体感染、裂解标本中的结核分枝杆菌，再用杀病毒剂清除所有未感染结核分枝杆菌的噬菌体，而结核分枝杆菌胞内的噬菌体继续扩增，进而裂解细胞，释放噬菌体。裂解释放的噬菌体感染随即添加的敏感细胞，在其胞内扩增并裂解敏感细胞，敏感细胞菌苔上出现肉眼可见的噬菌斑。如待检标本不含结核分枝杆菌，噬菌体被杀病毒剂完全清除，故无噬菌体感染敏感细胞，敏感细胞菌苔上无噬菌斑出现。

噬菌体法检测结核分枝杆菌用于结核病的实验诊断，尤其是初诊患者的鉴别诊断。由于本方法能快速、准确地检出活的结核分枝杆菌，且适用于包括痰液、胸水、腹水、尿、脑脊液、骨髓在内的多种类型标本，因此通过本方法检测结果可直接判定患者是否为活动性结核患者，无需进一步鉴定［2］。如联合涂片法检查，效果更佳。

［1］朱召芹，阚飙，高守一.噬菌体裂解系统及其相关蛋白的研究进展［J］.中国预防医学杂志，2004，5（6）：495-498.

［2］金晓琳，张克斌，胡福泉.噬菌体最佳保存方法探讨［J］.第三军医大学学报，2001，23（7）：863-864.

The Analysis of Phage Inspection Program

DENG Xiaoxin Heilongjiang Armed Police Frontier Corps Hospital，Ha’erbin Heilongjiang 150016，China

The phage lyses of corresponding susceptible bacteria has a strong force and has a strict and type of specificity，thus can be used for bacteria identification，classification，detection of unknown bacteria in the sample and some prevention and control of infectious diseases.For TB diagnosis experiment，especially the diagnosis and the differential diagnosis for the primeval patients with directly determine whether the patients are active TB patients.Through the plaque quantity change，the experimental results present the strong positive，weakly positive or negative shift to make sure whether the real-time monitoring and the chemotherapy drugs suit.

Phage，Inspection，Analysis

S132

B

1674-9316（2014）21-0125-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.21.077