寒地草莓几种脱毒技术比较研究

龙照春，郭春华，高庆玉，安胜，孙晓春

(1.齐齐哈尔市园艺研究所，黑龙江齐齐哈尔161005；2.东北农业大学)

草莓是寒地特色果树之一，它种植投资少见效快，是农村农业产业结构调整中具有前景的项目。但由于草莓很容易感染多种病毒病，感染了病毒病的草莓果子一年比一年小、畸形，品质差，叶子皱，生长缓慢，产量越来越低，并逐年加重，草莓的经济效益大幅度下降，严重地阻碍了草莓生产的发展，然而对病毒病目前还没有药剂可以防治，只有通过培育无病毒苗木用于栽培生产，因此研究脱毒技术具有重要意义。

1 试验材料

试验品种为感病严重的圆球品种，材料来源为东北农业大学园艺试验站果园。

2 试验方法

2.1 茎尖培养

6～7月份在田间随机选取草莓茎尖，首先用自来水冲洗3～4遍。再用蒸馏水冲洗2～3遍，然后用70%酒精浸泡30s，0.1%的升汞浸泡8min左右，再用无菌水冲洗2遍，即可接种到生长培养基MS+1mg/L BA+0.2mg/L IAA上，培养2～4周，转移到分化培养基MS+2mg/L BA+0.1mg/L IAA上，分化一定数量以后即可移到生根培养基MS+ 0.2mg/L IBA上进行生根。

(1)不同取材长度的处理。将田间随机取回的草莓茎尖，经过杀菌处理以后，分别切取0.3、0.5、1、2、3mm 5个长度，接种到生长培养基上。

(2)不同取材次数的处理。将1、2、3mm长的茎尖接种以后，待长成试管苗时，再分别切取1、2、3mm长的茎尖，重复接种2～3次，比较不同取材次数对脱毒效果的影响。

(3)药剂处理。将草莓茎尖切取1mm长，接种在添加不同浓度盐酸四环素的生长培养基中。所用四环素为医用盐酸四环素，每升培养基分别添加0.5、1、2g药剂。

2.2 花药培养

5月末6月初，当田间生长的圆球草莓花蕾直径达到4～6mm时，随机取回，然后用自来水冲洗2～3次，用70%酒精浸泡30～50s，用升汞浸泡8～9min，然后用无菌水充分冲洗，用镊子取出花药接种在添加不同激素浓度的培养基上进行愈伤组织诱导，4周左右，将产生的愈伤组织转移到添加不同激素浓度的LS培养基上进行茎叶分化，整个培养温度为25～28℃，光照时间为8h，光强为2000 lx，分化出茎叶以后，再转移到MS+2mg/L BA+0.1mg/L IAA的分化培养中继续分化，达到一定数量以后转移到生根培养基MS +0.2mg/L IAA上进行生根。

2.3 幼叶培养

将田间没有展开的圆球幼叶，随机取下后放入盛水的烧杯中，然后用自来水冲洗2～3次，再用蒸馏水冲洗2～3次，用70%酒精冲洗一次，用20倍漂白杀菌7～8min，用无菌水充分冲洗，然后用刀片切成3mm的方块，接种到添加不同激素浓度的LS培养基上进行愈伤组织的诱导和茎叶分化，比较不同激素浓度对愈伤组织的诱导及茎叶分化的影响。

2.4 茎尖愈伤组织的诱导及分化培养

将茎尖切取0.5mm左右的长度接种在MS+2mg/L BA+0.5mg/L IAA的培养基上，4～6天在基部便产生大量的愈伤组织，再把愈伤组织切下来，重新接种到MS+2mg/L BA+0.5mg/L IAA的培养基上，即可分化出大量植株，最后转移到生根培养基MS +0.2mg/L IBA上进行生根。

2.5 加热处理

将圆球的茎尖切取3mm长接种到生长培养基上，培养成试管苗以后，再放在JT75-2型隔水式恒温培养箱中，温度分别为35±1℃和38±1℃，光照用日光台灯，每天光照10h，光强为1000 lx，分别处理2～4周，每一处理取出后再分成两组，一组直接转移到生长培养基中，另一组再切取1mm长的茎尖接种到生长培养基上，成苗以后进行脱毒效果的比较。

2.6 试管苗的移栽与管理

2月份，当试管苗在生根培养基中生出大量白色新根时，栽植在温室的播种箱中，箱的下部放上肥沃的土壤，上覆1cm左右的细沙，15～20℃的温度下生长30～40天，即可移栽在花盆中，4月份，当苗在花盆中长到具有5～6片成熟叶片时，进行嫁接鉴定，检验脱毒效果。

3 结论

经过几种脱毒方法的比较，结论为草莓脱毒最好的方法为花药培养，因为花药培养可以100%脱毒，所以可以省去病毒鉴定的工序。其培养基为，愈伤组织诱导：LS+2mg/L BA+0.5mg/L NAA，诱导率可达92.8%，不定芽的诱导LS+2mg/L BA+0.3mg/L NAA，分化率10%，生根培养：MS+0.2mg/L IBA，生根率100%。

通过茎尖培养可以脱掉病毒，获得无毒植株，但不是一般的茎尖培养都能脱毒，只有接种的茎尖小于0.5mm时，才能达到20%以上的脱毒效果。而且接种的茎尖牙越小脱毒效果越好，重复切取茎尖的次数越多，脱毒效果越好，茎尖培养与药剂处理相结合对脱毒有一定效果，每升培养基添加0.5～2g盐酸四环素均可达到20%的脱毒效果，茎尖培养与热处理相结合比单独茎尖培养脱毒效果好，单独接种3mm长的茎尖没有脱毒效果，但如果用38±1℃的温度处理2周，即有20%脱毒，处理3周脱毒率可达60%，而且用38±1℃处理2周，再切取1mm长的茎尖接种脱毒率可达40%，而用35±1℃的温度处理3～4周均没有脱毒效果。因此，如果采用茎尖培养脱毒我们认为应切取0.3～0.5mm长的草莓茎尖接种，或者是用较大的材料接种培养成试管苗，再用38±1℃的温度处理2周，然后再切取1mm长的茎尖培养，两者均能达到一定的脱毒效果，但必须经过病毒鉴定后，获得无毒母株，才能用于生产。幼叶培养和茎尖愈伤组织途径脱毒效果均为20%，与0.5mm长的茎尖培养效果差不多。