红凤菜地上部分的化学成分

陈 剑, MANGELINCKX Sven, 李维林, 王峥涛, De KIMPE Norbert

〔1. 江苏省·中国科学院植物研究所(南京中山植物园) 江苏省抗糖尿病药物筛选技术服务中心, 江苏 南京 210014;2. 根特大学生命科学工程学院, 根特 9000; 3. 中国药科大学生药学教研室, 江苏 南京 210009〕

红凤菜〔Gynurabicolor(Willd.) DC.〕为菊科(Compositae)菊三七属(GynuraCass.)植物，又名观音苋和补血菜等。红凤菜是传统山野菜，营养丰富，在东亚一些国家(如中国和日本)常用于制作蔬菜沙拉和天麸罗等供食用；而且在中国南方的部分地区还将其作为治疗糖尿病的草药[1]。据记载[2]，红凤菜全草可入药，味甘、辛，性凉，具有凉血止血、清热消肿的功效；内服治咳血、血崩、痛经、血气痛、支气管炎、盆腔炎、中暑和阿米巴痢疾；外用治创伤出血、溃疡久不收口、疗疮痈疖和甲沟炎等。

目前，对红凤菜化学成分的研究报道较少，Shimizu等分别报道了其挥发性成分[3-4]及3个花色苷成分[5]。为进一步明确红凤菜的活性成分，合理利用和开发该植物资源，作者对其地上部分的化学成分进行了分离和鉴定。

1 材料和方法

1.1 材料

实验用红凤菜地上部分(叶和茎)于2010年7月采自南京中山植物园内，由江苏省·中国科学院植物研究所任冰如研究员鉴定。

实验用主要仪器和试剂包括：X-6显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限公司)；JEOL Eclipse 300 MHz核磁共振仪(日本电子株式会社)；Agilent 1100 LC-MSD高效液相色谱质谱联用仪(美国安捷伦公司)；Grace RevelerisTM全息快速纯化闪速色谱系统(美国格雷斯公司)；Agilent Preparative-HPLC 1100制备型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；柱层析硅胶和薄层色谱硅胶板均购自美国格雷斯公司；LiChroprep RP-18反相C-18填料(40～63 μm)购于德国Merck公司； Sephadex LH-20葡聚糖凝胶填料购于美国GE医疗公司；MCI GEL CHP20P购于日本三菱化学株式会社；HPLC使用试剂为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.2 方法

红凤菜地上部分经晒干后称取2.9 kg，用体积分数80%乙醇于70 ℃回流提取2次，减压回收溶剂后得浸膏295 g。浸膏经硅胶拌样后依次用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇加热回流提取，减压回收溶剂后分别得到正己烷提取物0.8 g、二氯甲烷提取物3.4 g、乙酸乙酯提取物7.7 g和甲醇提取物121.3 g。

用硅胶柱层析对二氯甲烷提取物进行进一步分离，以二氯甲烷-甲醇混合液(体积比100∶1～90∶10)梯度洗脱得到6个组分(B1～B6)；组分B1经反相硅胶柱层析，以水-甲醇混合液(体积分数20%～100%)梯度洗脱得到4个组分(B1-1～B1-4)。其中，组分B1-2经全息快速纯化闪速色谱系统分离得到化合物1(7.3 mg)；组分B1-1经MCI胶柱层析，水-甲醇混合液(体积分数20%～100%)梯度洗脱后的流分经硅胶柱层析再次纯化，用二氯甲烷-甲醇混合液(体积比100∶1～90∶10)梯度洗脱，最后通过制备型高效液相色谱分离分别得到化合物2(5.4 mg)和化合物3(6.7 mg)；组分B1-3经MCI胶柱层析色谱分离，再经硅胶柱层析纯化后分别得到化合物4(3.1 mg)和化合物5(2.8 mg)。

乙酸乙酯提取物经反相硅胶柱层析，以水-甲醇混合液(体积分数20%～100%)梯度洗脱得到5个组分(C1～C5)。其中，组分C2反复经全息快速纯化闪速色谱系统分离得到化合物6(13.6 mg)；组分C3反复经全息快速纯化闪速色谱系统纯化以及葡聚糖凝胶(LH-20)柱层析分离得到化合物7(12.5 mg)和化合物8(6.3 mg)。

结合MS和NMR数据并参考相关文献，对化合物1～8进行结构鉴定。

2 实验结果

化合物1： 无色油状物；ESI-MSm/z：126.9[M+H]+。1H-NMR(DMSO-d6， 300 MHz)δ： 4.49(2H， d，J=6.0 Hz， CH2OH)，6.59(1H，d，J=3.8 Hz，H-4)，7.48(1H，d，J=3.3 Hz，H-3)，9.53(1H，s，CHO)。13C-NMR(DMSO-d6，75 MHz)δ：178.6(CHO)，162.8(C-5)，152.3(C-2)，125.0(C-4)，110.3(C-3)，56.5(CH2OH)。以上数据与文献[6]报道的一致，鉴定此化合物为5-羟甲基糠醛〔5-(hydroxymethyl) furfural〕。

化合物2：白色粉末；mp：118 ℃～119 ℃；ESI-MSm/z：121.3[M-H]-。1H-NMR(CDCl3，300 MHz)δ：7.46-7.52(2H，m，Harom)，7.60-7.65(1H，m，Harom)，8.12(2H，d，J=7.2 Hz， Harom)。13C-NMR(CDCl3， 75 MHz)δ： 171.7(COOH)， 133.9(C-4)，130.3(C-2,6)，129.3(C-1)，128.6(C-3,5)。综合以上数据并与文献[7]比对，鉴定此化合物为苯甲酸(benzoic acid)。

化合物3：白色粉末；mp：108 ℃～109 ℃；ESI-MSm/z：121.3[M-H]-。1H-NMR(MeOH-d4， 300 MHz)δ： 6.89(2H，d，J=8.3 Hz，H-3，5)，7.76(2H，d，J=8.8 Hz，H-2,6)，9.74(1H，s，CHO)。13C-NMR(MeOH-d4，75 MHz)δ： 190.9(CHO)，161.4(C-4)，132.4(C-2，6)，130.1(C-1)，116.0(C-3，5)。综合以上数据并与文献[7]比对，鉴定此化合物为4-羟基苯甲醛(4-hydroxybenzaldehyde)。

化合物4：白色粉末；mp：210 ℃～211 ℃；ESI-MSm/z：167.3[M-H]-。1H-NMR(MeOH-d4， 300 MHz)δ： 3.90(3H， s， OCH3)， 6.84(1H， d，J=8.3 Hz，H-5)， 7.55(1H，d，J= 1.8 Hz， H-2)， 7.56(1H， dd，J=8.3， 1.8 Hz， H-6)。13C-NMR(MeOH-d4，75 MHz)δ： 170.0(COOH)，152.7(C-4)， 148.7(C-3)，125.2(C-6)，123.0(C-1)，115.8(C-2)，113.7(C-5)，56.4(OCH3)。综合以上数据并与文献[8]比对，鉴定此化合物为香草酸(vanillic acid)。

化合物5：白色粉末；mp：202 ℃～203 ℃；ESI-MSm/z：199.0[M+H]+。1H-NMR(DMSO-d6， 300 MHz)δ： 3.78(6H， s，2×OCH3)，7.17(2H，s，H-2，6)，9.12(1H，s，OH)，12.58(1H， s， COOH)。13C-NMR(DMSO-d6， 75 MHz)δ： 167.2(COOH)，147.5(C-3， 5)， 140.3(C-4)， 120.5(C-1)， 107.0(C-2，6)，56.1(2×OCH3)。综合以上数据并与文献[9]比对，鉴定此化合物为丁香酸(syringic acid)。

化合物6：白色粉末；mp：209 ℃～210 ℃；ESI-MSm/z：137.3[M-H]-。1H-NMR(MeOH-d4， 300 MHz)δ： 6.71(2H， d，J=8.3 Hz，H-3，5)，7.77(2H，d，J=8.3 Hz，H-2，6)。13C-NMR(MeOH-d4，75 MHz)δ： 169.0(COOH)，161.9(C-4)，131.7(C-2，6)，121.7(C-1)，114.7(C-3，5)。综合以上数据并与文献[8]比对，鉴定此化合物为4-羟基苯甲酸(4-hydroxybenzoic acid)。

化合物7：白色粉末；mp：194 ℃～195 ℃；ESI-MSm/z：153.3[M-H]-。1H-NMR(MeOH-d4，300 MHz)δ： 7.34(1H，s，H-2)，7.32(1H，dd，J=7.2，1.7 Hz，H-6)，6.69(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)。13C-NMR(MeOH-d4，75 MHz)δ： 168.9(COOH)，150.2(C-4)，144.8(C-3)，122.6(C-6)，121.7(C-1)，116.4(C-2)，114.4(C-5)。综合以上数据并与文献[8]比对，鉴定此化合物为原儿茶酸(protocatechuic acid)。

化合物8：黄色粉末；mp：267 ℃～268 ℃；ESI-MSm/z：287.3[M+H]+。1H-NMR(DMSO-d6，300 MHz)δ： 12.48(1H，s，5-OH)，10.80(1H， brs， 3′-OH)，10.12(1H， brs， 7-OH)，9.42(1H，brs，3-OH)，8.04(2H，d，J=9.4 Hz，H-2′，6′)，6.91(2H， d，J=8.8 Hz， H-3′，5′)，6.42(1H，d，J=1.7 Hz，H-8)，6.18(1H， d，J=2.2 Hz， H-6)。13C-NMR(DMSO-d6，75 MHz)δ： 176.4(C-4)，164.5(C-7)，161.3(C-9)，159.8(C-4′)，156.7(C-5)，147.3(C-2)，136.2(C-3)，130.1(C-2′，6′)，122.2(C-1′)，116.0(C-3′，5′)，103.5(C-10)，98.8(C-6)，94.0(C-8)。综合以上数据并与文献[10]比对，鉴定此化合物为山柰酚(kaempferol)。

应用多种色谱分离纯化技术并用体积分数80%乙醇提取红凤菜地上部分，从其二氯甲烷提取物和乙酸乙酯提取物中分离得到8个化合物，化合物1～5和化合物7均为首次从该植物中分离得到。从化合物类型来看，以酚酸类化合物(化合物2～7)为主，表明红凤菜的药用活性可能与该类成分有关。本文的研究结果可为红凤菜药用功效(抗炎和止血等方面)的开发利用提供参考依据。

参考文献：

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