大叶紫珠醇溶性成分的研究

金晓东，张 杰，顾正兵*

(1.中国人民解放军第一六一医院药械科，湖北武汉 430010;2.江苏永健医药科技有限公司，江苏泰州 225300)

大叶紫珠Callicarpa macrophylla Vahl为马鞭草科紫珠属植物，是《中国药典》2010年版一部新增品种，具有散瘀止血、消肿止痛的功效［1］。目前国内外关于大叶紫珠化学成分的研究较少，Singh等［2］用GC/MS法对大叶紫珠的叶子和果实中提取的挥发油进行了研究，表明挥发油中含有丰富的芹子烯类化合物。潘萍等［3］对其脂溶性成分(乙酸乙酯部位)进行了研究，分离得到了4个萜类成分和2个甾醇化合物，但未对醇溶性成分进行研究;Lu等［4］从其水溶部分分离得到4个酚酸类化合物，但未得到黄酮类化合物;周嵩煜等［5］从其水溶性部分仅分离得到一个主要成分，鉴定为毛蕊花糖苷。《中国药典》2010年版规定以毛蕊花糖苷作为大叶紫珠的质控指标，而许多中药如肉苁蓉、鲜地黄等药材均含有毛蕊花糖苷，且毛蕊花糖苷含有量很高，显然以毛蕊花糖苷作为其指标性成分不具特征性，不能全面的控制此药材的质量及合理开发该药。为了更好地探究其药效物质基础，寻找其止血活性成分，本研究对大叶紫珠水溶性成分进行了系统的研究。

1 仪器与试药

核磁共振仪 (Varian INOVA-400型，TMS为内标)，制备型高效液相色谱仪 (Waters Delta Prep 4000，VWD)Sephadex LH-20(美国 GE公司)，薄层色谱及柱色谱用硅胶 (青岛海洋化工有限公司)。液相用甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

大叶紫珠药材来源于贵州省顺义，经嘉兴学院医学院王峻副教授鉴定为Callicarpa macrophylla Vahl的茎叶。

2 提取与分离

取大叶紫珠的干燥叶10 kg，剪碎，以70%的甲醇回流提取3次 (每次15倍量，提取2 h)。合并提取液并减压浓缩得到甲醇提取物，将甲醇提取物分散于水中成悬浊液，依次用石油醚-乙酸乙酯(1∶1)、正丁醇萃取，浓缩得到石油醚-乙酸乙酯(1∶1)部分 (385.4 g)和正丁醇部分 (264.5 g)。正丁醇部分经硅胶柱色谱粗分，依次用石油醚-乙酸乙酯 (5∶1～2∶1)(分离低极性部分)、乙酸乙酯-甲醇 (10∶1～2∶1)(中极性部分)、乙酸乙酯-甲醇-水 (高极性部分)梯度洗脱，得到9个流份 (Fr.1～Fr.10)。由于色素较多以及高极性部分分离效果差，将Fr.4-7合并后以三氯甲烷-甲醇-水梯度洗脱，薄层检测，得到5个流份。各部分再反复经Sephadex LH-20色谱柱以及制备液相分离纯化得到化合物1(32.0 mg)，2(101.4 mg)，3(82.4 mg)，4(105.3 mg)，5(129.1 mg)，6(202.4 mg)。

3 结构鉴定

化合物1:黄色粉末 (甲醇)，易溶于水。EIMS显示分子离子峰为610，结合1H-NMR和13CNMR谱确定分子式为C27H30O16。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:12.54(1H，s，5-OH)，6.42(1H，s，H-6)，6.49(1H，s，H-8)，7.70(1H，s，H-2')，6.90(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.55(1H，d，J=8.4 Hz，H-6')，5.05(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，4.55(1H，s，H-1″')，1.11(3H，d，J=6.4 Hz，H-6″')。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:147.58(C-2)，136.42(C-3)，176.22(C-4)，160.38(C-5)，98.88(C-6)，162.74(C-7)，94.42(C-8)，155.81(C-9)，104.90(C-10)，121.96(C-1')，115.80(C-2')，145.20(C-3')，147.84(C-4')，115.49(C-5')，120.22(C-6')，100.65(C-1″)，73.27(C-2″)，76.44(C-3″)，69.76(C-4″)，75.74(C-5″)，66.20(C-6″)，100.15(C-1″')，70.93(C-2″')，70.44(C-3″')，72.22(C-4″')，68.42(C-5″')，17.86(C-6″')。以上数据与文献 ［6-7］对照基本一致，鉴定为槲皮素-7-O-芸香糖苷 (quercetin-7-O-rutinoside)，首次从该植物中分离得到。

化合物2:黄色无定型粉末 (甲醇)，1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:6.45(1H，s，H-6)，6.72(1H，s，H-3)，6.78(1H，s，H-8)，6.91(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，7.44(1H，s，H-6')，7.42(1H，s，H-2');12.95(1H，s，H-5)，5.07(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，另外在 δ:9.0 ～10.0之间有两个酚羟基信号。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:157.05(C-2)，103.30(C-3)，181.95(C-4)，161.25(C-5)，99.71(C-6)，164.60(C-7)，94.90(C-8)，121.55(C-1')，113.70(C-2')，145.88(C-3')，150.041(C-4')，116.12(C-5')，119.25(C-6')，99.71(C-1″)，73.27(C-2″)，76.50(C-3″)，69.78(C-4″)，77.30(C-5″)，60.82(C-6″)。以上数据与文献 ［8］ 对照基本一致，鉴定为木犀草苷 (luteoloside)。

化合物 3:黄色粉末(甲醇)，1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ:6.74(1H，s，H-3)，6.39(1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，6.72(1H，s，H-8)，7.43(1H，s，H-2')，6.91(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，7.45(1H，s，H-6')，5.24(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，4.61(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″')，3.20～3.90(m，糖基氢)，1.12(3H，d，J=6.4Hz， rha-CH3)。13C-NMR(100MHz，CD3OD)δ:164.63(C-2)，181.95(C-4)，161.30(C-5)，162.67(C-7)，157.10(C-9)，121.55(C-1')，113.68(C-2')，145.90(C-3')，150.04(C-4')，116.18(C-5')，119.26(C-6')，99.46(C-1″)，77.34(C-2″)，77.14(C-3″)，69.90(C-4″)，76.57(C-5″)，60.71(C-6″)，100.60(C-1″')，70.54(C-2″')，70.68(C-3″')，72.07(C-4″')，68.44(C-5″')，18.14(C-6″')。与文献 ［9-10］报道木犀草素-7-O-新橙皮糖苷数据一致，鉴定为木犀草素-7-O-新橙皮糖苷 (luteolin-7-O-neohesperidoside)，首次从该植物中分离得到。

化合物 4:黄色针晶(甲醇)，1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ:6.21(1H， d， J=2.0 Hz，H-6)，6.41(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，7.56(1H，s，H-2')，6.85(1H，d，J=8.8 Hz，H-5')，7.57(1H，d，J=8.8 Hz，H-6')，5.44(1H，d，J=8.8 Hz，H-1″)，12.61(1H，s，OH-5)，10.42(1H，s，OH-7)，9.60(1H，s，OH-3')，9.10(1H， s， OH-4')。13C-NMR(100MHz，CD3OD)δ:156.45(C-2)，133.51(C-3)，177.55(C-4)，161.35(C-5)，98.75(C-6)，164.22(C-7)，93.60(C-8)，156.33(C-9)，104.11(C-10)，121.68(C-1')，116.32(C-2')，144.89(C-3')，148.54(C-4')，116.35(C-5')，121.31(C-6')，101.14(C-1″)，74.23(C-2″)，76.66(C-3″)，70.14(C-4″)，77.59(C-5″)，61.14(C-6″)与文献［11］报道异槲皮苷数据一致，鉴定该化合物为异槲皮苷 (isoquercitrin)，首次从该植物中分离得到。

化合物5:浅黄色针状结晶 (甲醇)，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:6.52(1H，d，J=16.4 Hz，H-2)，8.12(1H，d，J=16.4 Hz，H-3)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:170.97(C-1)，125.84(C-2)，157.54(C-3)，119.65(C-1')，141.46(C-2')，117.08(C-3')，132.78(C-4')，123.65(C-5')，128.86(C-6')，102.47(C-1″)，74.91(C-2″)，78.19(C-3″)，71.37(C-4″)，78.26(C-5″)，62.39(C-6″)。以上数据与文献 ［12］ 对照基本一致，鉴定为反式草木樨苷 (trans-melilotoside)，为首次从该植物中分离得到。

化合物 6:白色无定型粉末，1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:6.91(1H，d，J=16.0 Hz，H-α')，7.46(1H，d，J=16.0 Hz，H-β')，4.35(1H，d，J=8.0 Hz，H-1″)，5.04(1H，s，H-1″')。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:129.38(C-1)，116.46(C-2)，145.12(C-3)，143.67(C-4)，115.63(C-5)，119.68(C-6)，70.68(C-α)，35.15(C-β)，125.71(C-1')，114.88(C-2')，145.61(C-3')，148.59(C-4')，115.95(C-5')，121.50(C-6')，113.82(C-α')，145.71(C-β')，165.80(C-γ')，102.41(C-1″)，74.68(C-2″)，79.26(C-3″)，69.39(C-4″)，74.68(C-5″)，60.93(C-6″)，101.30(C-1″')，70.60(C-2″')，70.33(C-3″')，71.89(C-4″')，68.82(C-5″')，18.23(C-6″')。以上数据与文献 ［13-14］对照基本一致，鉴定为类叶升麻苷 (acteoside)。

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