RP-HPLC法测定创灼膏中延胡索乙素的含量

周春华 白 冰 张 颖 赵 俞 马 莉

（吉林修正药业新药开发有限公司，吉林 长春 130012）

RP-HPLC法测定创灼膏中延胡索乙素的含量

周春华 白 冰 张 颖 赵 俞 马 莉

（吉林修正药业新药开发有限公司，吉林 长春 130012）

目的建立以高效液相色谱法测定创灼膏中延胡索乙素含量的方法。方法色谱柱为Khim-pack shimadzu C18柱，流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液（20∶80），流速为1 mL/min，检测波长为280 nm。结果延胡索乙素浓度在5～50 μg/mL范围内的线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为98.0%（RSD=1.07%）。结论方法简便易行，准确率高，重现性好，为本品的质量控制提供了可靠的方法。

高效液相色谱法；创灼膏；延胡索乙素；含量测定

创灼膏是以炉甘石，石膏、白及、冰片、苍术、延胡索、防己、郁金、虎杖、地榆等药材组成的中成药，方中延胡索为本品的主要成分之一，具有活血、行气、止痛等作用。本品以延胡索乙素为测定指标，建立以高效液相色谱（HPLC）法测定延胡索中有效成分延胡索乙素的含量[1-3]。

1 仪器与试药

1.1 仪器：①高效液相色谱仪LC-2010A紫外检测器（日本岛津）；②高效液相色谱仪Agilent Technologies 1200 Series；③紫外分光光度计UV-2401PC（日本岛津）；④Meltter AE240双量程电子天平（梅特勒—托利多仪器有限公司）。

1.2 试药：对照品来源：延胡索乙素对照品（批号：110726-200711，规格：约20 mg）从中国药品生物制品检定研究院购入。试剂：乙腈、甲醇为色谱纯；磷酸、氨水为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.2%磷酸溶液（20∶80）为流动相；检测波长为280 nm，柱温30 ℃，流速1 mL/min，理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备：精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每1 mL约含延胡索乙素20 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备：取本品2 g，精密称定，精密加甲醇-氨试液（20∶1）的混合溶液50 mL，称定重量，冷浸1 h后加热回流1 h，放冷，再滤过精密称定，用甲醇-氨试液（20∶1）的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25 mL，蒸干，残渣加甲醇溶液解，转移至10 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.4 检测波长选择：精密称取延胡索乙素对照品10.22 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，另取上述对照品溶液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。于200～400 nm波长下测定光谱图，结果在280 nm处有最大吸收峰，故检测波长选定为280 nm。

2.5 线性关系考察：分别量取对照品溶液适量，加甲醇分别制成每1 mL含5、10、20、30、50 μg的溶液，分别精密吸取上述对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标（Y），以浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，求出回归方程（960.73x-3.5698）和r值（r=0.9999），结果表明：延胡索乙素在5～50 μg/mL的浓度范围内呈良好的线性关系

2.6 专属性试验：取按处方比例缺延胡索的阴性对照样品，按含量测定项下方法测定HPLC色谱图。同法测定延胡索乙素对照品及供试品的HPLC色谱图。结果阴性对照样品的色谱图中，在延胡索乙素保留时间的相应位置上无色谱峰出现，表明阴性对照无干扰，此方法专属性强。

2.7 稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样10 µL，记录色谱图，以供试品溶液中延胡索乙素的吸收峰面积的变化，考察其稳定性。结果峰面积值的RSD=1.18%，表明供试品溶液中延胡索乙素在12 h之内稳定。

2.8 重复性：取本品同一批号样品6份，按含量测定项下方法测定延胡索乙素的含量，结果延胡索乙素的平均含量为52.15 µg/g，RSD=1.16%，表明该含量测定方法重复性较好。

2.9 中间精密度试验：取同一批供试品，由不同人员，不同时间，使用不同高效液相色谱仪，按含量测定项下方法测定延胡索乙素含量。结果延胡索乙素的平均含量为52.06 µg/g RSD=1.26%，表明样品含量测定方法具有良好的精密度。

2.10 回收率试验：取已知含量供试品6份，约1.0 g，分别置于6只锥形瓶中，按低、中、高浓度分别加入延胡索乙素对照品溶液，每一浓度2份，按含量测定项下方法测定含量，计算回收率。结果样品中延胡索乙素的回收率平均可达98.0%以上，RSD＝1.07%，表明此方法准确、可行。

2.11 样品含量测定：取供试品5批，按含量测定项下方法操作，测定样品中的延胡索乙素含量，结果含量分别为52.16、52.08、53.16、55.28、53.76 µg/g，平均含量为53.28 µg/g。

3 讨 论

3.1 流动相的选择

通过对甲醇-0.1%的磷酸（用三乙胺调PH6）（55∶45）、与乙腈-0.2%磷酸（用三乙胺调PH6）（20∶80）两种流动相进行比较，结果以乙腈-0.2%磷酸（用三乙胺调PH6）（20∶80）为流动相分析的样品，有机溶剂用量少，分离度好，理论塔板数高。

3.2 提取方法的选择

采用以下两种方法对本品进行提取：方法1：取本品，加甲醇-氨试液（20∶1）的混合溶液加热回流1 h，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；方法2：取本品，加甲醇-氨试液（20∶1）的混合溶液超声处理1 h，放冷，滤过，滤液，作为供试品溶液，分别取上述两种供试液测定含量，结果超声提取的含量明显低于回流提取样品的含量，故回流提取方法作为本品的提取方法。

[1] 邱颖.RP-HPLC法测定十味活血丸中含量测定胡索乙素的含量[J].海峡药学,2012,24(2):41-42.

[2] 黄明立,黄东萍.RP-HPLC法测定复方金蒲片中延胡索乙素的含量[J].中国医药信息杂志,2010,17(8):45-46.

[3] 赵辉,方步武.高效液相色谱法测定金铃子散中延胡索乙素的含量[J].中国医院药学杂志,2009,29(21):1886-1887.

R284；R917

B

1671-8194（2014）22-0089-01