某地区人乳头瘤病毒的基因型分布

袁爱萍 张 萍

（上海市松江区妇幼保健院宫颈科，上海 201600）

某地区人乳头瘤病毒的基因型分布

袁爱萍 张 萍

（上海市松江区妇幼保健院宫颈科，上海 201600）

目的了解上海市松江地区人乳头瘤病毒（HPV）基因型在宫颈疾病的感染状况及其各亚型的分布。方法运用凯普导流杂交HPV DNA检测法对上海松江地区2012年1042例宫颈门诊就诊患者进行21种HPV基因型的分型检测，分析常见感染亚型和分布特点。结果研究人群HPV总阳性率51.06%，常见的10种高危型HPV16、58、52、33、53、CP8304、31、66、18、39。常见的2种低危型为6、11。多重感染的比例为33.95%，其中以二重感染最多见。结论该地区HPV感染率和多重感染率均较高，常见感染亚型总体符合亚洲人群的分布规律，又有独特的区域分布特点，值得重视。

乳头状瘤病毒；导流杂交；基因型；宫颈肿瘤

宫颈癌是最常见的女性生殖道肿瘤，在全球妇女癌症病死率中仅次于乳腺癌，中国病例占世界1/3，目前依然严重威胁着中国妇女的健康，近年来我国宫颈癌发病呈年轻化趋势，宫颈癌早期患者比例明显增多。HPV是宫颈癌及宫颈癌前病变的主要病因，已列为许多国家宫颈癌及癌前病变常规筛查指标，其分型检测对宫颈癌的筛查及治疗意义深远。2012年美国宫颈癌筛查新指南提出：30岁以上妇女HPV联合细胞学筛查为首选[1]。使用高危型HPV DNA初筛检测可检出90%以上CIN2/3或癌症，当细胞学以交界性或更严重改变为截断点时，高危型HPV检测的敏感度比细胞学高25%左右。这对宫颈疾病的初筛、ASCUS分流及治疗追踪都具有重要意义[2]。更说明HPV筛查宫颈癌的意义越来越重大。而且HPV DNA检测通常具有97%～100%的阴性预测值。较高的阴性预测值意味着，如果HPV DNA为阴性，几乎没有患病的可能。HPV感染在有性生活史的女性中具有普遍性，但持续的HPV感染与宫颈病变及宫颈癌发生相关。HPV是一种小环状双链DNA病毒，目前世界上已发现110多型。荷兰的随机对照研究发现：不同型别HPV有不同的清除率，显示高危HPV分型是有价值的。高危型HPV与宫颈癌及癌前病变的发生相关[3]。从感染HPV到发展成宫颈癌需要9～25年时间，对HPV分型检测能有效筛查出高危人群并予以随访和干预，防止宫颈癌的发生。故我们运用凯普医用核酸分子快速杂交系统对1042例上海松江妇保医院宫颈门诊患者（包括健康体检人群）进行HPV感染的分型检测，以了解上海松江地区HPV感染的基因型分布，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2012年1月至12月松江妇幼保健医院宫颈门诊就诊患者接受HPV基因型分型检测1042例，年龄21～68岁，平均年龄（37.8±2.5）岁，来自上海松江地区或常住该地区妇女。

1.2 方法HPV DNA基因分型决策

由广东凯普生物有限公司运用膜芯片导流杂交基因分型技术，进行21种HPV分型检测（6、42、43、44、16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304）HPV分型检测采用专用的HPV采样刷，置于宫颈口逆时针方向旋转3～5圈，并停留10秒以上，立即浸入专用的标本储存管，及时送检。检出16中高危亚型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68及CP8304），另有HPV6、11、42、43和44等5中低危亚型。有2型或2型以上者为多重感染。实验步骤如下：①样本DNA提取。采用凯普生物化学科技公司的基因组抽屉试剂盒。②PCR扩增。

每一批同时扩增HPV18型阳性对照和阴性对照各1份。反应条件为95 ℃，9 min，95 ℃， 20 s，55 ℃，30 s，72 ℃，30 s扩增40个循环，72 ℃延伸5 min。③导流杂交（采用医用核酸分子快速杂交仪及配套试剂盒，具体步骤参见杂交试剂盒说明书。④结果判断（根据芯片上HPV基因型分布的相应位点判断为何种基因型）

2 结 果

2.1 HPV DNA基因型检测

共检测到20种基因型，未发现低危型亚种43型。

2.2 HPV DNA基因型分布

各亚型感染率分布从高到低依次为16型170例、58型110例、52型111例、33型58例、53型51例、31型49例、CP8304型47例、68型42例、66型34例、18型32例、6型23例、56型17例、39型17例、45型16例、11型16例、51型11例、35型10例、42型7例、59型5例、44型4例。

2.3 HPV的单一和多重感染

单一感染370例、二重感染133例、三重感染39例、四重感染15例、五重感染3例。

3 讨 论

宫颈癌是较常见的妇科恶性肿瘤之一，据统计全球每年的宫颈癌新发病例约46万，每年宫颈癌的死亡病例约25万。在我国，每年宫颈癌的新发病例数超过13万，约占全球的1/4～1/3，发病率仅次于乳腺癌而位居第二，并呈年轻化及上升趋势。高危型别HPV感染的妇女中有相当一部分可发展成子宫颈癌前病变，因此定期检查高危型HPV感染能有效地判断子宫颈癌的发病风险。

我们采用的凯普核酸分子快速杂交基因分型技术，既能确定感染的HPV亚型，又能判断多重感染，可以对CIN治疗后进行预后判断和治疗监测。该技术建立在基因芯片和导流杂交技术基础之上，其特点就是灵敏、特异、简便快速等[4，5]。我们对1042例标本的HPV分型检测，有如下发现：

3.1 常见的HPV基因型存在地理差异

高危型HPV持续感染是宫颈癌及癌前病变发生发展的必要条件，HPV基因型分布有地区差异，与宫颈癌相关的型别也不尽相同。除16型居首位以外，其余型别不同的地区略有差异[6]。在全球范围内，前10位分别是HPV16、18、58、52、51、31、56、33、45、53。廖京平[7]对北京大学第一医院报道门诊人群中HPV16、58和52是这一人群中最常见的HPV型别，本组调查与其相一致。毕蕙等[8]对CIN患者HPV亚型检测居前5位的依次为16、58、52、33和31。彭永排等[9]对广州市1285例志愿者宫颈人乳头瘤病毒感染调查显示前5位的HPV亚型是52、31、16、58和53型。蒋卫平等[10]对浙江丽水地区288例HPV感染检出居前5位的依次是16、58、52、33、53，其余的感染率均低于10%。周杨杨[11]对江苏淮安门诊患者HPV感染调查为：HPV感染总阳性率55.6%，亚型高低依次为16、58、52、53、33。我们的研究中，病例均来源于上海松江地区，检出率居前5位的依次是16、58、52、33、53，其余的亚型感染率均低于10%。16型感染率最高，没有明显的地区差异，而其他型别的感染率存在较大的地理差异，尤其是18和45型，在国内的报道中感染率均不是很高，HPV18在欧美比较常见，而HPV45在非洲常见，除16型外我们得出58、52、33和53的感染率较高，与毕蕙等[8]报道的基本一致，尤其与蒋卫平等[10]报道的数据非常接近，而其他研究者的结果相差较大，可能与接诊患者不同有关。而上海松江地区与浙江地区较为临近，从而进一步表明常见的HPV感染的基因型存在明显的人群和地域特点。

3.2 HPV多重感染

本研究HPV多重感染的比例为33.93%。根据美国已经公布的数据，这些女性中约有1%将患有CIN2、3。多重HPV感染以HPV16/18亚型为主。不同地区的差异：亚洲国家HPV多重感染组合中16，52，58是最常见的亚型中以HPV16、45、58、18、31、33和52为主[12]。

3.3 我们未检测到低危型43型，可能与这一地区人群本身未感染这一型别HPV，也有可能样本量不够，这一型别感染数极低有关，需进一步研究。明确一个地区 HPV流行的主要型别，对评估患者预后，指导临床制定合理的治疗方案有重要意义；与此同时，还可为科研人员研制有针对性的基因疫苗提供可靠依据，为临床治疗作出有益参考。

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[3] Muno Z,Bosch FX.Epidemiologic classication of human papillomavirus types associated with cervical[J].N Engl J Med,2003,348(6):518-527.

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[6] Bosch FX,Burchell AN.Epidemiology and natural history of human papillomavirus infections[J].Vaccine,2008,26(52):K1-K16.

[7] 廖京平.要真正理解和重视人乳头瘤病毒感染[J].中国实用妇科与产科杂志,2010,26(5):322.

[8] 毕蕙,赵健.人乳头瘤病毒感染亚型与宫颈上皮内瘤变的相关性[J].中国实用妇科与产科杂志,2010,26(5):362.

[9] 彭永排,林仲秋.广州市1285例志愿者宫颈人乳头瘤病毒感染调查[J].国际医药卫生导报,2010,16(1):101.

[10] 蒋卫平.丽水地区人乳头瘤病毒基因的分布[J].现代实用医学, 2009,8(8):21.

[11] 周杨杨.人乳头瘤病毒感染筛查结果分析[J].临床检验杂志,2009, 27(3):221.

[12] 第一届中国凯普HPV学术研讨.HPV多重感染与宫颈病变关系探讨[C].2012.

R737.33

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1671-8194（2014）27-0185-02