依达拉奉注射剂质量标准和稳定性研究

陈楠 盖春燕 陈刚 付宏征

依达拉奉注射剂质量标准和稳定性研究

陈楠 盖春燕 陈刚 付宏征

目的建立依达拉奉注射液的质量标准，并考察其稳定性。方法依达拉奉的含量测定应用HPLC法，检测波长242 nm，理论塔板数以依达拉奉色谱峰计不低于2 000，保留时间为12～15 min;通过pH值、重金属含量、细菌内毒素、无菌检查等对其质量进行控制;通过影响因素试验，加速试验和室温留样观察试验考察注射液的稳定性。结果依达拉奉在1.5～7.5 μg/μl范围内浓度与吸光度成良好线性关系(r=0.9994)，平均回收率为100.02%，RSD=0.96%。3批依达拉奉注射液中依达拉奉的含量分别为标示量的100.73%、98.37%、100.64%。3批依达拉奉注射液的pH值分别为2.8、2.9、2.8。重金属含量、细菌内毒素、无菌检查等符合药典规定。结论该试验方法简单，稳定性高，系统可重复性强，可有效控制依达拉奉注射液的质量并保证其稳定性。

依达拉奉注射液;质量标准;稳定性

依达拉奉是一种新型的治疗脑梗死的脑保护剂，它疗效确切，能抑制自由基引起的脂质过氧化和细胞坏死，有明确的抗脑缺血和脑保护作用，对于治疗脑梗塞病是一个优良的药物。依达拉奉注射液作为一种新型自由基清除剂于2001年4月4日在日本获得以“改善脑梗死急性期伴发的神经症候、日常生活动作障碍、机能障碍”为适应证的临床用药资格，并与2001年6月1日在日本正式上市，用于急性脑梗死的治疗。现在的脑梗死急性期用药主要为除水肿的高涨输液，CDP-胆碱氯酯等脑代谢复活药，或者戊巴比妥等中枢抑制药。还没有直接作用于脑缺血后损伤因素、相关受体等脑保护药，依达拉奉抑制自由基引起的脂质过氧化和细胞坏死，有明确的脑缺血保护作用，成为保护脑免受脂质过氧化损伤的新药，在我国依达拉奉广泛应用于脑出血、脑梗死、脑卒中、颅脑外伤等的治疗，因此，通过有效的质量标准控制其质量和稳定性对于临床安全用药具有重要的意义。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters e2695 Separations Module HPLC(美国Waters公司)，Waters 2998 PAD紫外检测器(美国Waters公司，含真空脱气、高压二元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱)，Empower 2色谱管理系统;旋转蒸发器(巩义市英峪高科仪器厂);DZTW型调温电热套(北京市永光明医疗仪器厂);分析天平(Sartorius CPA225D);超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);InoLab pH720试验室台式酸度计(德国WTW公司)。

1.2 试药 依达拉奉注射液自制(批号:20010425、20010428、20010430 规格:20 ml∶30 mg);乙腈(色谱纯);甲醇(色谱级);双蒸水;其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 依达拉奉注射液中依达拉奉的含量测定

2.1.1 色谱条件和系统适性试验:色谱柱:C18-键合硅胶柱(5 μm)250 mm × 4.6 mm;流动相:乙腈:磷酸盐缓冲液(15∶85)，1.0 ml/min;检测波长:242 nm;进样量:15 μl;保留时间为12～15 min。柱效:按依达拉奉色谱峰计，理论塔板数应不低于2 000［1，2］。含量测定结果见表1。

表1 依达拉奉含量测定结果

2.1.2 线性关系:取依达拉奉对照品约30.0 mg，精密称量，置10 ml容量瓶，甲醇稀释至刻度，精密量取1 ml，以甲醇稀释至 100 ml，再精密量取 1 ml，以甲醇稀释至100 ml，摇匀。精密吸取对照品溶液，50 μl，100 μl，150 μl，200 μl，250 μl用甲醇稀释至 10 ml，分别精密吸取20 μl注入高效液相色谱仪进行分析，测量依达拉奉的峰面积［2，3］。结果表明，以依达拉奉的峰面积(A)对其浓度(C)进行线性回归，在进样量1.5～7.5 μg/ml范围内，依达拉奉峰面积与浓度成良好的线性关系。见表2。

表2 依达拉奉HPLC法测定线性关系试验结果

2.1.3 精密度试验:取 3.0 μg/ml供试液分别连续测定5次，其相对标准偏差为1.27%，结果表明在此浓度下，HPLC 测定的 RSD%小于 2.0%［2，3］。见表 3。

表3 依达拉奉精密度试验结果

2.1.4 加样回收率试验:精密吸取已知含量的同批供试品液0.5 ml共 3份，各加入依达拉奉 3.10 mg，6.20 mg，9.20 mg，依法测定各份样品中依达拉奉的含量并计算回收率，结果平均回收率100.02%，RSD=0.96%［2，3］。见表 4。

2.2 依达拉奉注射液质量标准研究

2.2.1 pH值:参照pH值检查法(《中华人民共和国药典》2010年版二部附录Ⅵ H)。见表5。

表5 依达拉奉注射液的pH值

2.2.2 颜色:参照《中华人民共和国药典》2010版二部附录ⅨE。见表6。

表6 依达拉奉注射液的颜色

2.2.3 重金属测定:依据《中华人民共和国药典》2010版二部附录ⅧH第一法。见表7。

表7 依达拉奉注射液的重金属检查

依达拉奉原料药的重金属的含量极低，在注射液制备和生产过程中，并未引入重金属，故此项不列入质量标准。

2.2.4 细菌内毒素检查:依据《中华人民共和国药典》2010版二部附录ⅪE。见表8。

表8 依达拉奉注射液的细菌内毒素检查

2.2.5 无菌检查:依照《中华人民共和国药典》2010版二部附录ⅪH。见表9。

表9 依达拉奉注射液的无菌检查

2.3 依达拉奉注射液的稳定性研究

2.3.1 影响因素试验:强光照射试验:将样品在光强度为3 500 Lx的日光灯下放置10 d，分别于1、5、10 d各取样1次，按考察项目检查。取本品20010425，分别于40℃、60℃的恒温水浴中放置10 d，于1、5、10 d取样，按考察项目检查［4，5］。依达拉奉注射在各考察条件下均较稳定。见表10。

表10 影响因素试验结果

2.3.2 加速试验:取本品置40℃，放置6个月，于1、2、3、6 个月时间取样测定［4，5］，试验结果表明，40℃ 条件下放置6个月，样品与0月相比无明显变化。见表11。

表11 加速试验结果

2.3.3 室温留样观察试验:将样品置自然室温条件下，并于 1、3、6 个月时抽样测定［4，5］，结果表明:本品在室温留样的半年间质量稳定，考核各项均符合标准规定。见表12。

表12 室温留样观察试验

3 讨论

3.1 色谱条件和系统适性 精密配制10 μg/ml的依达拉奉对照品溶液，通过紫外-可见分光光度法进行扫描，依达拉奉在242 nm的波长处有最大吸收，因而选择242 nm作为依达拉奉的检测波长。乙腈和磷酸盐缓冲液比例15∶85作为流动相，得到的峰形较好、保留时间适宜。精密度实验和加样回收实验证实该方法专属性强、灵敏度高、选择性好、简便、准确，可有效地应用于依达拉奉注射液的质量控制。

3.2 质量标准通过pH值、颜色、重金属含量、细菌和内毒素等标准控制注射液质量，依达拉奉原料药重金属的含量极低，在注射液工艺制备和生产过程中并未引入重金属等相关物质，故此项不列入质量标准。本文所采用的三批样品均符合质量标准草案的要求。

3.3 稳定性影响因素试验，加速试验和室温留样观察试验结果表明:本品在各考察条件下，各项指标均无明显变化，说明本品在室温下有效期可定为2年。

1 国家药典委员会主编.中国药典.第1部.北京:化学工业出版社，2010.

2 付桂英，温明铃，贾立华，等.高效液相色谱法测定依达拉奉注射液的含量及有关物质.解放军药学学报，2006，22:458-460.

3 董继胜，黄利鹏，马歆茹.依达拉奉注射液质量研究.黑龙江医药，2010，23:340-3342.

4 弋金龙，黄翔，何春晓，等.丹红注射液的质量标准及其稳定性研究.中国中医急症，2013，22:864-865.

5 吕应年，龚先玲.半边旗5F注射液的质量标准研究.中药杂志，2008，33:2343-2346.

Study on the quality standard and stability of edaravone injection

CHEN Nan*，GAI Chunyan，CHEN Gang et al.*The First Hospital Affiliated to Beijing University，Beijing 100034，China

ObjectiveTo establish the quality standard of edaravone injection and to investigate its stability.MethodsThe quantitative detection of edaravone injection was performed by HPLC，detection wavelength was 242nm，theoretical plate number based on the chromatogram of edaravone was more than 2000，retention time was12 ～ 15 min.The quality was controlled by pH，contents of heavy metals，bacterial endotoxin and sterility tests.The stability of edaravone injection was evaluated by influence factors test，acceleration test and room temperature storage observation test.ResultsFrom 1.5 to 7.5μg/μl，the concentration and absorbance of edaravone injection had a good linear relationship(r=0.9994)，the average recovery rate was100.02%，and RSD was 0.96%.The pH of three batches injections was 2.8，2.9，2.8，respectively，moreover，the contents of heavy metals，bacterial endotoxin and sterility tests were consistent with pharmacopoeias regulation.ConclusionThe method is simple，accurate，stable and repeatable，which can effectively control the quality of edaravone injection and can assure its stability.

edaravoneInjection;quality standard;stability

R 927.11

A

1002－7386(2014)14－2098－03

10.3969/j.issn.1002 －7386.2014.14.006

100034 北京市，北京大学第一医院(陈楠);北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室(盖春燕、陈刚、付宏征)

付宏征，100034 北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室;Email:drhzfu@sina.com

2014－01－11)