P63 蛋白在宣威与非宣威地区非小细胞肺癌表达的对比研究

刘 君 李高峰 陈 楠 彭 俊 陈新隆 王 平 毛 新 彭 浩 张 勇 向旭东 宁显谷

近些年来我国的肺癌发生率逐年增加，全国肿瘤登记中心发布的《2012 中国肿瘤登记年报》显示，肺癌居全国恶性肿瘤发生率第1 位，病死率第1 位。而云南是癌症高发区之一，云南省的肺癌发生率是全国发生率的两倍。云南宣威地区有地区特异性，其女性肺癌病死率居全国第1 位［1］。

本研究应用免疫组织化学法，研究宣威与非宣威地区非小细胞肺癌P63 蛋白的表达，探讨其与生物学行为的关系，并将宣威组与非宣威组P63 蛋白的表达情况进行比较，以探究P63 的表达在宣威地区有无特异性，探究宣威肺癌高发与P63 的表达是否有关。

材料与方法

1.临床资料:(1)实验组:收集2012 年10 月～2013 年6月云南省第一人民医院(昆明理工大学附属昆华医院)胸外科手术切除的30 例宣威地区非小细胞肺癌患者的癌组织和正常肺组织(正常组织规定为:距癌组织边缘＞5cm)。在30 例患者中，男性16 例，女性14 例，年龄38 ～70 岁，平均年龄55.6 岁;鳞癌13 例，腺癌17 例;Ⅰ期9 例，Ⅱ期15 例，Ⅲ期6例;高分化9 例，中分化14 例，低分化7 例;淋巴结转移阳性的患者16 例，淋巴结转移阴性的患者14 例。(2)对照组:同期30 例非宣威地区非小细胞肺癌患者的癌组织和正常肺组织(正常组织规定为:距癌组织边缘＞5cm)。在30 例患者中，男性14 例，女性16 例，年龄36 ～72 岁，平均年龄56.2岁;鳞癌14 例，腺癌16 例;Ⅰ期10 例，Ⅱ期16 例，Ⅲ期4 例;高分化10 例，中分化12 例，低分化8 例;淋巴结转移阳性的患者13 例，淋巴结转移阴性的患者17 例。每例均有详细的病历资料及手术记录，术前检查所有患者均无远处转移，全部肺癌病例术前均未接受放疗或化疗。

2.方法:所有标本常规取材，甲醛固定，石蜡包埋，3μm 厚连续切片;即用型P63 蛋白鼠抗人单克隆抗体，免疫组化法。细胞质、细胞核出现棕色颗粒为阳性细胞，随机选择4 个高倍视野，计数100 个细胞;其中P63 染色呈深棕色、大颗粒的阳性细胞＞50%者为(+++)，浅棕色、小颗粒的阳性细胞10%～50%为(++)，阳性细胞＜10%为(+)。

3.统计学方法:数据处理采用SPSS 19.0 软件处理，行χ2检验，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

结 果

1.P63 蛋白在癌和正常组织中的表达情况:P63蛋白在非小细胞肺癌中的阳性表达率为81. 67%(49/60)与正常肺组织5.00%(3/60)相比差异有统计学意义(P ＜0.05，表1)。

2.P63 蛋白在宣威、非宣威肺组织中的表达:P63蛋白在鳞癌组织中的表达，明显高于腺癌组织(P =0.028)及正常组织(P =0.000)中的表达。宣威地区，P63 蛋白在鳞癌组织中的阳性表达率高于腺癌组织，但差异无统计学意义(P =0.259);非宣威地区，P63 蛋白在鳞癌组织中的阳性表达率同样高于腺癌组织，但差异无统计学意义(P =0.058);而非宣威鳞癌组织中的阳性表达率高于宣威鳞癌组织，但差异无统计学意义(P =0.648);宣威腺癌组织与非宣威腺癌组织中的阳性表达率差异无统计学意义(P =1.000，表2)。P63 蛋白在鳞癌中的表达明显高于腺癌或许与P63 蛋白受表皮生长因子的下游通路——磷酰肌醇激酶3 调节有关［2］。

表2 P63 蛋白在宣威、非宣威肺组织中的表达

3.P63 蛋白表达与临床分期的关系:P63 蛋白在癌组织中阳性表达率随TNM 分期增加呈上升趋势，在分期晚的病人中阳性表达率较高，这与宋宇［3］的研究结果一致。Ⅰ期与Ⅱ期患者比较，差异无统计学意义(P=0.073)，Ⅱ期与Ⅲ期患者比较，差异无统计学意义(P=0.402)，Ⅰ期与Ⅲ期患者比较，Ⅲ期患者P63 蛋白表达阳性率明显高于Ⅰ期患者，差异有统计学意义(P=0.019)。P63 蛋白表达在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者中宣威组与非宣威组比较，差异无统计学意义(P ＞0.05，表3)。

表3 P63 蛋白表达与临床分期的关系

4.P63 蛋白表达与组织分化程度的关系:P63 蛋白在癌组织中阳性表达率与组织分化程度呈负相关，在分化低的患者中表达率较高。低分化癌组织中P63 蛋白的阳性表达率高于中分化癌组织，但差异无统计学意义(P =0.445);中分化癌组织中P63 蛋白的阳性表达率显著高于高分化癌组织，差异有统计学意义(P=0.031);低分化癌组织中P63 蛋白的阳性表达率显著高于高分化癌组织，差异有统计学意义(P=0.005);高、中、低分化癌组织宣威组与非宣威组相比较，差异无统计学意义(P ＞0.05，表4)。

表4 P63 蛋白表达与组织分化程度的关系

5.P63 蛋白表达与淋巴结转移的关系:P63 蛋白在淋巴结转移组的阳性表达率高于无淋巴结转移组，P63 蛋白在淋巴结转移组的阳性表达率为89.66%，在无淋巴结转移组的阳性表达率为41. 94%(P =0.000，P ＜0.05)差异有统计学意义。P63 蛋白在淋巴结转移组阳性表达率，宣威组与非宣威组比较，差异无统计学意义(P =1.000)。P63 蛋白在无淋巴结转移组阳性表达率，宣威组与非宣威组比较，差异无统计学意义(P =0.473)。陈洪雷等［4］的研究同样发现P63 蛋白表达与淋巴结转移有关(表5)。

6.P63 蛋白表达与性别的关系:P63 蛋白的表达与性别无关(P=1.000)。P63 蛋白的表达宣威男性与非宣威男性比较，差异无统计学意义(P =1.000)。P63 蛋白的表达宣威女性与非宣威女性比较，差异无统计学意义(P =1.000)。这与宋宇［3］的研究结果一致(表6)。

表6 P63 蛋白表达与性别的关系

讨 论

1997 年，Schmale 等［5］经探索发现了鼠KET。这是一种与P53 高度同源的蛋白。而人的P63 蛋白基因和P63 蛋白在1998 年被一些研究所发现［6］。目前的研究提示，P63 蛋白与肿瘤的发生、发展具有显著的相关性［7］。P63 蛋白作为P53 家族的新成员，是一种核转录因子，它与P53 蛋白具有高度同源性，可以通过激活P53 的靶基因，参与P53 蛋白介导的细胞信号转导途径，从而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。那么P63 是不是和P53 一样，是一种抑癌基因呢?曾经是有争论的［9］。后来的研究发现，P63 生物学功能的表现，是与它所表达的两种亚型蛋白的结构和功能密切相关的，如P63 表达TAp63 亚型，因其能激活或抑制P53 的靶基因，从而发挥肿瘤抑制因子的功能［10］;如P63 表达ΔNp63 亚型，因其缺乏TA 区而不能诱导转录，而不能发挥肿瘤抑制因子的功能，但其却有DNA 结合域，可竞争DNA 结合位点，从而发挥负性调节的功能，因此具有潜在癌基因的功能［10，11］。宣威地区肺癌发病率显著高于非宣威地区，本实验通过比较P63 蛋白在宣威地区与非宣威地区非小细胞肺癌中的表达，探究P63 蛋白的表达在宣威地区有无特异性，以探究宣威肺癌高发的原因。本研究得出P63蛋白在非小细胞肺癌中的阳性表达率为81. 67%(49/60)与正常肺组织(3/60)相比差异有显著意义，P ＜0.05，提示P63 在非小细胞肺癌中作为癌基因而不是抑癌基因起作用，与Choi 等［12］研究结果类似。P63 的阳性表达率明显高于正常组织，充分说明了P63 与非小细胞肺癌的发生、发展具有密切的相关性。

实验结果发现，鳞状细胞癌与腺癌相比较，P63蛋白在鳞状细胞癌中高表达，差异有统计学意义，P＜0.05，这提示P63 蛋白与鳞状细胞癌发生关系密切。陈洪雷等［4］应用免疫组化法研究发现P63 蛋白在人非小细胞肺癌中的阳性表达率为80.0%，P63 蛋白表达与肺癌的组织学类型和淋巴结转移有关，在肺鳞癌中阳性表达率显著高于腺癌，与本实验结果一致。Di Como 等［13］发现P63 主要表达于基底细胞和鳞癌，转化细胞癌，而不是在腺癌包括乳腺和前列腺等，本文研究结果与之一致。同时在TNM 分期中，TNM 分期越晚，P63 蛋白表达越强。P63 蛋白的表达与组织分化程度负相关，说明P63 蛋白的高表达常提示非小细胞肺癌恶性程度高。P63 蛋白与淋巴结转移情况正相关，则说明P63 蛋白高表达常提示易于淋巴转移。所以P63 蛋白的高表达提示预后差，其可用于判断非小细胞肺癌的恶性程度以及预后［3］。本实验结果发现，P63 蛋白在非小细胞肺癌中在相同病理类型、分期、分化程度、淋巴结转移情况及性别的阳性表达率，宣威组与非宣威组比较，差异无统计学意义，表明虽然P63 蛋白在非小细胞肺癌中作为癌基因而不是抑癌基因起作用，但是P63 蛋白的表达在宣威并无地区特异性，说明P63 蛋白的表达并不是宣威肺癌高发的原因。

P63 蛋白在非小细胞肺癌中呈高表达，提示P63蛋白与非小细胞肺癌的发生、发展有密切的相关性。P63 蛋白的表达可能与非小细胞肺癌的生长、浸润、转移有关，而与性别无关。P63 蛋白在鳞癌中的表达显著高于腺癌，有助于鉴别诊断鳞癌与腺癌。非小细胞肺癌中P63 蛋白在相同病理类型、分期、分化程度、淋巴结转移情况及性别的阳性表达率，宣威组与非宣威组比较，差异无统计学意义，这表明P63 蛋白的表达在宣威并无地区特异性，并不是宣威肺癌高发的原因。

1 吕任齐，赵体德.云南省-县市肺癌死亡率趋势分析［J］. 中国肿瘤，2002，11(12):701

2 Morgunkova A. The p53 gene family:control of cell proliferation and developmental programs［J］. Biochemistry，2005，70(9):321 -323

3 宋宇. Survivin、p53、p63、p73、p21 在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义［D］.苏州:苏州大学，2007

4 陈洪雷，陈福春，王敏，等. 人非小细胞肺癌组织p63 和p73 的表达及意义［J］. 肿瘤防治杂志，2003，10(10):1015 -1018

5 Schmale H，Bamberger C. A novel protein with strong homology to the tumor suppressor p53［J］. Oncogene，1997，15(11):1363 -1367

6 Fishman SJ，Mulliken JB. Hemangiomas and vascular malformations of infancy and childhood［J］. Pediatr Clin North AM，1993，40(6):1177 -1200

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8 张超，代红艳，卿晋，等. P63 基因的研究进展［J］. 皮肤病与性病，2012，34(3):142 -144

9 Sallone C，Caggese C，Lanare C，et al. Molecular clock and gene function［J］. Journal of Molecular Evolution，2003，57(1):277 -285

10 Mangiulli M，Valletti A，CAratozzolo MF，et al. Identification and functional characterization of two new transcriptional variants of the p63 gene［J］. Nucleic Acids Res，2009，37(18):6092 -6104

11 Weber A，Langhanki L，Schutz A，et al. Expression profiles of p53，p63 and p73 in benign salivary gland tumors［J］. Virchows Arch，2002，441(5):428 -436

12 Choi HR，Batsakis JG，Zhan F，et al. Differential expression of p53 gene family members p63 and p73 in head and neck squamous tumorigenesis［J］. Hum Pathol，2002，33(2):158 -164

13 Di Como CJ，Urist MJ，Babayan I，et al. P63 expression profiles in human normal and tumor tissues［J］. Clin Cancer Res，2002，8(2):494 -501