岩白菜素的质量标准研究

2014-01-08潘玉杰安斯扬孙晓军贵州百灵企业集团制药股份有限公司贵州安顺561000

中国医院用药评价与分析 2014年9期

蒋坤，潘玉杰，夏文，李星，安斯扬，孙晓军，安巧（贵州百灵企业集团制药股份有限公司，贵州安顺561000）

岩陀为虎耳草科鬼灯檠属植物西南鬼灯檠Rodgersiasambucifolia Hemsl.的根茎，性味为苦、涩、凉。原植物主产于云南、贵州、四川。其根茎具有收敛、消炎、祛风除湿的功效，对老年性支气管炎、菌痢、肠炎、感冒头痛、外伤出血、风湿骨痛等常见疾病有较好的疗效［1］。其提取物的疗效成分为岩白菜素（别名为岩白菜内酯、矮茶素、岩白菜宁），具有镇痛、镇静、催眠及安定作用。岩白菜素为白色疏松的针状结晶或结晶性粉末，无臭，味苦，遇光或热渐变色，在甲醇中溶解，在水或乙醇中微溶。其化学结构式见图1。

岩白菜素收载于《中国药典》2010年版（一部）［2］，含量测定方法为紫外分光光度法，但该方法专属性不强。为使含量测定专属性更好、更准确，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定岩白菜素含量；同时，按照《中国药典》规定进行性状观察、鉴别、检查等，为岩白菜素的临床应用和研究开发相关制剂提供依据。

图1 岩白菜素的化学结构式Fig 1 Chemical structural formula of bergenin

1 仪器与试药

Agilent Technologies 1200 series 高效液相色谱仪（G1315D DAD 检测器）；梅特勒-托利多电子天平（梅特勒-托利多上海有限公司）；KQ-250DB型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热恒温干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）。

岩白菜素对照品（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：111532-201302）；岩白菜素（由云南金泰德有限公司、云南康益有限公司、云南玉溪万芳有限公司提供，分别称为样1、样2、样3）；3批岩白菜素中试样品（批号：20130601、20130602、20130603，分别称为样4、样5、样6），10批岩白菜素样品（批号：20130304、20130201、20130202、20130604、20130701、20130102、20130101、20140304、20130303、20130301）均由贵州百灵企业集团制药股份有限公司生产；甲醇（美国TEDIA公司）；纯净水（娃哈哈集团有限公司）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 性状

取岩白菜素对照品、样1、样2、样3及3批中试样品（样4、样5、样6），观察外观、气味、光和热条件下的颜色变化，并进行溶解度、比旋度测定，结果见表1。

表1 性状考察结果Tab 1 Properties of bergenin

试验结果与《中国药典》2010年版（一部）岩白菜素性状项［2］下一致。

2.2 鉴别

根据《中国药典》2010年版（一部）岩白菜素鉴别项［2］方法对岩白菜素对照品及样1、2、3、4、5、6 进行试验，试验结果与《中国药典》2010年版（一部）岩白菜素鉴别项［2］下一致。

2.3 检查

2.3.1 干燥失重检查。取岩白菜素对照品、样1、样2、样3及3批中试样品（样4、样5、样6），参照《中国药典》2010 年版（一部）岩白菜素鉴别项［2］方法进行干燥失重检查。结果干燥失重检查平均值为3.80%，减失重量低于6.0%，符合《中国药典》2010年版（一部）岩白菜素干燥失重项［2］下规定。

2.3.2 炽灼残渣检查。取岩白菜素样品根据《中国药典》2010年版（一部）岩白菜素检查项［2］方法进行炽灼残渣检查。结果炽灼残渣含量均值为0.08%，低于0.1%，符合《中国药典》2010年版（一部）岩白菜素炽灼残渣项［2］下规定。

2.4 含量测定

2.4.1 色谱条件［3-4］。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）（北京迪科马科技有限公司）；流动相为甲醇-水（25∶75）；流速为1.0 ml/min；检测波长为275 nm；进样体积为10 μl。理论板数按岩白菜素峰计算应不低于3 000。对照品及样品色谱图见图2、图3、图4。

图2 岩白菜素对照品高效液相色谱图Fig 2 HPLC chromatogram of standard bergenin

图3 岩白菜素（样4）高效液相色谱图Fig 3 HPLC chromatogram of bergenin（sample 4）

图4 溶剂高效液相色谱图Fig 4 HPLC chromatogram of the solvent

2.4.2 对照品溶液的制备。取岩白菜素对照品约10 mg，精密称定，置于10 ml 量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀；精密量取此溶液1 ml，以甲醇稀释至10 ml，过滤，即得0.1 mg/ml的对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备。取岩白菜素（样4）约10 mg，精密称定，置于10 ml 量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀；精密量取此溶液1 ml，以甲醇稀释至10 ml，过滤，即得供试品溶液。

2.4.4 线性范围考察。精密称取岩白菜素对照品10.39 mg，置于10 ml量瓶，制得质量浓度为1.039 mg/ml的母液；精密吸取该母液1 ml 分别稀释至25、15、10、7.5、5 ml，制得质量浓度分别为0.041 56、0.069 26、0.103 90、0.138 50、0.207 80 mg/ml 的对照品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件进行测定。以质量浓度（x）为横坐标、峰面积积分值（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程y＝8.191 7+6 300.3x（r＝0.999 9）。结果表明，岩白菜素质量浓度在0.041 56～0.207 80 mg/ml（进样量为0.416～2.078 μg）时，与峰面积积分值线性关系良好。

2.4.5 精密度试验。精密称取岩白菜素对照品5.46 mg，置于50 ml量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀；精密量取1 ml，以甲醇稀释至10 ml，过滤。按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，连续进样5次，测得其峰面积积分值RSD为0.72%，表明仪器精密度良好。

2.4.6 稳定性试验。取岩白菜素（样4）10.70 mg，置于10 ml量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀；精密量取1 ml，用甲醇稀释至10 ml，过滤，作为供试溶液。按“2.4.1”项下色谱条件，于0、2、4、6、8、24 h 分别进样测定，测得其峰面积积分值的RSD为1.14%，表明岩白菜素供试溶液在24 h内稳定性良好。

2.4.7 耐用性试验。取岩白菜素（样4）10.75 mg，置于10 ml量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀；精密量取1 ml，用甲醇稀释至10 ml，过滤，作为供试溶液。采用不同流速、不同比例、不同厂牌的色谱柱、不同柱温，按“2.4.1”项下色谱条件进行测定，结果见表2。

表2 耐用性试验结果Tab 2 Results of serviceability test

由表2结果可知，在选用不同比例流动相、流速、色谱柱厂家、柱温后，峰面积RSD＝2.7%，表明本方法的耐用性良好。

2.4.8 加样回收率试验。精密称取岩白菜素（样4）约2.59 mg共9份，分别置于50 ml量瓶，再精密称取相当于样品含量80%、100%、120%的岩白菜素对照品各3 份加入上述量瓶中，以甲醇溶解并定容至50 ml，得到低、中、高浓度的供试溶液各3份。按“2.4.1”项下色谱条件测定并计算回收率，结果见表3。

表3 加样回收率试验结果Tab 3 Results of recovery test

由表3 可见，加样回收率平均值为100.4%，RSD 为1.04%，表明该方法准确度良好。

2.4.9 检测限及定量限。精密称取岩白菜素对照品5.14 mg，置于100 ml 量瓶，加甲醇溶解并定容；精密吸取1 ml 稀释至25 ml，得质量浓度为0.002 056 mg/ml 的对照品溶液，过滤，进样1 μl。进一针空白溶剂观察基线。经计算，当信噪比为3时，检测限为0.284 ng；当信噪比为10时，定量限为0.945 ng。

2.4.10 含量测定结果。采用笔者拟订的质量标准草案中HPLC法与《中国药典》2010年版（一部）岩白菜素项下的紫外-可见分光光度法，分别对10批样品进行含量测定，结果见表4。