GAG、MDA检测在非霍奇金淋巴瘤诊疗中的临床意义

张 煜，江铭磊，卢仁泉，郭 林

(复旦大学附属肿瘤医院复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032)

非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma，NHL)是一组高度异质性的淋巴系统恶性肿瘤[1]，近年来新发病例逐年上升，对人类健康产生了很大的影响。目前临床上诊断淋巴瘤的主要方法为影像学、骨髓检查和病理学诊断，血清学指标主要有乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)、β2-微球蛋白(beta 2-microglobulin，β2-MG)、尿微量蛋白(microalbumin，MA)[2]和红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate，ESR)等，但这几项指标特异性都不能满足临床要求。因此，找到一个合适的用于诊断以及判断预后的指标对于淋巴瘤的防治具有重要意义。目前，国外已有报道葡糖氨基葡聚糖(glycosaminoglycan，GAG)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)在NHL患者中含量升高[3]，但国内尚无相关报道。本研究分析99例NHL患者血清中GAG和MDA水平，以探讨其与NHL的关系。

材料和方法

一、研究对象

收集复旦大学附属肿瘤医院2011年8月至2013年6月的NHL患者(NHL组)99例，男56例，女43例，年龄(66.67 ±15.48)岁。其中弥漫大 B淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL)54例，滤泡型淋巴瘤(follicular lymphoma，FL)26例，NK T细胞淋巴瘤(NK/T-cell lymphoma，NK/T)15例，其它类型 NHL(如套细胞淋巴瘤、弥漫大B与滤泡型混合淋巴瘤等)4例。均经影像学和病理学确诊。另外选择复旦大学附属肿瘤医院体检健康者(对照组)58名，男33名，女25 名，年龄(48.10 ±13.42)岁，均无肝、肾、心脏等系统疾病。

二、方法

1.标本采集 采集4 mL静脉血于促凝管，3 000×g离心10 min分离血清后吸取血清层，按标本收集要求分装，置-40℃冰箱冻存待测。

2.检测方法 使用美国RayBiotech人GAG和人MDA酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)试剂，其基本原理是应用双抗体夹心法测定标本中的GAG和MDA水平。严格按照说明书的操作步骤完成2个项目的检测，并用比色仪测出所有项目的吸光度(A)值，再经过标准曲线计算得出结果。

三、统计学方法

用SPSS13.0统计软件处理，数据以中位数(四分位数)表示，NHL组与对照组之间比较、不同类型NHL之间比较均用非参数检验(Kruskal-Wallis检验)，FL患者随访数据用差异率表达。以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、NHL组与对照组GAG和MDA水平比较

NHL 组 GAG[4.715(3.398，6.678)μg/L]和 MDA[3.21(2.52 和4.645)mmol/L]含量明显高于对照组[GAG 0.92(0.73，1.85)μg/L，MDA 1.55(1.54，1.61)mmol/L]。见图 1。

二、不同类型NHL患者GAG和MDA水平比较

GAG和MDA在 FL患者中有较高表达，分别为5.26(4.35，9.01)μg/L 和 3.88(3.57，7.18)mmol/L，见 图 2。而 GAG 和 MDA 在DLBCL 患者中分别为 4.03(3.27，6.09)μg/L 和2.69(2.28，3.86)mmol/L;在 NK/T 患者中为4.61(3.59，6.73)μg/L 和 2.97(2.57，3.17)mmol/L;在其它类型 NHL 患者中为4.08(3.09，6.13)μg/L和 2.58(2.25，5.28)mmol/L。由此显示，两者在FL患者中含量较其他3种NHL患者均有显著升高(P 均 ＜0.05)。

图1 NHL组与对照组GAG和MDA水平比较

图2 不同类型NHL患者GAG和MDA水平比较

三、GAG和MDA用于FL患者化疗效果的监测

本研究选取20例FL化疗患者，观察1个化疗周期(约3周)的GAG和MDA水平变化程度。根据疗效评价分为完全缓解组6例，部分缓解组12例以及疾病稳定组2例。结果显示GAG水平有明显的变化。6例完全缓解组患者中，有4例患者GAG差异率在20%以上(此差异率标准来自于Rustin等[4]的研究)，仅有 2例差异率在10%以下;12例部分缓解组患者中，有6例患者GAG差异率在20%以上，3例在10% ～20%之间，还有3例差异率不足10%;2例疾病稳定组患者其GAG差异率均在10%～20%之间。GAG的总体差异率符合临床表现(符合率＞75%)，见表1、图3。图3中患者3、患者8和患者14分别为完全缓解、部分缓解和疾病稳定患者，对GAG进行跟踪监测，其检测结果与临床表现基本一致。但20例FL患者中只有3例患者的MDA变化符合临床表现。

表1 GAG改变与临床表现之间的关系

图3 3例FL患者不同临床表现的GAG水平变化

讨 论

GAG是由淋巴细胞产生的一种生物大分子，共价结合到核心蛋白形成蛋白多糖，分为透明质酸(hyaluronic acid，HA)、4-硫酸软骨素、6-硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素、肝素和硫酸角质素等。除HA外，在体内GAG以蛋白聚糖的形式存在。GAG在多种肿瘤相关的进程中扮演重要角色，其在机体内有着调节生长因子、细胞行为、炎症、血管生成和蛋白水解等作用[5]。MDA是机体内不饱和脂肪酸在自由基的作用下产生脂质过氧化的最终产物，自由基是化学致癌物的活性形式之一，它通过膜的脂质过氧化导致细胞癌变。因此，MDA可反映脂质过氧化和抗氧化系统失衡状态，预测人群中患癌的高风险性[6]。

国外已有研究将GAG和MDA这2项指标联合检测用于NHL的诊断及预后判断。本研究显示，GAG和MDA在NHL患者血清中含量明显高于对照组(P ＜0.001)，这与之前的报道一致[3]。

FL是来源于滤泡生发中心细胞的惰性B细胞肿瘤，在西方国家FL约占所有NHL的50%，在中国FL约占NHL的13%。由于FL在治疗上有病程长、反复复发或侵袭性转移的特点，所以早期诊断尤为重要。本研究发现在FL患者中，GAG和MDA较其他类型NHL有明显升高。曾有报道LDH-5在FL患者中含量升高[6]，若能将GAG和MDA与LDH-5联合检测，GAG和MDA在FL的早期诊断可能会更有意义。

本研究选取了20例FL患者进行跟踪监测(至少3次化疗)。经过1个化疗周期的治疗，这20例患者中GAG差异率比较符合疾病发展，符合率＞75%。我们用中位数的方法进行非参数检验，比较了3次化疗后GAG的变化，结果显示呈较明显的下降趋势，表明GAG在FL患者化疗进程中会随着疗效而改变。另外，在完全缓解组中发现，有2例患者下降程度较小，可能与标本留取、标本保存以及检测时间等因素有关。目前，GAG已经被证明会在NHL发生器官部位检测出GAG的核心蛋白[7]，所以GAG是很好的NHL预后判断指标，尤其可以应用于FL，还可以为临床制定化疗方案提供依据。与此同时，我们也发现MDA在这20例患者中，仅2例部分缓解和1例完全缓解患者有较明显的变化，其余均无明显变化。故MDA尚无法用于预后判断。又因为在NHL国际预后指数中，LDH水平是重要的NHL预后判断指标之一[8]，但其在有骨髓浸润时会显著升高[9-10]，所以 GAG用于预后判断有更高的价值。

GAG和MDA分别单独检测或与其他肿瘤标志物联合检测将更有利于NHL的临床诊断和治疗。

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