菊三七根中化合物seneciphyllic acid和senecinic acid的含量测定

刘 芳 郭志勇 程 凡 周海峰 邹 坤 邓张双

（三峡大学化学与生命科学学院天然产物研究与利用湖北省重点实验室，湖北宜昌 443002）

菊三七（Gynura japonica）为菊科（compositae）菊三七属植物，湖北地区的利川、当阳以及神农架，全国大部分地区均有分布［1］.菊三七亦为长江三峡库区民间广为使用的民间中草药［2］，民间用于跌打损伤［3］、创伤出血［4］、镇痛6［5］、抗炎［6］等.本文对自菊三七乙酸乙酯部位中分离得到的化合物seneciphyllic acid和senecinic acid，采用制备HPLC 技术进行纯化，以纯化后的化合物为标准品，采用分析型高效液相色谱法测定菊三七根部seneciphyllic acid和senecinic acid的含量，为更好地利用传统中草药菊三七提供科学依据.

1 材料与仪器

1.1 试药

标准品溶液：精密称取seneciphyllic acid标准品适量，加甲醇配置成质量浓度为0.10、0.20、0.40、0.60、0.80mg·mL－1的系列对照品溶液.精密称取senecinic acid标准品适量，加甲醇配置成质量浓度为0.10、0.30、0.50、1.00、1.50mg·mL－1的系列对照品溶液.用0.45μm 的有机滤膜过滤，备用.

1.2 仪器与设备

DIONEX Ultimate 3000型高效液相色谱仪（美国戴安液相色谱有限公司）；N1001型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；ME215S型十万分之一电子天平（德国Sartorius）.

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Acclaim C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇／甲酸溶液；洗脱梯度：甲醇∶0.1%甲酸溶液＝38∶62（v·v－1）；流速：1.0mL·min－1；检测波长：220nm；柱温：30℃；检测时间：20 min.分别精密吸取标准品溶液，供试品溶液各10 μL，进样，依上述色谱条件测定.依据标准品在色谱图上的保留时间，在供试品溶液的色谱图中找出相对应的色谱峰.其中：seneciphyllic acid的色谱保留时间为12.78min；senecinic acid 的色谱保留时间为16.32min，达到基线分离.

2.2 样品预处理

精密称取干燥的菊三七根粉末1.2g，加入25mL乙醇70℃回流提取3次，过滤，滤液减压浓缩至干，得到100mg浸膏，用5mL 色谱甲醇溶解，定容，用0.45μm 的有机滤膜过滤，备用.

3 结果与分析

3.1 标准曲线

分别精密吸取标准品seneciphyllic acid溶液10 μL进样，按2.1中色谱条件测定色谱峰面积，以峰面积Y 为纵坐标，质量浓度X（mg·mL－1）为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归.结果表明，在对照品质量浓度为0.10～0.80mg·mL－1范围内线性关系良好，回归方程：Y＝85.518X＋0.954 2，r＝0.999 7.

分别精密吸取标准品senecinic acid溶液10μL进样，按2.1中色谱条件测定色谱峰面积，以峰面积Y 为纵坐标，质量浓度X（mg·mL－1）为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归.结果表明，在对照品质量浓度为0.10～1.50mg·mL－1范围内线性关系良好，回归方程：Y＝143.19 X＋9.195 9，r＝0.999 8.

3.2 精密度试验

精密吸取标准品seneciphyllic acid 溶液0.20、0.40、0.80mg·mL－1各10μL，按2.1中色谱条件连续进样，每个质量浓度进样3次，测定色谱峰面积，计算其RSD 分别为1.50%.

精密吸取标准品senecinic acid溶液0.30、0.50、1.00mg·mL－1各10μL，按2.1中色谱条件连续进样，每个质量浓度进样3次，测定色谱峰面积，计算其RSD 分别为1.1%.

3.3 稳定性试验

分别精密吸取一定质量浓度的seneciphyllic acid和senecinic acid溶液10μL，于0、2、4、6、8、10、12、24h分别进样分析，测定其峰面积，其RSD 值为1.40%和1.70%，表明样品溶液在24h内稳定性良好.

3.4 重复性试验

精密称取干燥的菊三七根粉末1.2g，6份.按2.2方法平行制备，在2.1色谱条件下进行分析，测定seneciphyllic acid为2.961 3mg·g－1，0.296 1%，RSD值为1.30%；测定senecinic acid为0.954 2mg·g－1，0.095 4%，RSD值为1.20%，表明该方法重复性良好.

3.5 加标回收率试验

精密称取已知含量的菊三七乙醇浸膏5份，每份约100mg，各样品分别精密加入标准品seneciphyllic acid和标准品senecinic acid适量，按样品溶液制备方法平行制备.

在2.1色谱条件下，分别进样10μL 进行测定，得平均回收率及其RSD 值，结果见表1.

表1 加标回收率实验结果

4 结 论

本文利用正相硅胶层析、制备高效液相色谱等技术，从菊三七乙酸乙酯部位分离纯化得到主要化学成分seneciphyllic acid和senecinic acid.以seneciphyllic acid和senecinic acid为标准品，采用回流提取辅助浸提的方法制备菊三七测试样，建立了HPLC 法测定菊三七根部seneciphyllic acid 和senecinic acid含量的方法体系.测得菊三七根部seneciphyllic acid和senecinic acid 的含量分别为2.961 3mg·g－1、0.954 2mg·g－1，RSD 分别为1.34%、1.28%.同时还进行了方法学验证，结果表明方法的精密度、稳定性、回收率等指标均满足测定要求，可为菊三七药材的质量控制提供参考，为开发利用民间中草药菊三七提供理论研究基础.

［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志第七十七卷第一分册［M］.北京：科学出版社，1999：312－313.

［2］ 余甘霖，沈 力，易东阳，等.长江三峡库区中草药资源调查研究［J］.实用中医药杂志，2005，21（3）：187.

［3］ 曾晓琼，宋一心.菊三七对运动性骨折治疗作用的研究［J］.西安体育学院学报，2003（3）：64－65.

［4］ 刘贺之，庞 健，王增岭，等.菊三七与参三七对血小板超微结构影响的研究［J］.药学学报，1982，17（11）：23－24.

［5］ 张铭龙，刘文彬，李星元，等.菊三七生物碱的提取以及类似物的药理活性比较［J］.吉林中医药，1998（4）：35－38.

［6］ 林 菁，林建忠，李常春，等.红番苋水提物的抗炎作用［J］.福建中医药，1996，27（2）：23－24.