自动定氮仪测定人血白蛋白中的总氮含量

2013-12-15武晗燕苏芳郭雷

生命科学仪器 2013年6期

武晗燕，苏芳，郭雷

（北京市药品检验所，北京，100035）

蛋白质含量是人血白蛋白质量评价的重要指标。传统上氮含量测量的方法为半微量凯氏定氮法[1]，凯氏定氮法也是国家标准方法[2]，该方法虽不需复杂的仪器设备，但存在步骤多，操作复杂，实验结果受操作环节和人为因素影响大,分析效率低等问题，已不能满足快速批量测试要求。自动定氮仪是在经典定氮蒸馏装置的基础上开发研制的，使用该设备在几分钟内即自动完成蒸馏、滴定和结果计算。滴定系统采用颜色判定终点法，避免人工蒸馏、滴定的繁琐过程，大大提高了工作效率。为了充分发挥利用自动定氮仪测定人血白蛋白中氮含量提供方法，从而提高人血白蛋白中氮含量测定的效率，本文对自动定氮仪法与半微量凯氏定氮蒸馏定氮法做了比较研究。

1 材料与方法

1.1 材料

试验用催化剂、硼酸吸收液，混合指示剂、硫酸滴定液等均按《中国药典》2010年版二部中的要求配制，自动定氮仪用催化剂为仪器自带市售产品。人血白蛋白为A厂家生产进口人血白蛋白。

1.2 主要试验仪器

自动定氮仪，型号KJELTEC 8400，瑞典FOSS公司产品，具有凯氏蒸馏和自动滴定功能,最小滴定单位为0.004mL，可根据滴定缸内溶液颜色变化进行终点判定，蒸馏体积达250ml；仪器配有内置恒温器的消化器，控温范围为50~440℃。分析仪专用消化管体积为250 mL。

1.3 方法

1.3.1 测试方法选择

1.3.1.1 半微量凯氏定氮法

量取人血白蛋白1ml，将试样置于凯氏烧瓶底部，加入1.0 g消化剂，8mL硫酸，置于电炉上，用小火加热，待瓶内反应缓和后，加强火力使消煮的土液保持微沸，待消煮液全部为澄明的绿色后，继续消煮10分钟，冷却，待蒸馏。在消化样品的同时，做2份空白测定，除不加人血白蛋白外，其他操作皆与测定样品时相同。蒸馏前先检查蒸馏装置是否漏气，并通过水的溜出液将管道洗净。用少量水将消煮液全部转入蒸馏器内，并用水洗涤凯氏瓶4～5次。于150 ml三角瓶中，加入10 ml2%硼酸-指示剂混合液，放在冷凝管末端，然后向蒸馏器内加入10ml 40%氢氧化钠溶液，通入蒸汽蒸馏，待镏出液体积约50 ml，即蒸馏完毕。用0.005 mol/L硫酸（或0.01 mol/L盐酸）标准溶液滴定镏出液由蓝绿色至刚变为红紫色，记录所用酸滴定液的体积，代入计算公式，计算人血白蛋白中的含氮量。

1.3.1.2 自动定氮仪定氮法

量取人血白蛋白1ml置于250 ml消化管，加入1片消化剂（约5g），8mL硫酸，将消煮管接上回流装置或插上弯颈玻璃漏斗后，置于消化器中低温加热，待管内反应缓和时(约10~15 min)，提高温度至420 ℃，继续消化。待消煮液全部为澄明的绿色后，再继续消煮10分钟，消化完毕，冷却，待蒸馏。在消煮样品的同时，做2份空白测定，除不加人血白蛋白外，其他操作皆与测定土样时相同。蒸馏前按使用说明书检查自动定氮仪，并空蒸0.5 h洗净管道。然后在仪器中设定加入50 ml去离子水、30 ml 2%硼酸-指示剂混合液、80ml 40%氢氧化钠溶液，将消化管置于自动定氮仪上进行蒸馏、滴定，同时先做2个空白试验，空白测定所用标准溶液的体积，记录样品消耗滴定液体积，代入计算公式，计算人血白蛋白中的含氮量。