HPLC 法测定黄芩不同部位中黄芩苷和野黄芩苷的含量

★ 李晓芳 吴荣 叶喜德 (. 江西省中医院 南昌330006;. 江西省余干县人民医院 余干33500;3.江西中医学院 南昌330004;4.广州中医药大学 广州50006)

黄芩(Scutelalria baicalensis Georgi)来源于唇形科植物黄芩的干燥根，为多年生草本，主根粗壮，茎高约30 －120 cm，自基部多分枝。黄芩又被称为黄金茶、山茶根或者烂心草，是临床上十分常用的中药，具有良好的泻火解毒、止血凉血、安胎除热的作用。现代研究表明，黄芩富含黄酮类化学成分，其中主要是黄芩苷(baicalin)，黄芩甙药理作用广泛，临床主要用于抗菌、消炎和抗感染［1，7］等。而其茎叶为黄芩药材的地上部分，主要含有野黄芩苷(scutellarin)，该成分具有清热解毒，扩张心脑血管，改善体内微循环等作用［2］。为了黄芩资源的合理利用和生药(或制剂)的质量控制，我们建立了黄芩苷和野黄芩苷的HPLC 分析方法，对黄芩不同部位的主要成分黄芩苷和野黄芩苷的含量进行了测定。

1 材料

HPLC 仪器:LC －20AT 高效液相色谱仪(岛津公司，日本)，包括SPD－M20A 二极管阵列检测器，SIL－20A 自动进样器，LC －solution 液相色谱工作站。其它仪器:电子分析天平FA2004，上海天平仪器厂;TDL－5 －A 型低速台式离心机，上海安亭科学仪器厂;QN －99 粉碎机，韩国日进精工有限公司;8002 型恒温水浴控制器，余姚明伟仪表厂。

甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇、醋酸、磷酸为分析纯，水为自制重蒸水。黄芩苷对照品，购于中国药品生物制品检定所(批号:110715 －201016);野黄芩苷对照品，购于北京亚希尔科技有限公司。黄芩根、茎、叶均采购于市场。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 黄芩苷检测参考药典方法，并稍作改动:色谱柱为Texra C18 柱(4.6 mm × 200 mm，5 μm)，流动相为甲醇－水(53∶47)，水用磷酸调pH值约为3(磷酸∶水=2∶500，V/V)，流速为0.9 mL/分，检测波长280 nm，柱温30℃，进样量20 μL。

野黄芩苷检测:色谱柱同黄芩苷检测，流动相以甲醇－0.2%醋酸溶液进行梯度洗脱，0 －30 分钟甲醇由40%增加到70%;洗脱流速为0.9 mL/分，检测波长334 nm，柱温为30℃，进样量10 μL。

2.2 对照品溶液制备 黄芩苷:精密称取在60℃干燥恒重的黄芩苷对照品6.00 mg，加甲醇定容至100 mL 的容量瓶，配成60 μg/mL 浓度的对照品溶液，用时稀释至60、24、12、6、3 μg/mL 共5 个浓度梯度。

野黄芩苷:精密称取在P2O5干燥器中干燥24小时的野黄芩苷对照品10.00 mg，加甲醇定容至25 mL 的容量瓶，配成0.4 mg/mL 浓度的对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备 黄芩苷提取［3］:分别精密称取样品粉末(过60 目筛)1.00 g，加70%乙醇100 mL，回流提取4 小时，提取液过滤，除去残渣定容至100 mL 容量瓶中，即得供试样品。

黄芩苷提取［2］:称取样品粉末(过60 目筛)1.00 g，精密称定，置索氏提取器中用石油醚(60 －90)洗脱至无色，取出，晾干，在索氏提取器中用80 mL甲醇连续洗脱至无色，使野黄芩苷提取完全，放冷，滤过，滤液置100 mL 容量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 标准曲线的制备 黄芩苷对照品溶液进样20 μL，按上述色谱条件进行测定，对照品色谱图见图1(a)。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，黄芩苷浓度(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程Y = 0.73×105X －1.5 ×105(r =0.999 8)。结果表明，进样体积20μL，检测波长λ280 nm，黄芩苷在1.5 －60 μg/mL 范围内线性关系良好［4］。

取浓度为0.400 mg/mL 的野黄芩苷对照品溶液5、10、15、20、25 μL 依次进样，在本文2.1 色谱条件下，测定色谱峰面积，对照品色谱图见图1(b)。以对照品质量x (μg)为横坐标，峰面积Y 为纵坐标，回归得直线方程为Y =1.36 ×106X －2.07 ×106(r=0.999 5)。

图1 对照品色谱图

2.5 精密度试验 取2.2 项下对照品溶液黄芩苷(6 μg/mL)20 μL 和野黄芩苷(0.4 mg/mL)10 μL，分别连续进样5 次，结果黄芩苷的平均峰面积为225601 (RSD =0.35%);野黄芩苷的平均峰面积为3043702 (RSD=0.57%)。

2.6 稳定性试验 取2.3 项下样品溶液，室温放置0、4、8、12、16、20、24 小时后测定，结果测得的黄芩苷和野黄芩苷面积基本不变，RSD 分别为0.59%、0.82%，表明样品溶液在24 小时之内稳定。

2.7 加样回收率试验 取已知黄芩苷和野黄芩苷的黄芩茎部样品100.0 mg 共5 份，各精密加入黄芩苷对照品10.05 mg、野黄芩苷对照品8.05 mg，按样品溶液制备方法制备，依上述方法测定，结果黄芩苷、野黄芩苷平均回收率分别为100.04%(RSD=0.75%)和99.26%(RSD=1.21%)。

2.8 样品测定 按2.3 项，黄芩根、茎、叶配制样品溶液各3 份［5］，依法测定，黄芩苷、野黄芩苷含量及色谱峰出峰时间。结果见表1。

表1 样品测定结果(含量%，n=3)

3 讨论

中药黄芩的药用部位为植物黄芩的根，根据HPLC 分析的结果，黄芩根中黄芩苷的含量较高，因此可能是黄芩的主要活性成分。本实验测定的结果符合2010 年版药典中规定黄芩苷含量不得少于9.0%的标准，实际含量为10.872%，说明市场购买的黄芩药材质量尚可［6］。与文献［2］中黄芩茎、叶所含的野黄芩苷相比(0.641%)，本文所购茎、叶材料中含量更高(分别为2.257%和3.316%)，这可能与产地有关系，不同产地的黄芪药材中有效成分存在一定的差异［3］。另外，从实验结果来看，黄芩根、茎和叶不同的药理作用在化学成分的差异上得到了体现。黄芩茎、叶中黄芩苷的含量较低，主要成分为野黄芩苷，因此茎、叶部位虽然亦可药用，但不可代替黄芩药材。

［1］张永钦，周井炎，徐辉碧. 黄芩苷的抗氧化作用［J］.华中理工大学学报，1999，27 (4):110 － 112.

［2］李守拙，李沈明，范书铎. 黄芩茎叶中野黄芩苷含量测定［J］. 中草药，2000，31(12):910 － 912.

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［6］方婧，付梅红，杨洪军，等.微波协助提取在中药饮片含量测定中的应用(1)——微波法与药典法测定黄芩中黄芩苷含量比较研究［J］.中国实验方剂学，2011，17(21):46 －48.

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