HPLC法测定感冒清热颗粒中葛根素含量的不确定度评定

邢俊波，曹 红，单婷婷，水彩红，陈玉敏，胡 丹

(中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所，北京100071)

3.2.2.2 供试品定容体积的不确定度

根据常用玻璃量器计量检定规程可知:A级50 mL移液管的允许误差为±0.030 mL。按照矩形分布评定，不确定度分别为:

测量不确定度主要是为了检查测定结果的可疑程度，表征合理地赋予被测量之值的分散性与测量结果相联系的参数，在实验室管理中有着很重要的作用。本研究依据《中国药典》2010年版一部［1］，测定感冒清热颗粒中葛根素的含量，参考测量不确定度评定相关技术规范等相关资料［2－5］，分析了含量测定过程中的不确定度来源，对各成因做出了具体分析，为测量结果的准确性提供依据。

1 仪器与试药

Agilent 1200系列高效液相色谱仪;葛根素对照品(由中国药品生物制品检定所提供.110752－200511，供含量测定用，纯度为100%);感冒清热颗粒:由山西太行药业股份有限公司提供;乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯。

2 实验方法

2.1 色谱条件 色谱柱:SUPELCO Discovery C18(25 cm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 －水(11∶89);柱温:40 ℃，流速:1 mL·min－1;检测波长250 nm。

2.2 测定方法

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品适量，加30%乙醇制成每1 mL含16μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的内容物，研细，取0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)20 min，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μL)滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。按外标法计算葛根素的含量。

3 分析与结果

3.1 建立数学模型 含量计算公式如下:

式中，X为葛根素的含量(mg/袋);A样为供试品溶液中葛根素的色谱峰峰面积;V样为供试品溶液最后定容体积(mL);W为装量(g/袋);m样为供试品取样量(g);A对为对照品溶液中葛根素的色谱峰峰面积;C对为对照品的浓度(mg/mL):

其中m对为对照品称样量(mg);V1、V2、V3分别为葛根素对照品初次定容体积、稀释时移液管取样体积、最后定容体积(mL)。

3.2 不确定度各分量的量化

3.2.1 对照品溶液浓度和色谱峰的不确定度。对照品溶液浓度的不确定度来源于其质量的不确定度和稀释定容体积的不确定度，而质量不确定度是由称样量和纯度的不确定度组成。

3.2.1.1 葛根素对照品质量的不确定度

①葛根素对照品称样量分别为18.25 mg、18.44 mg。根据检定证书可知天平精度为 0.01 mg，按矩形分布计算，

②葛根素对照品纯度为100%。由于没有不确定度的其他说明，故假设为均匀分布，其区间的半宽×10－5

综合①、②，故葛根素对照品质量相对不确定度:

3.2.1.2 对照品稀释定容体积的不确定度

实验中使用了100 mL、25 mL容量瓶，及3 mL移液管，其最大允许误差分别为±0.10 mL、±0.015 mL、±0.03 mL。按照矩形分布评定，不确定度分别为:

3.2.1.3 对照品色谱峰峰面积的不确定度

葛根素对照品色谱峰面积是用双标双样平行法进行测定的，2份对照品峰面积分别为:795.024、794.115(平均峰面积为 794.570，R1=0.909);801.846、800.566(平均峰面积为 801.206，R2=1.280)。采用极差法计算，当n=2时，极差系数C=1.13。

对照品色谱峰峰面积的不确定度为:

3.2.1.4 对照品的相对不确定度

3.2.2 供试品溶液含量测定的不确定度评定 供试品溶液含量测定的不确定度来源于供试品溶液浓度和色谱峰测定的不确定度等。

3.2.2.1 供试品称量的不确定度

① 供试品称样量分别为 0.801 8 g、0.807 5 mg。根据检定证书可知天平精度为0.01 mg，按矩形分布计算，

3.2.2.2 供试品定容体积的不确定度

根据常用玻璃量器计量检定规程可知:A级50 mL移液管的允许误差为±0.030 mL。按照矩形分布评定，不确定度分别为:

3.2.2.3 供试品色谱峰峰面积的不确定度

供试品称样量分别为0.801 8 g、0.807 5 mg，每份供试液2次测量峰面积分别为:885.336、883.245(平均峰面积为 884.791，R1=1.091);890.454、890.316(平均峰面积为 890.386，R2=0.138)。采用极差法计算，当n=2时，极差系数C=1.13。

3.2.2.4 供试品的相对不确定度

3.3 合成相对不确定度

由测得结果合成不确定度为:

3.4 扩展不确定度

测定结果符合正态分布，在置信概率为95%时，选择包含因子k=2，则扩展不确定度为:u=urel×k=6.01 ×10－3×2=0.012。

3.5 测量不确定度报告

含量测定结果可表示为:X=(12.5±0.012)mg/袋。

4 讨论

本文评估出感冒清热颗粒含量测定的扩展不确定度为0.012 mg/袋，表明供试品测定结果的分散程度符合HPLC法对准确度的要求，测定结果准确、可靠。在分析评估不确定度时，因合成不确定度的数值几乎完全取决于重要的不确定度分量，所以应尽可能考虑产生不确定度的全部来源。由于本法中环境温度为20℃，故实验室温度变化而引起的偏差可忽略。结果显示，本方法测量结果的不确定度主要来自对照品稀释定容的过程，应予以注意。测量不确定度用于评估定量方法的可靠性和测量结果的可信程度，在药品检验中具有重要意义。

［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典:一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:1185－1186.

［2］ JJFlO59－1999，测量不确定度评定与表示［S］.北京:中国计量出版社，1999.

［3］ 李慎安.化学实验室测量不确定度［M］.北京:化学工业出版社，2006:10.

［4］ 国家质量技术监督局计量司组.测量不确定度评定与表示指南［M］.北京:中国计量出版社，2000:1.

［5］ 郑剑红，黄嚣嘉.HPLC法测定三黄片中大黄素和大黄酚含量的不确定度评定［J］.中国医药指南，2010，8(12):46 －48.

［6］ 赵霞，郭舒岗，谷日旭，等.高效液相色谱法测定果脯中柠檬黄含量的不确定度分析［J］.实用医技杂志，2012，19(4):378－379.