三裂叶豚草根际线虫种类调查

李俊环，曲 波，闫超杰，付海滨

(1.沈阳出入境检验检疫局，辽宁 沈阳 110016； 2.沈阳农业大学生物科学技术学院，辽宁 沈阳 110161；3.锦州出入境检验检疫局，辽宁 锦州 121013)

三裂叶豚草根际线虫种类调查

李俊环1，曲 波2，闫超杰3，付海滨1

(1.沈阳出入境检验检疫局，辽宁 沈阳 110016； 2.沈阳农业大学生物科学技术学院，辽宁 沈阳 110161；3.锦州出入境检验检疫局，辽宁 锦州 121013)

在辽宁境内10个三裂叶豚草(Ambrosiatrifida)多发地进行调查，采集豚草根际土壤，淘洗-过筛-重糖离心法分离线虫并镜检，分离出20个属的线虫，鉴定出7种：双宫螺旋线虫(Helicotylenchusdihystera)，钩形矮化线虫(Tylenchorhynchusaduncus)，小尾盾线虫(Scutellonemabrachyurus)，喜悦平滑垫刃线虫(Psilenchushilarulus)，畸形新头叶环线虫(Neolobocriconemaaberrans)，裂片真滑刃线虫(Aphelenchussparsus)和小茎线虫(Ditylenchusparvus)。同时，还分离到其他植物线虫、捕食性线虫、食细菌线虫和食真菌线虫。不同种类线虫出现的频率和数量差异较大。

三裂叶豚草；线虫；辽宁

豚草(Ambrosia)原产于美国西南部和墨西哥北部的索诺兰沙漠地区[1]，因其适应性强、入侵风险大，危害严重，所以被列为世界性恶性杂草。为消灭豚草，各国每年都投入大量资金进行防治，防治方法主要有人工拔除、化学除草、生物防治，虽取得一定成效，但始终不能完全根除[2]。辽宁省是豚草危害的重灾区，已报道的种类有普通豚草(A.artemisiifolia)和三裂叶豚草(A.trifida)[3]。

目前对豚草的研究主要集中在豚草的生物学特性、危害和防治等方面[1-4]。豚草根际线虫的研究仅在豚草根际土壤动物的研究中略有涉及，研究表明豚草对线虫有一定的抑制作用[5]。有关豚草根际线虫具体种类及线虫对豚草作用方面的研究鲜见报道，因此，本研究针对三裂叶豚草根际线虫的种类、结构组成及分布情况进行分析，以期为进一步明确不同线虫种类与三裂叶豚草间相互作用，进而为防治豚草提供基础资料。

1 材料与方法

1.1样地选择 2010年8月，在辽宁境内沿沈大高速公路选取10个三裂叶豚草多发地采样，在每个采样点采集根系及根际土(表1)。

1.2样品采集 选取三裂叶豚草，除去表面3～5 cm的表土、杂草，采集距离地表30 cm以内的根系及根际土300 g左右，装入塑料袋内，标明采集日期、地点、土壤类型。

表1 采样地信息 Table 1 Brief introduction of sampling sites

1.3线与虫分离 利用淘洗-过筛-重糖离心法分离线虫[6]，每份土样充分混匀，放入烧杯，加适量清水，搅拌后静置1 min。将上层悬浮液倒入套筛，套筛内径自上而下分别为830、150和38 μm。最后将38 μm筛子中的物体冲入离心管，2 000 r·min-1离心3 min。去掉上清液，加入适量蔗糖溶液(484 g蔗糖∶1 L蒸馏水)，搅拌后2000r·min-1离心3 min，取上清液倒入25 μm筛子中，淋洗筛子，收集含线虫的淋洗液。在60 ℃的水浴锅中加热10 min。加入等量的2×TAF固定线虫。

1.4线虫鉴定 在体视显微镜下将线虫挑到滴有固定液的玻片上，光学显微镜下进行线虫种属的鉴定。记录各项测量值，同时根据参考文献[7-11]进行线虫种的鉴定。线虫形态描述中采用的英文缩略语和符号意义如下，n：测量的线虫条数；L：体长；a：体长/最大体宽；b：体长/食道长；b′：体长/头端至食道腺末端的距离；c：体长/尾长；c′：尾长/肛门处虫体直径；V：头端至阴门的距离×100/体长；St：口针长度；Tail：尾长；Pus1：后阴子宫囊长与阴门处体宽的比值； Pus2：后阴子宫囊长×100/肛阴距距离； R：体环数；Rst：唇盘与口针基球之间的体环数；Roes：唇盘与贲门瓣之间的体环数；Rex：唇盘与排泄孔后第1环之间的体环数；Rv：阴门与尾端之间的体环数；Ran：肛门与尾端之间的体环数；m：口针针锥部长/口针长；o：口针基球至背食道腺开口的距离/口针长；Spi：交合刺长度。

2 结果与分析

2.1线虫鉴定

2.1.1双宫螺旋线虫(Helicotylenchusdihystera)

测量数据：

雌虫(n=20)，L=728.6(697.4～798.4) μm;a=29.7(28.3～32.1);b=6.0(5.7～6.3);b′=4.8(4.7～4.9);c=37.1(27.6～48.8);c′=1.0(0.9～1.1);V=61.8(60.5～62.9);St=26.0(22.6～32.8)μm;m=52.8(51.1～54.0);o=43.2(40.2～46.2)。

形态特征：

雌虫，温和热杀死后虫体呈螺旋形；侧区4条侧线；唇区与虫体连续不缢缩，有3～4条唇环；口针中等长度，口针基球后端圆形；中食道球卵圆形；半月体2个体环长，位于排泄孔前1～2个体环处；食道腺从腹面覆盖肠；双卵巢对伸，授精囊圆形，内无精子；侧尾腺孔小，孔状，位于肛门前4～5个体环间；尾较短，腹面有7～10条环纹；尾向腹面弯曲，尾末端常有一个腹向钝突起。

2.1.2钩形矮化线虫(Tylenchorhynchusaduncus)

测量数据：

雌虫(n=5)，L=637.6(599.7～700.6) μm;a=24.3(22.3～26.0);b=5.6(5.2～6.0);c=16.1(15.5～16.8);c′=3.0(2.8～3.2);V=56.8(55.0～61.6);Tail=36.1(30.5～41.2) μm;St=18.9(17.8～19.8) μm。

形态特征：

雌虫，经温和热杀死后虫体向腹面弯曲呈“C”形；体环明显；侧区有4条侧线；唇区较圆，明显缢缩，具4～5个唇环；口针强壮，口针基球圆形，向后倾斜；背食道腺开口到口针基球的距离2.1～2.6 μm；中食道球较大，卵圆形，食道瓣门明显；食道腺长梨形，与肠平截；阴门通常在体中后部，双卵巢对伸；尾圆锥形，向末端逐渐变细，尾末端无环纹；尾部有20～22个环纹。

2.1.3小尾盾线虫(Scutellonemabrachyurus)

测量数据：

雌虫(n=6)，L=841.9(710.7～948.5) μm;a=24.95(18.3～31.7);b=7.3(6.2～8.2);b′=5.8(5.4～7.4);c=54.7(44.8～67.9);c′=0.7(0.5～0.8);V=57.4(54.6～61.4);St=30.5(27.3～32.9) μm;Tail=16.2(12.5～20.3) μm。

形态特征：

雌虫，温和热杀死后虫体呈开放螺旋形或“6”字形，环纹清楚；唇区半球形，有4个明显的唇环，缢缩明显，头骨化明显；口针基球球形；背食道腺开口到口针基球的距离较短；食道腺从背面覆盖肠的末端；阴门在虫体中后部，阴门裂缝状，明显；双卵巢，对生；侧线4条；侧区在侧尾腺口处网格化；侧尾腺口较大，盾片状，位丁肛门后2～4体环处；尾短，圆柱形。

2.1.4喜悦平滑垫刃线虫(Psilenchushilarulus)

测量数据：

雌虫(n=15)，L=941.6(817.1～971.9) μm;a=42.9(36.7～47.7);b=6.3(5.8～7.7);c=7.1(5.7～7.6);c′=9.4(7.9～11.3);V=47.9(43.2～52.7);Tail=131.3(120.3～155.5) μm;St=13.8(11.5～14.2) μm。雄虫(n=3)，L=834.2(766.1～891.0) μm;a=38.7(32.2～41.3);b=5.6(5.0～6.3);c=7.0(6.7～7.4);c′=8.7(7.0～10.1);Spi=21.3(20.5～21.5) μm;St=12.0(11.3～13.7) μm。

形态特征：

雌虫,虫体细长，体表环纹细密；唇区较高，光滑，前端平圆，不缢缩；口针纤细，锥部长约为口针长的一半，无口针基球；食道前体部长筒形，中食道球卵圆形，位于食道中部稍后方，瓣门明显；后食道腺梨形，排泄孔位于食道腺前方，位置常有变化；阴门横裂，双卵巢对伸，授精囊长椭圆形；尾较长，末端膨大呈棍棒状。雄虫,虫体前部形态与雌虫相似。交合刺向腹面弯曲成弓形，引带纤细，交合伞包到尾长的35%～37%。

2.1.5畸形头叶环线虫(Neolobocriconemaaberrans)

测量数据：

雌虫(n=5)，L=363.2(359.5～455.1) μm;a=7.3(6.2～8.6);b=2.6(2.2～3.2);c=8.1(7.3～8.8);c′=1.0(0.8～1.3);V=83.0(81.2～84.3);R=37.6(37.0～40.0);Rst=7.0;Rex=12.6(12.0～13.0);Roes=13.2(13.0～14.0);Rv=3.2(3.0～4.0);Ran=2.4(2.0～3.0);St=71.9(67.5～75.1) μm;Tail=44.7(40.2～47.2) μm。

形态特征：

雌虫，虫体圆筒形略向腹面弯曲，头尾两端略尖，体环明显后翻；体环数为37～40条，比较粗大，后翻明显；头环2条，光滑，第1头环平，大如草帽，第2头环收缩小于第1头环，似颈；口针基球锚形，食道前体部与中食道球合并，中食道球发达，峡部粗而短，被神经环围绕，食道基球梨形；体环后缘钝齿状并有细小的棘片；阴门位于虫体后部，单生殖腺前伸；尾末端钝圆，棘片加长且聚集。

2.1.6裂片真滑刃线虫(Aphelenchussparsus)

测量数据：

雌虫(n=5)，L=709.2(656.3～773.0) μm;a=25.4(20.1～30.2);b=6.9(6.3～7.7);c=30.9(26.6～36.4);c′=1.6(1.3～1.9);V=76.9(74.9～78.9);Tail=24.9(21.0～27.5) μm;St=13.9(11.1～15.8) μm。

形态特征：

雌虫，虫体经温和热杀死后较直；虫体圆筒形，两端稍变细，表皮环纹细；体中部侧区具4～6条侧线；唇区较低，不缢缩，前端平圆；口针长11.1～15.8 μm，无口针基球；食道前体部圆筒形，中食道球较大，呈卵圆形；食道腺呈长叶状，从背侧覆盖肠；排泄孔位于中食道球后2/3～1个中食道球长度处；阴门位于虫体后部，阴道壁较厚，稍向前倾斜，阴门唇突起；前生单卵巢，卵母细胞单行排，前伸；后阴子宫囊短；尾较短，呈圆筒形，末端圆。

2.1.7小茎线虫(Ditylenchusparvus)

测量数据：

雌虫(n=20)，L=672.4(641.9～712.7) μm;a=36.1(31.5～42.1);b=5.0(4.7～6.1);c=9.6(9.1～10.6);c′=6.6(4.7～8.1);V=74.4(71.5～76.1);Pus1=2.7(1.8～3.9);Pus2=35.7(28.1～43.0);Tail=60.4(58.2～61.6) μm;St=7.6(7.1～8.1) μm。雄虫(n=1)，L=661.0 μm;a=40.2;b=5.7;c=9.9;c′=6.3;Spi=15.3 μm;St=7.6 μm。

形态特征：

雌虫，温和热杀死后虫体较直;唇区不缢缩，唇环不明显；侧区4条侧线，侧区约占体宽的1/3左右。口针锥部约是杆部长的1/2；中食道球呈细长的卵圆形，瓣门不明显；半月体位于后食道腺前部位置；后食道腺与肠平截，不覆盖肠；单卵巢前伸，授精囊发达，长圆形，内常充满圆形精子；后阴子宫囊较短，长度约为阴门处虫体直径的1.8～3.9倍；尾长是肛门处虫体直径的4.7～8.1倍，尾向末端逐渐变细，末端锐尖。雄虫，虫体前端形态与雌虫相似；交合刺成对;交合伞包盖尾端的21%;引带长5 μm;尾向末端逐渐变细，末端锐尖。

2.2线虫群体结构 在不同的土壤样品中均可分离到植物线虫、捕食性线虫、食真菌线虫和食细菌线虫(表2)。植物线虫为螺旋线虫属、小环线虫属等；捕食性线虫如长尾线虫属；食真菌线虫包括滑刃线虫属、真滑刃线虫属；食细菌线虫则为真头叶线虫属、小杆线虫属等。不同种类的线虫出现频率和数量差异较大。螺旋线虫出现频率最高，为50%，分别在辽阳市、灯塔市、鞍山市、海城市和瓦房店有发现，而且在鞍山市和瓦房店土样中数量较多。小杆线虫出现频率40%，辽阳市和灯塔市采样点小杆线虫数量相对较多。小环线虫出现频率30%，在每个采样点小环线虫数量均较少。矮化线虫、盾状线虫、新头叶环线虫、剑针线虫和拟长针线虫出现频率和数量均较少。鞍山市和瓦房店采样到线虫种类较多，分别有5种和6种。

3 讨论

本研究对三裂叶豚草根际土壤中线虫的种类进行初步调查，结果表明，辽宁部分地区分布的三裂叶豚草根际土壤线虫的种类较为丰富，涉及植物线虫、捕食性线虫、食真菌线虫和食细菌线虫，共鉴定出20个属的线虫。植物线虫为螺旋线虫属、小环线虫属等，捕食性线虫如长尾线虫属，食真菌线虫包括滑刃线虫属、真滑刃线虫属，食细菌线虫则为真头叶线虫属、小杆线虫属等。鉴定到种的有7种线虫：双宫螺旋线虫、喜悦平滑垫刃线虫、畸形新头叶环线虫、钩形矮化线虫、小尾盾线虫、裂片真滑刃线虫和小茎线虫。

表2 三裂叶豚草根际线虫群体结构Table 2 Composition of soil nematodes community of Ambrosia trifida

注：1～10条标注“+”，10～100条标注“++”，100条以上标注“+++”。

Note:“+” mean number of soil nematodes are 1-10, and “++”10-100, and “+++” more than 100.

孙刚等[5]在吉林调查了不同的豚草和三裂叶豚草群落，分析豚草对土壤动物4个优势类群(线虫类、弹尾类、甲螨类和线蚓类，鉴定到了纲、目水平)的作用，并从土壤动物个体数量和类群数变化的角度，指出豚草对于土壤线虫类群抑制作用强，普通豚草大于三裂叶豚草。未发现关于豚草根际线虫种类以及线虫是否对豚草有抑制作用等相关研究。此次分离到的植物线虫主要为根部外寄生线虫。寄生在根部的线虫可造成根系的衰弱、畸形或腐烂，致使植物地上部分的茎和叶发育不良甚至枯死[12]。这些植物线虫能否同样对三裂叶豚草的生长过程产生抑制作用，以及这种作用的大小及作用机制都有待明确。同时，因采样地点、采样量、寄主种类的限制，以及分离过程中未收集体长较大的种类，分离鉴定的线虫种类有限，需要进一步研究。

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InvestigationandidentificationofnematodesofAmbrosiatrifidaroot

LI Jun-huan1，QU Bo2，YAN Chao-jie3，FU Hai-bin1

(1.Shenyang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Shenyang 1100162, China; 2.College of Biological Technology, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161, China; 3.Jinzhou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Jinzhou 121013, China)

Seven nematodes species were investigated and identified fromAmbrosiatrifidaroot-soil samples which were collected from ten counties in Liaoning Province. They areHelicotylenchusdihystera,Tylenchorhynchusaduncus,Scutellonemabrachyurus,Psilenchushilarulus,Neolobocriconemaaberrans,Aphelenchussparsus,Ditylenchusparvus. Parasitic nematodes, predatory nematodes, bacterial-feeding nematodes and fungi-feeding nematodes from other plants were also studied. The frequency and the number of different types of nematodes species were quite different.

Ambrosiatrifida; nematodes; Liaoning

LI Jun-huan E-mail:wanltciq@sina.com

2011-12-02接受日期：2012-01-20

辽宁出入境检验检疫局科研项目(LK13-2010)；国家科技重大专项(2012zx07202004-001)

李俊环(1977-)，女，山东德州人，农艺师，硕士，主要从事植物检疫及食品微生物检测工作。E-mail:wanltciq@sina.com

S45

A

1001-0629(2013)01-0136-05