大豆低聚肽对试验动物血液指标的影响及其在猪体内的药代动力学研究

李海燕 宋琳琳 佟丽鑫

（吉林省通化市二道江区畜牧兽医总站，吉林通化 134003）

前言

低聚肽全营养蛋白质粉是以大豆低聚肽为主要功能性原料，结合人体营养标准，针对我国人体营养需求特点研制开发生产的新一代高科技功能性蛋白质食品，蛋白吸收率远高于常规蛋白质（是大豆分离蛋白的 1.5 倍），可不经肠胃消化，直接被人体100%吸收，同时具有多种生理活性功能，在快速补充蛋白质的同时具有促进脂肪代谢、增强免疫力、抗疲劳、增加肌肉力量、补充体力、调节血压、血脂的作用。由于大豆低聚肽的分子量较小，水溶性很高，即使在50%的高浓度下仍具有流动性，易于生产速溶饮品和高蛋白饮品。正由于大豆低聚肽比传统大豆蛋白更易消化吸收，能够迅速给肌体提供能量，无蛋白变性、无豆腥味，易溶于水，酸性条件下不产生沉淀，溶液粘度低，受热凝固，同时具有独特的生理功能等特性，因此具有十分广阔的开发应用前景。

本实验应用的大豆低聚肽是一种由2～6个氨基酸组成的、分子量在200～800 Dalton 的混合肽产品。与原蛋白相比，大豆低聚肽具有水溶性、持水性、起泡性，能在pH2～10的任何酸碱条件下完全溶解。大豆低聚肽能与其它食品配料完全溶合，并保持各自原有的物化及营养特性。本次实验通过对小鼠、大鼠及猪进行灌胃，研究大豆低聚肽对2型糖尿病小鼠的降血糖作用；对实验性高胆固醇血症小鼠的降胆固醇作用；对大鼠的全血粘性影响及在猪体内的药代动力学，为大豆低聚肽的应用提供借鉴。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药品

大豆低聚肽：由国家大豆深加工技术研究推广中心提供。

胆固醇：上海惠世生化试剂有限公司，分析纯。

葡萄糖：北京北化精细化学品有限责任公司，分析纯。

邻苯二甲醛：上海试剂一厂，化学纯。

邻甲苯胺：沈阳试剂一厂，分析纯。

肝素钠注射液上海生物化学制药厂生产，批号：011102。

丙基硫氧嘧啶：上海复星朝晖制药厂，批号：000503。

1.1.2 试验动物

小鼠：取体重18～22 g、25～30 g的小鼠各40只，前者雌性，后者雌雄各半。分别随机分成低、中、高、对照组和模型组五组，每组8只。

大鼠：取体重为200～250 g健康大鼠25只，雌雄各半。随机分为高、中、低和对照组和模型组五组，每组5只。

猪：取体重为60 kg健康猪4头，公母各半。

1.1.3 仪器

离心机、震荡器、吸量管、水浴锅、751分光光度计、离心管、棉球、剪刀、手术刀、镊子、抗凝血玻璃管、全自动血液粘度仪、容量瓶、烧杯、量筒、试管架、BASC半自动生化仪（法国）、胆固醇试剂盒（北京中生公司）、JKDL%4自清洗旋转式粘度计（北京普利生）。

1.2 方法

1.2.1 血糖的测定（邻甲苯胺法）

试验鼠禁食4h后，按低、中、高剂量实验组分别灌胃给予大豆低聚肽50、100和150 mg/kg·d，灌胃1次/d，30 d后采集数据，在处死前禁食12 h，颈动脉取血，取出的全血放入37℃烘箱中30 min，随后置于4℃冰箱中冷却，离心5 min，取出血清，检测空腹血糖。

1.2.2 血脂的测定（邻苯二甲醛法）

空白组喂食普通饲料，其它组喂食高脂饲料。试验鼠禁食4h后，按低、中、高剂量实验组分别灌胃给予大豆低聚肽50、100和150mg/kg·d，灌胃1次/d，给药及样本采集按体表面积换算，高剂量为临床用量的2.5倍，低剂量为临床等效量，其它各组分别灌胃给予生理盐水（空白组与模型组），于末次给药后禁食12 h，眼眶后静脉丛取血，2 500转15 min离心，取血清测定胆固醇。

1.2.3 血液粘度的测定

于末次给药2 min后，除对照组外，其余各组分别皮下注射1%肾上腺素0.06ml/100g，共2次，每次间隔4h，中间将大鼠置于－10℃环境中冷刺激30 min（低温冰箱），处理停食，于18 h后乙醚麻醉，分离双侧颈动脉取血，血样用肝素钠抗凝，充分混匀不得凝血（每1 250u抗凝3～4 ml全血），进行全血粘度测定。测定结果用SPSS.v1.2软件版统计软件统计，进行方差分析；多组间两两比较用单因素方差分析。

1.2.4 试验猪

禁食0.5 h后，灌胃给与100 mg/kg体重的大豆低聚肽，给药后不同时间采血，采用三氯醋酸溶液除去血中的蛋白质，用分光光度计测定无蛋白血滤液的OD值并计算血中的药物浓度。

2 结果与分析

2.1 结果

2.1.1 大豆低聚肽对糖尿病模型小鼠血糖的影响

大豆低聚肽对糖尿病模型小鼠血糖的影响参见表1。

表1 大豆低聚肽对糖尿病模型小鼠血糖

由表1可见：试验组小鼠的血糖含量明显低于模型组，差异显著，但与对照组血糖含量差异不显著。

2.1.2 大豆低聚肽对小鼠实验性高胆固醇血症的影响

由表2可知，模型组与空白对照组比，血清胆固醇明显升高，大豆低聚肽高低剂量组与模型组比血清胆固醇含量明显降低，证明所采用的动物模型是成功的，大豆低聚肽的药效与预期相符。

2.1.3 大豆低聚肽对大鼠全血粘度的影响

由表3可见：模型组与空白对照组，各项数据经统计学处理后，其结果有显著性差异，说明造模成功；药物组全血粘度（高切，中切）均低于空白对照组，而且由高剂量到低剂量全血粘度逐渐升高，说明大豆低聚肽对生理状况下动物的全血液粘度有明显的降低作用。

表3 大豆低聚肽对大鼠全血粘度（x±S，n=5）

2.1.4 大豆低聚肽对猪的药代动力学

给药前与大豆低聚肽单剂量100 mg/ kg 灌胃给药后于0.08，0.16，0.25，0.33，0.5，0.75，1.0，1.5，2，2.5，3，3.5，4，4.5，5，5.5，6，7，8，9，10，12，14，16，18，20，22，24h后采血样，依样品测定方法操作，大豆低聚肽在猪血浆中的浓度时间曲线如图1所示。

图1 猪血浆中的浓度时间曲线

由图1可见，大豆低聚肽在猪体内吸收极快（5 min），且分布半衰期较小（12 h），说明大豆低聚肽灌胃在猪体内分布较快。

2.2 分析

通过本次试验，大豆低聚肽在一定程度上能降低2型糖尿病小鼠模型的血糖值的作用；不同剂量大豆低聚肽均能使小鼠血清胆固醇降低，可见大豆低聚肽可显著降低小鼠实验性高胆固醇血症的血清胆固醇，预防高脂血症；大豆低聚肽对生理状况下动物的全血液粘度有明显的降低作用；猪灌胃给予大豆低聚肽后，大豆低聚肽在给药5 min后入血，给药10 min左右血中药物浓度达到最高值。大豆低聚肽在猪体内的半衰期约为12 h。在猪体内，药物动力学数据并不能完全解释临床条件下的效果，只有将临床效果结合起来才能决定药物的代谢情况。

3 讨论

由于大豆低聚肽能有效提高机体免疫力，降低糖尿病患者的血糖，防止糖尿病的合并症的发生。加快糖尿病人的机体恢复。因此大豆低聚肽对糖尿病具有辅助治疗作用。

给动物喂食大豆低聚肽，血清中的胆固醇显著下降，粪便中的胆固醇含量增加，证明大豆肽能阻止胆固醇在大肠中的吸收。大肠除排泄功能外还有吸收功能，对人体有害的物质（包括胆固醇）如被大肠重新吸收对人体是非常有害的，大豆肽能刺激甲状腺素分泌，促进胆汁酸化，使胆固醇排出体外。

大豆低聚肽与大豆蛋白虽然氨基酸组成数量不同，分子结构不同，但氨基酸结构未变，必需氨基酸，含量丰富，保留了原蛋白的营养特性，而且通过蛋白质的改性作用消除了原蛋白中的营养抑制因子，使蛋白吸收利用效率提高。在人体内，肽的运行体系与氨基酸相比具有吸收快、能耗低、转化体能周期短的优点。

人类所需的营养素多种多样，但蛋白质是人体所需第一营养素，“没有蛋白质就没有生命”，人体生长发育、病后恢复、器官构成、容颜气色、能量供给、“健康、美容、长寿”无不与蛋白质密切相关。说明大豆低聚肽在人们日常生活中的应用具有很好的前景。