氧氟沙星滴眼液无菌检查方法的建立

赵雪卫 王红然 张西果(石家庄格瑞药业有限公司)

氧氟沙星滴眼液具有抗菌谱广、抗菌活性强的特点，对革兰氏阴性菌、阳性菌群均有较强的抗菌作用。 对葡萄球菌、化脓性链球菌、溶血性链球菌、肠球菌、肺炎球菌、大肠杆菌、柠檬酸细菌属、肺炎杆菌、肠菌属、沙雷氏菌属、变形杆菌属、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、不动杆菌属、弯曲杆菌属、衣原体属敏感性菌种等感染有效。 因此被用于治疗细菌性结膜炎、角膜炎、角膜溃疡、泪囊炎、术后感染等外眼感染。 《中国药典》2010 年版二部将滴眼液的微生物限度检查项目修订为无菌检查项目。 根据《中国药典》2010 年版二部的规定当建立药品的无菌检查方法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适用于该药品的无菌检查。针对氧氟沙星滴眼液的抑菌性质采用适宜的方法消除其抑菌活性，建立了该品种的无菌检查方法。

表1 阳性对照试验菌不同冲洗量的结果

一、 样品与菌种

1.1 样品：氧氟沙星滴眼液。 规格：5ml∶15mg；批号：121101、121102、121103

1.2 验证试验用菌种：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉六种阳性对照试验菌，菌种来源于中检所。

二、 实验与结果

2.1 菌液制备：按《中国药典》2010 年版二部附录XI H 进行。

2.2 供试品制备：取样品原液作为供试品，每筒过滤供试品10 支。

2.3 薄膜过滤法：取一次性全封闭集菌三联培养器，先用含0.5%聚山梨酯80 的PH7.0 无

菌氯化钠-蛋白胨缓冲液少量润湿滤膜。 将供试品30 支通过培养器， 供试品全部过滤完毕后， 用含0.5%聚山梨酯80 的PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗， 细菌每筒分别冲洗400ml、500ml、600ml，真菌每筒分别冲洗300ml、400ml、500ml，每次冲洗100ml， 在最后一次冲洗液中加入小于100cfu 的各阳性对照试验菌，过滤，每筒培养器中加入100ml 含0.2mol/L 硫酸镁5ml 的硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基， 作为试验组筒。 另取已润湿的全封闭培养器加入阳性对照试验菌和相应培养基，作为阳性对照筒，再取已润湿的二联全封闭培养器，加入相应培养基，作为阴性对照筒。 按规定温度培养3～5 天，观察不同冲洗量对六种阳性对照试验菌的影响，结果见表1。

三、讨论

3.1 氧氟沙星滴眼液是喹诺酮类药物，抗菌谱广，抗菌性强，薄膜过滤时易吸附残留于滤膜上，冲洗不干净，即使浓度低，也抑制部分阳性试验菌的生长。 因此在样品过滤冲洗后与培养基中加入含Fe+2、Mn+2、Mg+2 等离子的化合物， 这些离子与喹诺酮类药物络合，能形成稳定的六元环络合物。 掩盖氟喹诺酮类药物的抗菌活性基团。使其抗菌活性消失。本文采用的是含0.5%聚山梨酯80 的PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液作为冲洗液，冲洗后加培养基， 于100ml 硫乙醇酸盐流体培养基中加5ml 灭菌的0.2mol/L 硫酸镁溶液，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌均生长良好。 5ml 灭菌的0.2mol/L 硫酸镁溶液对这四种菌的生长也几无影响。 培养基中加灭活剂硫酸镁，可减少冲洗量。

3.2 氧氟沙星滴眼液对真菌也几无抑制作用，但滴眼液中含羟苯乙酯等防腐剂，因此白色念珠菌、黑曲霉验证也要进行适当的冲洗，才能保证对其无抑菌作用。

[1]国家药典委员会；中华人民共和国药典（二部）；北京：中国医药科技出版社，2010 年版，附录：103-107。

[2]高红 李凯 朱慧琴；盐酸左氧氟沙星滴眼液无菌检查方法的建立；中国科技纵横杂志，2011, 21（6）：357-357。