不同产地益母草中总生物碱含量的比较

袁王俊，张维瑞，李 勉，李昌勤

（河南大学 中药研究所，河南 开封475004）

益母草为唇形科植物益母草［Leonurus artemisia（Lour.）S.Y.Hu］的新鲜或干燥地上部分。具有活血调经、利尿消肿、清热解毒等功效。用于月经不调、痛经经闭、恶露不尽、水肿尿少、疮疡肿毒［1－2］。益母草主要含有生物碱类、黄酮类、二萜类、挥发油类等化学成分，其中的药用有效成分为生物碱，现已知包括水苏碱、益母草碱等。益母草总生物碱具有明显的抗炎、镇痛、抗痛经等作用。目前，文献记载测定生物碱的方法有：滴定法、离子交换法、雷氏铵盐沉淀溶解比色法、紫外分光光度法、薄层色谱法等。我国益母草资源丰富，在大部分地区都有分布。我们采用紫外分光光度法，测定了采自栾川、开封、南阳、方城、内乡、鲁山、连云港7个地区10个批次的益母草总生物碱的含量，为益母草药材优选提供一定的参考。

1 药材与仪器

1.1 药材来源

益母草分别采自洛阳栾川、开封、南阳、方城、内乡、鲁山、连云港7个地区，经河南大学中药研究所鉴定为唇形科植物益母草［Leonuri Artemisia（Lour.）S.Y.Hu］的干燥地上部分。

1.2 仪器

WFZ-26A紫外可见分光光度计（天津光学仪器厂），KQ 5200DA型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

2 方法与结果

2.1 测定方法依据

本文采用雷氏铵盐法进行沉淀浓缩，紫外可见分光光度法进行含量测定。即利用雷氏铵盐在酸性介质中可与大部分生物碱类药物定量地生成难溶于水的铬合物［3－4］。把生物碱的硫氰酸铬铵盐沉淀溶于丙酮中，所得的紫红色溶液在波长510nm处有最大吸收，可得到公式W ＝AMV／εM＝179.5，是益母草中含量较多的水苏碱盐酸盐（C7H13NO2·HCl）的相对分子质量。ε＝106.5，是硫氰酸铬铵在丙酮中的摩尔分子吸收系数；V是溶解沉淀所取丙酮的毫升数；测其吸收度A，则可得到对应的含量W （mg），故公式变为：W ＝179.5 VA／106.5。以此公式测吸光度A，计算出益母草总生物碱的含量。

2.2 供试品溶液的制备

取益母草干燥药材，粉碎，过60目筛。称取不同产地的益母草各5.0g，加入体积分数为95%的乙醇100mL，静置过夜。用40kHz强度的超声波提取40min，提取液减压抽滤；将滤液于70℃水浴上蒸馏回收溶剂，在蒸干物中加入0.1mol／L HCl溶解，过滤。用同样盐酸10mL洗涤，定容于25mL容量瓶中，各吸取定容溶液12mL于锥形瓶中，加入0.1mol／L的盐酸12mL，再缓缓滴加新鲜配制的体积分数为2%雷氏铵盐溶液12mL，放置冰箱过夜，减压抽滤。用10mL冰水分次洗涤沉淀1～2次，抽干。沉淀用丙酮溶解于5mL容量瓶中定容。

2.3 样品测定

以丙酮为空白，在最大吸收波长510nm处测定吸光度，按上述方法计算含量，即得益母草中总生物碱的含量（mg／g）。结果见表1。

3 方法学考察

3.1 精密度试验

取连云港益母草粉末5.0g，连续测定5次吸光度，吸光度分别为0.3612、0.3756、0.3483、0.3827、0.3905，RSD%为4.56，表明仪器精密度良好。

3.2 稳定性试验

取连云港益母草供试品溶液于室温避光放置，每隔10min测定1次吸光度，记录供试品溶液吸收度A值。该试验结果表明，供试品溶液在30～60min内稳定性良好。因此，测定控制在30～60min。结果见表2。

3.3 重复性试验

取连云港益母草粉末5份，各5.0g，吸光度分别为1.396、1.325、1.457、1.243、1.433，RSD%为6.36，结果表明，重复性试验符合要求。

表1 益母草总生物碱含量结果

表2 稳定性试验结果

4 讨论

采用紫外可见分光光度法，测定了我国7个地区10份益母草中总生物碱的含量，结果表明，不同产地的益母草总生物碱含量差异很大。方城益母草总碱含量最高（13.598mg／g），连 云 港 益 母 草 总 碱 含 量 最 低（1.329mg／g）。来自栾川的3个样品总生物碱含量基本接近（分别为1.392、1.545、1.696mg／g），而来自鲁山的2个样品总生物碱含量有较大差异，分别为3.706、7.176mg／g。由此可见，不同产地的益母草品质有很大差异。由于试验所用益母草药材均由我们统一采集，采集时间一致，加工、测定方法相同，而且，其有效成分生物碱又较为稳定，我们认为，产地环境是决定药材质量的主要原因，不同物候条件（如土壤pH、温度、光照等）对益母草总生物碱的积累有很大的影响，其中以土壤pH为最显著。现已知，碱性土壤的北方地区比酸性土壤的南方地区益母草总生物碱的平均含量要高许多［5］。同一产地的不同个体间也可能存在较大的差异，这主要是由遗传因素引起。因此，很有必要对益母草个体间差异进行分析，从中选择出有效成分含量高的优良株系。

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：化学工业出版社，2010：272－273.

［2］丛悦，王艳，谢欣梅，等.HPLC-UV法测定益母草和酒炙益母草中丁香酸和芦丁的含量［J］.河南大学学报：自然科学版，2010，40（5）：507－510.

［3］许小华，杜绍亮，杨云.益母草中总生物碱的提取及含量测定［J］.河南科学，2008，26（12）：1 481－1 482.

［4］李勉，刘广河，王雁，等.分光光度法测定开封培育菊花中总黄酮含量［J］.河南大学学报：医学版，2011，30（3）：174－176.

［5］姜智蛟，李林.野生和栽培益母草中总生物碱和黄酮质量分数的比较［J］.东北林业大学学报，2009，37（4）：32－33.